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簡(jiǎn)介：目的研究RSV感染后TLR3的表達(dá)變化及其介導(dǎo)的下游信號(hào)分子改變，探討TLR3介導(dǎo)RSV感染所致炎癥免疫反應(yīng)的分子機(jī)制。用MT預(yù)先給藥進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)比較TLR3的表達(dá)變化及其介導(dǎo)的下游信號(hào)分子改變，研究MT作用的機(jī)制；同時(shí)觀察MT膜和核受體的表達(dá)，明確MT是通過(guò)與何種受體的結(jié)合而發(fā)揮作用。方法1TLR3介導(dǎo)RSV感染所致炎癥免疫反應(yīng)的體外實(shí)驗(yàn)用RSV感染體外培養(yǎng)的RAW2647細(xì)胞，收集不同感染時(shí)間點(diǎn)設(shè)RSV感染0，L，4，8，16，24小時(shí)組的細(xì)胞和培養(yǎng)上清，用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR檢測(cè)TLR3、MYD88、TNFA和INOSMRNA的表達(dá)變化，用WESTERNBLOT檢測(cè)TLR3蛋白和核內(nèi)活性NFKBP65蛋白的表達(dá)變化，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELJSA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNFA蛋白變化。2TLR3介導(dǎo)RSV感染所致炎癥免疫反應(yīng)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)用RSV滴鼻感染昆明小鼠，收集不同感染時(shí)間點(diǎn)設(shè)RSV感染0，1，4，8，16，24小時(shí)組或48，72，96小時(shí)組的小鼠血清和肺，用半定量RTPCR檢測(cè)肺TLR3、MYD88、TNFA和INOSMRNA的表達(dá)變化，用WESTERNBLOT檢測(cè)TLR3蛋白和核內(nèi)活性NFKBP65蛋白的表達(dá)變化，用ELISA檢測(cè)小鼠血清中TNFA表達(dá)變化。3MT干預(yù)的體外實(shí)驗(yàn)MT分107M、LO6M、105M三個(gè)濃度組，預(yù)先處理RAW2647細(xì)胞，分別收集上述不同感染時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞和培養(yǎng)上清，用半定量RTPCR檢測(cè)TLR3、MYD88、TNFA和INOSMRNA的表達(dá)變化，并對(duì)MT膜受體MT1和MT2以及核受體RA進(jìn)行MRNA測(cè)定。用WESTERNBLOT檢測(cè)TLR3蛋白和核內(nèi)活性NFKBP65蛋白的表達(dá)變化，用ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNFA蛋白變化。4MT干預(yù)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)MT分5MGKG1、10MGKG1、20MGKG1三個(gè)劑量組，預(yù)先灌胃給藥，連續(xù)七天。分別收集上述不同感染時(shí)間點(diǎn)的小鼠血清和肺，用半定量RTPCR檢測(cè)肺TLR3、MYD88、TNFA和INOSMRNA的表達(dá)變化，并對(duì)MT膜受體MT1、MT2以及核受體RA進(jìn)行MRNA測(cè)定。用WESTERNBLOT檢測(cè)TLR3蛋白和核內(nèi)活性NFKBP65蛋白的表達(dá)變化，用ELISA方法檢測(cè)小鼠血清中TNFA表達(dá)變化。結(jié)果1TLR3介導(dǎo)RSV感染所致炎癥免疫反應(yīng)的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSV感染4H后即上調(diào)RAW2647細(xì)胞TLR3、TNFA和INOSMRNA的轉(zhuǎn)錄水平；RSV感染8H后即可誘導(dǎo)活化TLR3蛋白和核內(nèi)活性NFKB蛋白的表達(dá)，并升高細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNFA的分泌量。各指標(biāo)的變化與對(duì)照組相比差異均有顯著性，并且隨著RSV感染時(shí)間的延長(zhǎng)而表達(dá)量增加。但MYD88MRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯變化。2TLR3介導(dǎo)RSV感染所致炎癥免疫反應(yīng)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSV感染小鼠4H后即能上調(diào)肺TLR3MRNA的轉(zhuǎn)錄水平，誘導(dǎo)活化核內(nèi)NFKB蛋白的表達(dá)；RSV感染48H后上調(diào)TNFAMRNA的轉(zhuǎn)錄水平；感染72H上調(diào)INOSMRNA的轉(zhuǎn)錄水平。并于RSV感染48H后觀察到小鼠血清中TNFA的分泌量也增加。各指標(biāo)的變化較對(duì)照組差異均有顯著性。但在感染24H內(nèi)未檢測(cè)到肺組織中TLR3蛋白的表達(dá)；而MYD88MRNA表達(dá)也未見(jiàn)明顯變化。