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簡介：研究背景我國是世界上乙肝病毒感染的高度流行區(qū)之一，人群中慢性HBSAG攜帶率約為10％，導(dǎo)致了嚴重的公共衛(wèi)生問題。我國的慢性HBSAG攜帶者有30％～50％是由于圍產(chǎn)期的母嬰傳播造成的。隨著乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白在新生兒中普及應(yīng)用，已使約90％以上的圍產(chǎn)期母嬰傳播得以阻斷，但仍有5％～10％的嬰兒免疫阻斷失敗，宮內(nèi)感染是其主要原因之一。因此弄清宮內(nèi)HBV感染機制及危險因素，明確嬰兒出生后乙肝病毒標志物的動態(tài)變化，對我國HBV感染的進一步控制有著重要的意義。研究目的1通過病例對照研究進一步探討新生兒出生時HBSAG陽性的危險因素。2通過隨訪研究了解新生兒外周血清HBSAG、HBEAG的動態(tài)變化，探討其臨床和流行病學(xué)意義。研究方法1從2002年12月至2005年10月在陜西省婦幼保健院連續(xù)收集HBSAG陽性的326例孕婦及其335例新生兒為研究對象，以外周血HBSAG陽性的新生兒為病例組，余為對照組，收集孕婦孕前、孕期及產(chǎn)時的醫(yī)學(xué)事件；采集孕婦及新生兒外周血，檢測他們外周血清中的HBVM，采用單因素分析、多因素LOGISTIC回歸分析等統(tǒng)計方法進行新生兒出生時HBSAG陽性危險因素的病例對照研究。2同時，以上述研究對象的前251例HBSAG陽性母親的260例嬰兒為隨訪對象，觀察嬰兒1年中血清HBSAG、HBEAG的動態(tài)變化。3血清學(xué)指標檢測方法母親血清HBSAG、HBEAG采用ELISA法檢測；新生兒血清HBSAG采用化學(xué)發(fā)光法檢測，抗HBS、HBEAG采用ELISA法檢測；隨訪嬰兒血清HBSAG、抗HBS、HBEAG采用ELISA法檢測；母親及新生兒血清HBVDNA采用PCR法檢測。研究結(jié)論1孕婦HBEAG陽性、HBVDNA陽性、孕中期性行為是新生兒出生時HBSAG陽性的危險因素。2母親HBEAG可經(jīng)胎盤被動傳遞給胎兒，且會在一定時間內(nèi)逐漸轉(zhuǎn)陰，故不可作為HBV宮內(nèi)感染的診斷指標。新生兒外周血HBSAG大多數(shù)很有可能是在生產(chǎn)時從母血瞬間進入胎兒體內(nèi)而獲得，因為80％以上新生兒的HBSAG均在隨訪中轉(zhuǎn)陰，因此對出生時HBSAG陽性新生兒生后1年內(nèi)的隨訪可能是判斷其是否發(fā)生HBV宮內(nèi)感染的更為可靠的方法。

簡介：熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染血管內(nèi)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1??????????1??????????31．3前言???????????????????????51．4材料與方法????????????????????71．5結(jié)果???????????????????????121．6討論???????????????????????161．7結(jié)論???????????????????????221．8參考文獻?????????????????????231．9英漢縮略詞對照表?????????????????262致謝???????????????????????273血管內(nèi)皮祖細胞促腫瘤生長研究進展綜述?????28染血管內(nèi)皮祖細胞的可行性和方法。方法采用密度梯度離心法和貼壁細胞分離法相結(jié)合，分離和篩選出人臍帶血內(nèi)皮祖細胞，用EGM．2培養(yǎng)基培養(yǎng)、擴增，采用細胞免疫熒光染色和流式細胞儀檢測內(nèi)皮祖細胞表面標記CDL33、CD34、VEGFR．2的方法鑒定實驗培養(yǎng)的內(nèi)皮祖細胞。取生長活躍的EPCS，以HIV1來源的慢病毒為載體，以綠色熒光蛋白GFP基因為目的基因轉(zhuǎn)染EPCS。感染復(fù)數(shù)M01分別為110，L50，1100，MTT法檢測不同病毒滴度時細胞增殖情況，計算轉(zhuǎn)染率；取150轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染的空白組進行對照，于轉(zhuǎn)染后1．