1、分類號：密級：UDC：學號：405604411013南昌大學碩士研究生學位論文池蝶蚌脂多糖誘導的腫瘤壞死因子池蝶蚌脂多糖誘導的腫瘤壞死因子LITAF基因的克基因的克隆及對隆及對Hela細胞的凋亡效應(yīng)細胞的凋亡效應(yīng)CloningofLPSinducedTNFαfact(LITAF)fromfreshwaterpearlmusselHyriopsisschlegeliiitsapoptoticeffectonHelacells王誠遠培養(yǎng)單位

2、（院、系）：生命科學與食品工程學院指導教師姓名、職稱：洪一江教授申請學位的學科門類：理學學科專業(yè)名稱：動物學論文答辯日期：2014年5月27日答辯委員會主席：評閱人：2014年月日摘要III摘要脂多糖誘導的腫瘤壞死因子（LipopolysacideinducedTNFαfactLITAF）是一類新發(fā)現(xiàn)的重要的轉(zhuǎn)錄因子，該因子介導TNFα和各種炎癥因子的表達，在先天性免疫中扮演著重要的角色。目前，我們克隆了池蝶蚌LITAF基因的的cDNA

3、序列（定義為HsLITAF）。結(jié)果顯示該cDNA序列包含453個核苷酸的開放閱讀框，編碼150個氨基酸，同已知物種的LITAF序列具有34%73.3%的氨基酸同源性。該推導的HsLITAF多肽分子質(zhì)量為16.08KDa，等電點為8.04。序列比對發(fā)現(xiàn)HsLITAF在C末端有完整的LITAF功能域，包含兩個CXXC模式域且該結(jié)構(gòu)形成Zn2指結(jié)構(gòu)。進一步分析發(fā)現(xiàn)擴增該段基因的上下游引物是相同的，且在池蝶蚌閉殼肌、斧足、性腺、肝胰腺、鰓、外套

4、膜和血淋巴等組織中都檢測到除上述之外的另外一種形式，兩種形式分別命名為LITAF1和LITAF2，且兩種形式的cDNA序列在數(shù)量上只相差24個堿基和9個氨基酸。用該引物檢測基因組，未發(fā)現(xiàn)內(nèi)含子。熒光定量結(jié)果顯示HsLITAF在鰓中表達量最高，在肝胰腺，血淋巴，閉殼肌和性腺中表達量適中，而在心臟和外套膜中表達量最低。在LPS刺激后，血淋巴HsLITAF表達量在6h、24h和48h降低，但是在刺激72h后，其表達量顯著性地上調(diào)且為對照組的3

5、9倍。推測池蝶蚌LITAF參與了先天性免疫反應(yīng)。為了進一步研究HsLITAF的生物學功能，我們構(gòu)建了pcDNA3.1（）HsLITAF表達載體，并轉(zhuǎn)染進Hela細胞。流式細胞儀及RTPCR分析顯示實驗組Hela細胞發(fā)生更高的凋亡率，并顯著上調(diào)凋亡基因p53及Bax的表達，是對照組的2.99倍和2.53倍。據(jù)此，我們推測線粒體可能參與了LITAF誘導的凋亡。該研究為了解HsLITAF的功能及誘導凋亡的信號通路提供了新視角。關(guān)鍵詞鍵詞:池蝶