1、少突膠質細胞來源的Nogo-A是中樞神經系統(tǒng)（Central nervous system，CNS）重要的軸突抑制因子，其作用機制和信號通路已經研究得很清楚。然而，近年來多項研究提示，除高表達于少突膠質細胞中，Nogo-A在多種類型的神經元中也呈高表達，至此，神經元Nogo-A的功能開始被廣泛重視。利用基因剔除小鼠，多組研究發(fā)現神經元中的Nogo-A在皮層發(fā)育，神經元遷移與分化，生長錐活性調節(jié)，突觸穩(wěn)定性，突起生長以及穩(wěn)定內膜系統(tǒng)的結構

2、等過程中都發(fā)揮著重要作用。另外，神經退行性疾病小鼠動物模型以及癲癇（Seizure）和老年癡呆癥（Alzheimer disease，AD）等疾病標本的組織學結果也提示，神經元Nogo-A表達的改變可能與神經退行性疾病的進程有關。本實驗室前期的研究顯示神經元的Nogo-A蛋白主要定位于內質網、多聚核糖體和細胞核內的染色質上，提示Nogo-A可能與神經元的某些自主性功能有關。本研究旨在系統(tǒng)探討神經元中Nogo-A新的自主性功能。
　

3、　獲得的主要結果如下：
　　1.利用免疫細胞化學染色、亞細胞分級分離和Western blot等手段系統(tǒng)考察了神經元中Nogo-A的分布與定位情況。結果顯示，Nogo-A高表達于胚胎18天大鼠來源的培養(yǎng)皮層神經元的胞體、樹突和軸突中。而且，與少突膠質細胞不同的是，神經元中氨基端Nogo-A(amino-Nogo-A,186-1004aa)位于細胞內。進一步，Cos7細胞過表達 Nogo-A實驗證明，Nogo-A高表達于線粒體、內質

4、網和高爾基體以及微管豐富的區(qū)域。對Neuro2A細胞進行免疫熒光雙標染色，顯示Nogo-A定位于中心體以及周圍區(qū)域。
　　2.利用TAT蛋白轉導技術探討神經元中Nogo-A/amino-Nogo-A的功能，首次發(fā)現 Nogo-A/amino-Nogo-A可以拮抗氧化應激從而保護神經元。首先，在過氧化氫（H2O2）誘導的皮層神經元氧化應激（Oxidative stress）細胞模型上，轉導TAT-amino-Nogo-A（TAT-A

5、M），結果顯示TAT-AM對H2O2誘導的神經元損傷具有顯著的保護作用；利用RNA干擾技術下調內源性Nogo-A表達則增加神經元對氧化應激的易感性。進一步，利用超氧陰離子探針（Dihydroethidium，DHE）檢測細胞內的活性氧自由基（Reactive oxygen species,ROS）水平，結果顯示，TAT-AM能夠顯著減少H2O2誘導的神經元細胞內ROS的增加，進而抑制 H2O2誘導的ERK1/2（Extracellula

6、r signal-regulated kinases）的激活和抗凋亡蛋白Bcl-2的減少。截斷體實驗結果表明，位于Nogo-A特異中間段的290-562 aa是amino-Nogo-A行使神經保護功能的關鍵區(qū)段。利用GST pull down和Ni2+ pull down實驗，我們獲得了amino-Nogo-A和Prdx2（Peroxiredoxin2）相互作用的證據。突變體實驗進一步表明, amino-Nogo-A與Prdx2相互作用

7、降低ROS的水平依賴于關鍵區(qū)段的424，464和559位點的半胱氨酸（Cys）。
　　3.首次發(fā)現Neuro2A細胞中Nogo-A有中心體定位。進一步研究證明，Cos7細胞中過表達 Nogo-A可以調節(jié)乙?；⒐艿霓D位。功能學實驗顯示，在VPA誘導的Neuro2A神經元分化模型上，利用RNA干擾技術下調內源性Nogo-A表達后，細胞分化率和分化細胞的突起總長度顯著下降，提示神經元中的Nogo-A可能正向調控神經元分化和突起生長。<