10天觀察兩組細胞增殖情況。用T檢驗、卡方檢驗、方差分析等方法對實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，尺O．05有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果單個核細胞經(jīng)EGM．2培養(yǎng)基培養(yǎng)一周后，即分化成CDL33、I①R和CD34陽性的EPCS。110轉(zhuǎn)染和150轉(zhuǎn)染后細胞增殖無明顯影響，細胞顯綠色熒光。110比率轉(zhuǎn)染后48小時綠色熒光細胞比率僅35．2士2．75％；150比率轉(zhuǎn)染后48小時熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染率為87．4土1．89％，轉(zhuǎn)染率高于110組火O．05。150轉(zhuǎn)染后的細胞繼續(xù)培養(yǎng)并與未轉(zhuǎn)染組對照，顯示兩組細胞生長曲線無明顯差異PO．05。1100比率轉(zhuǎn)染后，細胞的增殖處于停滯狀態(tài)，鏡下可見細胞壞死形成碎片。結(jié)論L、采用密國家自然基金項目項目號30700876L㈣57

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簡介：漢坦病毒HANTAVIRUSESHV屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬其基因組由三段單股負鏈RNA組成每個片段的兩末端均有長約20個堿基左右的互補序列國外學(xué)者對引起漢坦病毒肺綜合征的漢坦病毒的基因重排進行了研究但迄今為止對其它型別漢坦病毒之間是否能發(fā)生基因重排國內(nèi)外尚未見報導(dǎo)該文研究用相同滴度的漢坦病毒HTN型與SEO型76118株與SR11株及漢坦病毒BTN型與PHV型76118株與PHV株毒株分別混合感染VEROE6細胞不同時間刮片做免疫熒光檢測分別用針對漢坦病毒HTN型與SEO型、HTN型與PHV型的L、M、S三個基因片段的分型引物對子代病毒進行RTPCR實驗以確定子代病毒L、M、S片段核酸的來源鑒定子代病毒基因型

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簡介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文非癡呆非抑郁帕金森病患者額葉認知功能和事件相關(guān)電位相關(guān)性研究姓名孔巖申請學(xué)位級別碩士專業(yè)神經(jīng)內(nèi)科指導(dǎo)教師陳謀森20020401韭塹墨韭地塑蟑壘鑫疸題吐達塑麴篚塑蔓仕擔(dān)羞曳僮擔(dān)蓉性疆塞墑要THECORRELATIVITYOFPREFRONTALCOGNITIVEDYSFUNCTIONWITHAUDITORYERPINNONDEMENTEDANDNONDEPRESSEDPARKINSON’SDISEASEABSTRACTOBJECTIVETHISSTUDYWASDESIGNEDTOEVALUATEDTHECORRECTIVITYOFPREFRONTALCOGNITIVEDYSFUNCTIONWITHAUDITORYEVENTRELATEDPOTENTIALINNONDEMENTEDANDNONDEPRESSEDPARKINSON’SDISEASEMETHODSAUDITORYODDBALLPARADIGMWASEMPLOYEDTOEVOKEEVENTRELATEDPOTENTIALSP300IN31NONDEMENTEDANDNONDEPRESSEDPATIENTSWITHPARKINSON’SDISEASEPD，ANDIN25NORMALSUBJECTSWELTMATCHEDFORAGE，SEX，ANDEDUCATIONTHREETESTSVERBALFLUENCYTRAILMAKINGANDSTROOPWORDCOLORTEST，WHICHARECONSIDEREDTOSENSITIVETOPREFRONTALCOGNITIVEDYSFUNCTION，WASEXAMINEDINTHEMATTHESAMETIMERESULTSPARKINSONIANPATIENTSHADLONGERLATENCYOFEVENTRELATEDPOTITIALERPTHANNORMALSUBJECTS，WHILETHEPREFRONTALCOGNITIVESTATEWASFOUNDDETERIORATEDINPDERPCHANGESWERECORRELATEDWITHTHECOGNITIVESTATEPDWITHTHELOWESTSCORESONPREFRONTALNEUROPSYCHOLOGICALTESTSSUCHASSTROOPWORDCOLORTEST，TRAILMAKING，WORDFLUENCYALSOHADTHELONGESTP300LATENCYIL

簡介：目的人呼吸道合胞病毒HUMANRESPIRATYSYNCYTIALVIRUS，RSV廣泛分布于世界各地，是導(dǎo)致嬰幼兒嚴重下呼吸道感染最重要的病毒病原。病毒感染機體后的免疫保護機制尚未明確，也無特異性防治方法。RSV融合糖蛋白FUSIONGLYCOPROTEIN，F(xiàn)和吸附蛋白ATTACHMENTGLYCOPROTEIN，G是RSV僅有的兩種中和抗原。RSV只有一種血清型，主要由于G蛋白抗原性的差異，可進一步分為A和B兩種抗原亞型。F蛋白在RSV不同亞型間具有高度的抗原同源性，是主要的交叉保護性抗原。本研究擬克隆RSVF基因，采用非復(fù)制型腺病毒載體，利用同源重組方法，構(gòu)建含有F基因的非復(fù)制型腺病毒重組體，獲得一株可表達RSVF的非復(fù)制型重組腺病毒FGADHRSVF，用于體內(nèi)免疫效果及免疫保護作用的研究。方法本文根據(jù)F基因堿基序列，設(shè)計并合成引物，以F基因逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物CDNA為模板，采用高保真DNA聚合酶，PCR擴增，得到F基因編碼序列。然后克隆到PGEM3ZF載體中，序列測定正確后，將其亞克隆到真核表達載體PCDNA31上，酶切鑒定，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染COS7細胞，應(yīng)用WESTERNBLOT方法分析F基因表達情況。將F基因亞克隆于腺病毒穿梭載體PSHUTTLECMV，PMEⅠ線性化重組穿梭載體，與腺病毒骨架載體PADEASY1在ECOLIBJ5183細胞內(nèi)同源重組得到重組腺病毒DNA質(zhì)粒。以PACⅠ酶切獲得的重組腺病毒DNA分子，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染293細胞，產(chǎn)生基因組結(jié)構(gòu)均一的重組腺病毒。WESTERNBLOT鑒定目的基因表達。結(jié)果采用RTPCR法擴增獲得F蛋白基因編碼序列。核酸序列分析顯示沒有發(fā)生無義突變。轉(zhuǎn)染COS7細胞后，利用WESTERNBLOT方法檢測到了F蛋白的特異性條帶。進一步克隆至腺病毒穿梭載體PSHUTTLECMV，在ECOLIBJ5183內(nèi)和腺病毒骨架載體PADEASY1實現(xiàn)同源重組，獲得克隆有RSVF的重組腺病毒質(zhì)粒PFGADHRSVF，經(jīng)PACⅠ線性化產(chǎn)生重組腺病毒DNA分子，轉(zhuǎn)染293細胞。觀察到293細胞出現(xiàn)腫脹，圓縮等典型的致細胞病變效應(yīng)CYTOPATHICEFFECT，CPE，WESTERNBLOT檢測到F基因的表達，獲得表達RSVF基因的非復(fù)制型重組腺病毒FGADHRSVF。結(jié)論成功克隆RSVF基因，并在真核細胞中實現(xiàn)表達。獲得一株可表達RSVF的非復(fù)制型重組腺病毒FGADHRSVF，可用于體內(nèi)免疫效果及免疫保護作用的研究。