3MT干預(yù)的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果MT三個(gè)濃度組107M、106M、105M在RSV感染RAW2647細(xì)胞后4H，即可下調(diào)RSV誘導(dǎo)的TNFAMRNA的轉(zhuǎn)錄水平，其下調(diào)作用隨著MT濃度的增加更加明顯。而對(duì)于INOSMRNA，107M的MT未能起到下調(diào)作用，106M和105M的MT則從RSV感染4H開(kāi)始就能下調(diào)INOS表達(dá)，105M的作用更明顯。結(jié)果還顯示MT在107M濃度時(shí)未能起到下調(diào)NFKB的作用，106M和105M濃度MT則從RSV感染4H開(kāi)始就能下調(diào)其表達(dá)，105M的MT作用更明顯。但各濃度組的MT對(duì)TLR3MRNA和蛋白的表達(dá)均沒(méi)有明顯的下調(diào)作用，而對(duì)MYD88MRNA表達(dá)也未見(jiàn)明顯影響。對(duì)MT受體的檢測(cè)結(jié)果顯示，RAW細(xì)胞均未檢測(cè)到膜受體MT1、MT2的表達(dá)，而核受體RA在各組均有表達(dá)且均勻一致。MT在107M濃度時(shí)未能起到下調(diào)細(xì)胞培養(yǎng)上清TNFA蛋白的作用，106M和105M濃度MT則從RSV感染8H開(kāi)始就能下調(diào)其表達(dá)，其中105M的MT作用更明顯。4MT干預(yù)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果MT在10MGKG1和20MGKG1劑量組時(shí)，均能在RSV感染72H后下調(diào)RSV誘導(dǎo)的肺組織TNFA和INOSMRNA的轉(zhuǎn)錄水平。20MGKG1劑量的MT組在RSV感染4H而10MGKG1劑量MT在RSV感染8H，即可下調(diào)NFKB的活性表達(dá)。MT在10MGKG1。劑量時(shí)，從RSV感染的48H開(kāi)始可降低血清中TNFA的產(chǎn)生，其中20MGKG1劑量的下調(diào)作用更明顯。但各劑量組的MT對(duì)TLR3、MYD88和RA的表達(dá)均不影響。我們也未檢測(cè)到MT1、MT2的表達(dá)。結(jié)論1RSV感染可上調(diào)TLR3、TNFA和INOSMRNA的表達(dá)，誘導(dǎo)活化TLR3蛋白和核內(nèi)NFKB的表達(dá)，升高細(xì)胞培養(yǎng)上清和小鼠血清中TNFA的分泌量。表明病毒誘導(dǎo)的炎癥免疫反應(yīng)與TLR3活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有關(guān)，TLR3可能參與了RSV誘導(dǎo)的炎癥免疫反應(yīng)，推測(cè)是通過(guò)MYD88非依賴(lài)或部分依賴(lài)途徑而活化NFKB。2MT在一定濃度和劑量范圍內(nèi)，能降低RSV誘導(dǎo)的RAW2647細(xì)胞和肺的核內(nèi)活性NFKB的表達(dá)，下調(diào)RSV誘導(dǎo)的TNFA和INOSMRNA的轉(zhuǎn)錄水平，降低細(xì)胞培養(yǎng)上清和小鼠血清中TNFA的分泌量。但MT對(duì)TLR3MRNA和蛋白，MYD88和RA的MRNA表達(dá)均無(wú)明顯影響。3MT抑制RSV誘導(dǎo)的NFKB活化、下調(diào)TNFA和INOS的表達(dá)隨著藥物劑量或濃度的增加及感染時(shí)間的延長(zhǎng)而更加明顯。4MT可能通過(guò)與其核受體結(jié)合，抑制NFKB活化，發(fā)揮抗RSV感染所致的炎癥反應(yīng)。5在RSV感染所致炎癥免疫反應(yīng)中，MT可能對(duì)TLR3、MYD88等上游信號(hào)分子無(wú)抑制作用。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多腸道病毒71型類(lèi)病毒顆粒在昆蟲(chóng)細(xì)胞Sf9中的表達(dá).pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文表達(dá)NT4SACHA2TAT融合肽的重組腺伴隨病毒載體的構(gòu)建及鑒定姓名張士寶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)外科學(xué)（泌尿外科）指導(dǎo)教師劉慶勇20090510山東大學(xué)碩士學(xué)位論文P從V／AD三質(zhì)粒磷酸鈣共沉淀法轉(zhuǎn)染293細(xì)胞系，通過(guò)同源重組獲得NT。一SACHA2一TAT重組腺伴隨病毒載體，收集病毒，斑點(diǎn)雜交DOTBLOT法測(cè)定病毒滴度。結(jié)果1SAC基因經(jīng)DNA測(cè)序與GENEBANK序列一致。2NT。一SACHA。TAT融合基因經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定正確。3酶切鑒定證實(shí)已將NT。一SACHA2_TAT融合基因成功轉(zhuǎn)至PSSCMV載體中；斑點(diǎn)雜交測(cè)定重組腺伴隨病毒的滴度約為342I010PFU／ML～342I011PFU／ML。結(jié)論1成功克隆PAR4核心結(jié)構(gòu)域SAC基因。2成功構(gòu)建具有穿膜功能的“NT。一SACHA。TA”融合基因。3成功構(gòu)建PSSCMV／NT。一SACHA。TA重組腺伴隨病毒載體，并成功包裝較高濃度的重組病毒。關(guān)鍵詞前列腺凋亡反應(yīng)基因一4；融合肽；前列腺癌；重組腺相關(guān)病毒8