簡介：分類號UDCY9971S6密級編號一中南大學(xué)CENTRALSOUTHUNLVERSITY碩士學(xué)位論文論文題目嬰痘壹潛迭性腿蛋自二逡基塞塑活絲匡二墨在縣咽土座細胞轉(zhuǎn)化蟲笪佳屆丞扭劍學(xué)科、專業(yè)痘堡堂曼瘟堡生堡堂研究生姓名韭志住導(dǎo)師姓名及其專業(yè)技術(shù)職稱塑蟹筮趟中南大學(xué)二DO六年五月亟主芏位I金奎生塞摘要2、LMPL△232051轉(zhuǎn)化的鼻咽上皮細胞NP69生物學(xué)特性分析采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將PLNSXLMPLWR與PLNSXLMFI△23”51以PLNSX空載體為對照導(dǎo)入PA317包裝細胞，600MG／LG418篩選2周后擴大培養(yǎng)，自細胞培養(yǎng)上清獲得后續(xù)實驗所需的感染性逆病毒RVLNSX、RVLMPLWR和RVLMPL△””甜。然后，用濃縮的病毒分別感染鼻咽上皮細胞NP69，400MG／LG418篩選3周后，匯合克隆培養(yǎng)，獲得NP69PLNSX、NP69LMPLWR和NP69一LMPL△23”513種轉(zhuǎn)化細胞系。分別觀察和檢測這些轉(zhuǎn)化細胞的形態(tài)、生長曲線、平板克隆、軟瓊脂生長能力和抗凋亡能力。結(jié)果顯示1NP69LMPL△232。3”細胞的形態(tài)與NP69LMPLWT細胞的一樣，在培養(yǎng)過程中，逐漸由扁平、鵝卵石樣典型上皮形態(tài)逐漸演變成細胞間接觸減少的長梭狀纖維細胞樣形態(tài)；2與NP69LMPLWL。細胞相比，NP69LMPL△232琊1細胞的生長和增殖能力降低，在軟瓊脂實驗中形成的集落較野生型減少25614VS887，P005，且集落較小。3NP69LMPI△23”51細胞抗凋亡能力明顯低于NP69LMPLWR細胞NP69LMPL△232。51細胞較NP69一LMPLWT細胞的凋亡率為4534_272VS1413198，PO05。以上結(jié)果提示CTAR3參與了LMPL促細胞增殖、轉(zhuǎn)化和抑制凋亡等信號過程，是LMPL羧基末端重要的轉(zhuǎn)化效應(yīng)位點之一。3、LMPL△23”卯轉(zhuǎn)化的鼻咽上皮細胞NP69蛋白質(zhì)組學(xué)研究采用雙向凝膠電泳技術(shù)2DE分離NP69PLNSX、NP69LMPLWW和NP69LMPL△232琊1三株細胞的總蛋白，建立了重復(fù)性和分辨率均較好的NP69PLNSX、NP69LMPLWR和NP69LMPL△232。3”細胞系的雙向凝膠電泳圖譜，總蛋白質(zhì)點數(shù)分別為1099士38、1088士43和1142T46，平均匹配率為925％。與NP69一PLNSX細胞相比，右ENP69一LMPLWL細胞中，有27蛋白質(zhì)點表達上調(diào)，24個蛋白質(zhì)點表達下調(diào)；與NP69一LMPLWL細胞相比，NP69LMPL△23“51在細胞中表達上調(diào)的蛋白質(zhì)點26個，下調(diào)的蛋白質(zhì)點33個。應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜MALDI。TOFMS檢測，共鑒定了39個差異表達的蛋白質(zhì)點。在這些蛋白質(zhì)中，NP69LMPLW。與NP69PLNSX細胞之間所鑒定的蛋白有參與代謝相關(guān)的酶類蛋白檸檬酸合酶；參與信號傳導(dǎo)通路的膜聯(lián)蛋白A2以及參與轉(zhuǎn)錄和翻譯的相關(guān)蛋白延長因子1等，更多的是與細胞惡性程度相關(guān)及促細胞轉(zhuǎn)移相關(guān)的一些結(jié)構(gòu)蛋白，如波形蛋白、核纖層蛋白～FC、細胞角蛋白19等。另外，NP69LMPL△23∞51與NP69LMPLWR細胞之間鑒定的蛋白有參與代謝相關(guān)的酶類蛋白如磷酸丙糖異構(gòu)酶、異檸檬酸脫氫酶；參與信號傳導(dǎo)通路的G蛋白參與轉(zhuǎn)錄和翻譯相關(guān)蛋白如核糖體蛋白PO、非均一型核糖核蛋白～B／H等。為證實比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果，

簡介：自從80年代免疫抑制劑環(huán)孢素ACSA問世后器官移植有了突飛猛進的發(fā)展肝移植是目前治療終末期肝病的最有效的方法在中國與乙型肝炎有關(guān)的急慢性肝病逐漸成為肝移植的主要適應(yīng)證而肝移植存在的最大問題是移植肝的再感染術(shù)后乙型肝炎復(fù)發(fā)是影響生存率的主要因素預(yù)防和治療再感染已成為提高其成活率的關(guān)鍵天津市第一中心醫(yī)院采用HBIG拉米呋啶聯(lián)合應(yīng)用預(yù)防與治療移植肝再感染取得了良好的療效該研究旨在研究其再感染的可能因素尋找單一或聯(lián)合藥物預(yù)防和治療乙型肝炎病毒再感染的方法方法1988年10月2001年10月天津市第一中心醫(yī)院移植外科行原位肝移植手術(shù)經(jīng)系統(tǒng)抗病毒治療隨訪存活半年以上者共79例其中HBV相關(guān)原發(fā)性肝癌患者28例HBV相關(guān)良性終末期肝病患者51例對17例患者單用拉米呋啶62例患者聯(lián)合應(yīng)用拉米呋啶及小劑量乙肝免疫球蛋白HBIG預(yù)防乙肝復(fù)發(fā)觀察中期治療隨訪半年以上的結(jié)果結(jié)論HBV相關(guān)性肝病行肝臟移植再感染的防治是必要的可以提高和改善患者的生活質(zhì)量移植術(shù)前予拉米呋啶可以降低HBV的復(fù)制水平術(shù)后予拉米呋啶聯(lián)合小劑量HBIG預(yù)防HBV再感染與傳統(tǒng)單用拉米呋啶或大劑量HBIG相比中期觀察能更有效的抑制HBV的再感染及肝炎的復(fù)發(fā)

簡介：目的1探討人臍帶間充質(zhì)干細胞HUMANUMBILICALCDMESENCHYMALSTEMCELLSHUCMSCS體外分離、培養(yǎng)、純化條件，并對HUCMSCS的生物學(xué)特性進行研究；2構(gòu)建含人重組胰島素INSULIN與增強型綠色熒光蛋白EGFP基因慢病毒表達載體PLENTI63INSULINIRESEGFP，并進行慢病毒顆粒的包裝，純化，濃縮及滴度測定；3以GFP作為報告基因，篩選慢病毒轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細胞最適MOI值，為進一步進行攜帶外源基因的轉(zhuǎn)染探索條件；4研究攜帶重組人胰島素慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細胞后，基因及蛋白水平的表達情況，為進一步進行體內(nèi)回植提供研究基礎(chǔ)。方法1將剔除動脈和靜脈的新鮮人臍帶組織剪成小塊培養(yǎng)1MMLMMLMM，培養(yǎng)12周后得到貼壁細胞，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，細胞計數(shù)繪制細胞生長曲線；應(yīng)用流式細胞儀鑒定細胞表面標志；化學(xué)染色檢測體外誘導(dǎo)成脂和成骨分化的能力；2應(yīng)用PCR方法擴增獲得INSULIN基因序列，在目的基因上游加上BAMHI，下游加上I兩個酶切位點；將PCR產(chǎn)物進行T載體克隆，轉(zhuǎn)化入感受態(tài)DH5Α細胞中，通過篩選獲得重組質(zhì)粒PMDL8TINSULIN，測序分析選定序列正確的克隆提取質(zhì)粒；用限制性內(nèi)切酶分別酶切PMDL8TINSULIN和PLENTI63IRESEGFP質(zhì)粒，將INSULIN基因片段和PLENTI63IRESEGFP載體連接，轉(zhuǎn)化入感受態(tài)DH5Α細胞中，通過篩選獲得慢病毒表達載體PLENTI63INSULINIRESEGFP，并進行測序。中量抽提慢病毒載體，將慢病毒表達載體轉(zhuǎn)染293T細胞，包裝病毒，純化及濃縮并測定病毒滴度。3以EGEP作為報告基因，分別以MOI值0，1，3，5，7，10，15，20轉(zhuǎn)染細胞，觀察48小時，72小時，96小時，熒光表達情況，篩選慢病毒轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細胞最適轉(zhuǎn)染時間及MOI值；4轉(zhuǎn)染人臍帶間充質(zhì)干細胞，應(yīng)用QPCR及RTPCR方法檢測重組人胰島素基因表達情況，應(yīng)用WESTENBLOTING方法檢測胰島素蛋白表達情況。結(jié)果L體外培養(yǎng)一周，細胞從組織塊中爬出；細胞傳代培養(yǎng)至第10代，無明顯形態(tài)及增值能力改變；細胞陽性表達CD44，CDL06，而CD34，HLADR表達陰性。體外誘導(dǎo)實驗證實，HUCMSCS具有成脂及成骨分化的能力。2聚合酶鏈反應(yīng)獲得長度347BP帶有BAMHI和I兩個酶切位點序列的目的基因，經(jīng)與克隆載體PMDL8T載體和慢病毒表達載體PLENTI63IRESEGFP連接，構(gòu)建慢病毒表達載體PLENTI63INSULINIRESEGFP。成功包裝病毒，純化及濃縮并測定病毒滴度。3重組慢病毒載體具有較高的轉(zhuǎn)染效率，當轉(zhuǎn)染復(fù)數(shù)MOI值是10時，轉(zhuǎn)染效率最高可達到90％。應(yīng)用QPCR及RTPCR方法檢測重組人胰島素基因表達情況，證實基因水平的表達量，轉(zhuǎn)染組為陽性，未轉(zhuǎn)染組為陰性。應(yīng)用WESTENBLOTING方法檢測胰島素蛋白表達情況，證實轉(zhuǎn)染組細胞及上清表達陽性；未轉(zhuǎn)染組表達均為陰性。結(jié)論1HUCMSCS能在體外培養(yǎng)、擴增并具骨髓間充質(zhì)干細胞相似的生物學(xué)特性；2成功構(gòu)建慢病毒表達載體PLENTI63INSULINIRESEGFP并包裝病毒顆粒純化及濃縮并測定病毒滴度；3篩選出最適MOI值為10，攜帶重組人胰島素基因慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染HUCMSCS后，其在基因及蛋白水平均陽性表達胰島素。

簡介：目的骨形成蛋白具有誘導(dǎo)未分化間充質(zhì)細胞向成骨細胞、成軟骨細胞分化促進新骨形成的作用隨著研究的深入發(fā)現(xiàn)骨形成蛋白家族不僅具有誘導(dǎo)成骨功能還具有調(diào)控胚胎發(fā)生發(fā)育、營養(yǎng)神經(jīng)及調(diào)控某些腫瘤的發(fā)生與生長的作用由于其具有廣泛的生物學(xué)活性特別是在骨損傷治療等方面所顯示的良好應(yīng)用前景人們將關(guān)注點集中在利用骨形成蛋白進行基因治療的研究中初步研究結(jié)果已顯示出了誘人前景本研究利用腺病毒感染種類廣泛不整合宿主細胞基因、無潛在的致突變性且較易獲得高滴度病毒、轉(zhuǎn)染效率高等特點以復(fù)制缺陷型腺病毒為載體構(gòu)建了含人骨形成蛋白2基因HBMP2的重組腺病毒表達載體并轉(zhuǎn)染人胚肺成纖維細胞觀察成纖維細胞被重組腺病毒表達載體轉(zhuǎn)染后在成骨活性方面的影響為后續(xù)體內(nèi)實驗研究奠定基礎(chǔ)結(jié)論采用體外連接技術(shù)成功構(gòu)建了含HBMP2基因的重組腺病毒表達載體且體外連接技術(shù)較傳統(tǒng)的同源重組方法簡便并避免了在同源重組過程中產(chǎn)生增殖性腺病毒的可能同時體外實驗見人胚肺成纖維細胞在轉(zhuǎn)染重組腺病毒后細胞形態(tài)發(fā)生改變、恢復(fù)了功能活動WESTERNBLOT、堿性磷酸酶染色及體外礦化均為陽性體外實驗證實在轉(zhuǎn)染含HBMP2基因的重組腺病毒表達載體后人胚肺成纖維細胞向成骨細胞表型轉(zhuǎn)變具有了骨形成的能力本實驗的成功完成為后續(xù)HBMP2基因治療的應(yīng)用研究奠定了堅實的基礎(chǔ)

簡介：吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文肝炎病毒感染對腎移植患者肝損害的臨床觀察姓名王少鑫申請學(xué)位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)消化系病指導(dǎo)教師高歌20030301關(guān)于論文使用授權(quán)的說F_J本人同意學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門送交學(xué)位淪文的復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱。不同意學(xué)校及舊家訂火機構(gòu)可以公布論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。論文作者簽名A勺、艘F1期“嗎斗R習(xí)I十目指導(dǎo)教師簽私喜弘『J妒；Y諺

簡介：目的探討輕度認知障礙MCI中醫(yī)證候流行病學(xué)分布規(guī)律及其影響因素。方法運用流行病學(xué)和量表學(xué)的方法，通過文獻回顧、專家咨詢、問卷制定、臨床流調(diào)、數(shù)據(jù)挖掘和醫(yī)理分析，對MCI的概念、影響因素、常見癥狀和體征、中醫(yī)基本證候診斷標準等多個方面進行深入探討。結(jié)果研制了MCI中醫(yī)證候流行病學(xué)調(diào)查問卷，經(jīng)過大樣本流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)該問卷具有較好的信度、效度和反應(yīng)度；觀察發(fā)現(xiàn)性別、學(xué)歷、婚姻、煙酒嗜好、參加社會活動情況等是MCI的主要影響因素；近事遺忘、頭暈、耳鳴、遠事遺忘；舌淡、舌紅、舌紫暗有瘀點、舌體胖大有齒痕、苔薄白、苔少；脈弦細、脈細數(shù)、脈細澀、脈細弱、脈弦等為MCI主要的癥狀和體征；而肝腎陰虛、痰蒙清竅、腦痿髓空、瘀血痹阻、氣血雙虧是MCI常見的證候類型；同時運用LOGISTIC逐步回歸的方法建立了5類證候的判別分析模型，且每個模型都有較強的預(yù)測性；用貝葉斯公式推導(dǎo)MCI四診信息，結(jié)果與臨床診斷結(jié)果符合率為87％；發(fā)現(xiàn)MCI中醫(yī)常見證候與簡易精神量表之間存在著負性相關(guān)，從而證明了腎虛、痰、瘀等病理因素對認知功能的負性影響。結(jié)論肝腎陰虛是MCI最常見的中醫(yī)證候；性別、學(xué)歷、婚姻、煙酒嗜好、參加社會活動情況是MCI的主要影響因素。

簡介：浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文抑郁癥患者認知功能、應(yīng)對方式研究姓名楊致蓉申請學(xué)位級別碩士專業(yè)精神病學(xué)與精神衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師許毅20060501I竺』蘭翌堡主生些堡奎魚焦慮的關(guān)系等基本問題不十分清楚。目的探討抑郁癥患者治療前后自動思維、功能失調(diào)性認知、應(yīng)對方式的特點和規(guī)律及其與焦慮的關(guān)系。方法30例抑郁癥患者納入研究，分別于基線及抗抑郁藥物治療4～6周后進行相關(guān)的心理測評，評定量表包括漢密頓抑郁量表LWD24、漢密頓焦慮量表HAMA14、功能失調(diào)性狀況評定量表DAS、自動思維問卷ATQ一30和應(yīng)付方式問卷WAYSOFC0PINGQUESTIONNAH，并設(shè)立30例健康對照。進行相關(guān)性分析。結(jié)果1抑郁癥患者存在明顯的功能失調(diào)性認知。抑郁癥患者的DAS總分基線與治療后比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義分別16373士2351，14957士2075，SO016治療后抑郁癥患者的DAS總分14957士2075高于對照組1315啦2453，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義PO003；治療前后各因子分值比較，除認知哲學(xué)因子外，其它各因子總分均較治療前降低。其中完美化D3因子分別為1899士497和1620士384，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義PO019；依賴性D6因子分別為2177士493和1847土435差異有顯著性PO∞8，其它因子分差異未達統(tǒng)計學(xué)意義。2抑郁癥患者治療后應(yīng)對方式發(fā)生改變，積極的應(yīng)對方式增加，消極的應(yīng)對方式減少。抑郁癥患者治療前后“解決問題PO012、自責(zé)PO047、求助盧O025”的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，其中“自責(zé)”評分在治療后降低，而“解決

簡介：第一部分重組人HIF1Α的真核表達載體質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定目的構(gòu)建重組人HIF1Α真核表達載體質(zhì)粒，為進行治療性血管再生研究做準備。方法從HELA細胞中提取總RNA，RTPCR法反轉(zhuǎn)錄合成CDNA。設(shè)計兩對引物分別調(diào)取目的基因片段A和B，與T載體連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，LB平板培養(yǎng)基篩選菌落，抽提質(zhì)粒。測序正確后雙酶切先后克隆進入PCDNA4HISMAXA載體。結(jié)果獲得重組的人HIF1Α真核表達載體質(zhì)粒，經(jīng)PCR擴增獲得的目的基因分子量與預(yù)計的相同，插入PCDNA4HISMAXA載體部位正確。結(jié)論重組的人HIF1Α，所選用的PCDNA4HISMAX可高表達目的基因，為利用其進行治療性血管再生研究奠定了基礎(chǔ)。第二部分重組人HIF1Α的真核表達載體質(zhì)粒的功能表達目的構(gòu)建編碼重組人HIF1Α真核表達載體質(zhì)粒，研究體外培養(yǎng)的哺乳細胞中靶基因表達的有效性。方法從HELA細胞中提取總RNA，RTPCR法反轉(zhuǎn)錄合成CDNA。設(shè)計兩對引物分別調(diào)取目的基因片段A和B，與T載體連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，LB平板培養(yǎng)基篩選菌落，抽提質(zhì)粒。測序正確后雙酶切先后克隆進入PCDNA4HISMAXA載體。用構(gòu)建完成的重組HIF1Α質(zhì)粒和空白病毒轉(zhuǎn)染人胃癌SGC7901細胞，并在不同時相收集轉(zhuǎn)染的細胞進行RTPCR和WESTERNBLOT檢測。結(jié)果檢測靶基因VEGFMRNA表達及其蛋白翻譯的結(jié)果類似。轉(zhuǎn)染細胞2472小時之后，重組HIF1Α質(zhì)粒各組VEGFMRNA的表達水平均明顯高于對照各組，差異顯著P＜0001。與空白對照組相比，重組RHIF1Α質(zhì)粒組VEGF蛋白的表達在24小時組即有明顯增加，但與48小時組相比差異無顯著性P＞005與72小時組相比差異顯著P＜0001。72小時組的表達量最高，與其它各組比較差異均顯著P＜0001。結(jié)論成功構(gòu)建了重組的人HIF1Α質(zhì)粒載體之后，在體外轉(zhuǎn)染哺乳細胞中可有效地表達靶基因VEGFMRNA并翻譯成相應(yīng)的蛋白，達到了實驗的目的。為利用其進行治療性血管再生研究奠定了基礎(chǔ)。第三部分應(yīng)用ADMAX腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建人HIF1Α重組腺病毒目的利用ADMAX腺病毒載體系統(tǒng)構(gòu)建人重組HIF1Α基因腺病毒并在293細胞中擴增制備重組病毒。方法自先期構(gòu)建的PCDNA4RHHIF1Α真核表達載體中用RTPCR法擴增出RHHIF1Α基因片段，將其克隆入線性化的PEGFP1C1質(zhì)粒中，用PCR法擴增EGFPRHHIF1Α基因片段，將其克隆入PUC18質(zhì)粒中。酶切構(gòu)建好的PUC18RHHIF1Α載體并克隆進入穿梭質(zhì)粒PDC316中，將構(gòu)建好的穿梭質(zhì)粒PDC316RHHIF1Α載體和骨架病毒PBHGLOX△1，3CRE共轉(zhuǎn)染293細胞，包裝成重組的病毒顆粒，熒光顯微鏡觀察綠色熒光表達。結(jié)果經(jīng)限制性內(nèi)切酶檢測和GFP表達證實成功地構(gòu)建了攜帶重組人HIFΑ基因的重組腺病毒載體并制備出高滴度重組病毒。結(jié)論成功地構(gòu)建了攜帶RHHIF1Α基因片段的重組腺病毒載體，為進一步血管再生研究奠定了基礎(chǔ)。第四部分腺病毒介導(dǎo)的重組人HIF1Α誘導(dǎo)大鼠后肢缺血模型的血管再生作用目的觀察成年大鼠和老年大鼠體內(nèi)注射先期構(gòu)建的腺病毒介導(dǎo)的重組人HIF1Α表達載體在缺血的骨骼肌組織對血管的再生作用并進行比較。方法建立大鼠后肢缺血模型，成年N8及老年N7組均隨機分成缺血對照組A、C組和缺血治療組B、D組。建模24小時后，B、D兩組右后肢缺血骨骼肌局部5處分別注射腺病毒RHHIF1Α載體每處1108PFU01M1，A、C兩組在左后肢相應(yīng)部位注入PBS液每處01M1。術(shù)后2周、4周麻醉大鼠后，切取四組大鼠后肢缺血骨骼肌組織進行HE染色和血管內(nèi)皮細胞的免疫組化檢查。結(jié)果實驗動物大體觀察B、D組在同等干預(yù)下，術(shù)后四周后肢缺血狀況有明顯改善，與自身對照組及術(shù)后二周比較差異均顯著。轉(zhuǎn)染后第二周、四周毛細血管密度觀察顯示建模后各組的毛細血管密度均隨時間延長而增加。D組與B組無差異，但兩組均較對照組A組和C組有明顯的增加。結(jié)論腺病毒介導(dǎo)的RHHIF1Α基因在缺血的肌肉組織包括成年大鼠和老年大鼠治療組均有微小血管大量生成，誘導(dǎo)了血管再生，但成年大鼠和老年大鼠兩組間無差異。說明ADRHHIF1對老年大鼠的治療性血管再生作用至少與成年大鼠的治療效果是類似的。