簡(jiǎn)介：湖南醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文漢語(yǔ)閱讀障礙兒童認(rèn)知能力與腦SPECT研究姓名陳洪波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)兒童精神病學(xué)指導(dǎo)教師楊志偉19990601湖南F科大學(xué)碩士學(xué)位論文RESEARCHOFCOGNITIVEFUNCTIONANDSPECTONCHINESECHILDRENWITHREADINGDISORDERABSTRACTEOI,JECTIVE1TOEXPLORETHEFEATURESOFCOGNITIVEDYSFUNCTIONANDSUBTYPESOFCHINESECHILDRERWITHREADINGDISORDERCRD2TOOBSERVETHEDIFFERENCESOFREGIONALCEREBRALBLOODFLOWRCBFBETWEENCRDANDCONTROLS,ANDTOEXPLORETHERELATIONSHIPBETWEENREGIONALCEREBRALFUNCTIONSANDCOGNITIVEABILITYOFCRDMETHODACCORDINGTOTHEDIAGNOSTICCRITERIAOFSPECIFICREADINGDISORDERSRDOFTHEICD一10,172CHILDRENDIAGNOSEDWITHCRDBYCLINICINTERVIEWAND63CONTROLSRANDOMLYSAMPLEDFROMTHESAMECLASSESPARTICIPATEDINTHESTUDYCHINESE一WECHSLERINTELLIGENCESCALEFORCHILDREN一WISC，WECHSLERMEMORYSCALECHINESEREVISIONWMS一RCANDTHECHINESEREADINGSKILLDIAGNOSTICTESTCRSDTUSEDINASSESSMENTANDDIAGNOSIS37CRDCHILCHRENANDTHE13CONTROLSRESPECTIVEWERERECEIVEDRCBFEXAMINATIONRESULT1THEMEANINTELLIGENCEANDMEMORYSCORESANDMOSTSUBTESLSSCORESOFCRDCHILDRENWERELOWERTHANTHOSEOFCONTROLSP001THEVERBALSCORESISLOWERTHANTHEPERFORMANCESCORESONCRDCHILDRENP001CRDCHILDRENSHOWEDALARGERMEANVERBAL一PERFORMANCEDISCREPANCYTHANCONTROLS2CRDCHILDRENSHOWEDHIGHERSPATIAL,INTERMEDIATESEQUENTIALANDVERBALCOMCEPTUALIZATION,ANDLOWERACQUIREDKNOWLEDGEWITHBANNATYNESMODEL,ANDSHOWEDSTRONGERRIGHT一BRAINPROCESSING,WEAKERLEFT一BRAINPROCESSINGWITHKAUFMANSMODEL3CRDCHILDRENCLUSTEREDINTOTHREE

簡(jiǎn)介：第一部分目的建立一種操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定可靠、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的同種異體異位心臟移植動(dòng)物模型。方法單人操作。以雄性WISTAR大鼠為供體，SPRAGUEDAWLEY大鼠為受體。麻醉后迅速摘取供心，備用；受體鼠肝素化，解剖出右側(cè)頸外靜脈及其分支，結(jié)扎并剪斷其分支。用微血管夾鉗夾近心端主干，近顱側(cè)結(jié)扎，距該線(xiàn)結(jié)約LMM縫一60PROLENE線(xiàn)作牽引線(xiàn)，剪斷血管主干，牽引線(xiàn)引導(dǎo)頸外靜脈穿過(guò)CUFF管，用兩把顯微鑷將血管壁外翻在CUFF管外，50絲線(xiàn)環(huán)扎固定。類(lèi)似方法處理右側(cè)頸總動(dòng)脈。供心于無(wú)名動(dòng)脈跟部前壁作一小切口，將頸總動(dòng)脈CUFF管插入其內(nèi)，環(huán)扎固定；同樣方法將頸外靜脈CUFF管插入肺動(dòng)脈內(nèi)并環(huán)扎固定。移去微血管夾先開(kāi)放頸外靜脈，再分次開(kāi)放頸總動(dòng)脈。結(jié)果全部移植成功，無(wú)吻合口漏血或回流受阻，2例右心耳出血，L例集束結(jié)扎處出血，均予結(jié)扎止血，全組無(wú)手術(shù)死亡，移植物復(fù)跳率100％?？偸中g(shù)時(shí)間4560MIN，其中吻合時(shí)間僅38MIN。結(jié)論該模型是一種實(shí)用、理想、易于復(fù)制的器官移植研究動(dòng)物模型。第二部分目的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子Β1TGFΒ1是一種普遍存在、具有抗炎和免疫抑制活性的重要免疫調(diào)節(jié)因子，實(shí)驗(yàn)研究表明經(jīng)冠脈灌注TGFΒ1轉(zhuǎn)基因治療可以減輕供心缺血一再灌注損傷、明顯延長(zhǎng)同種心臟移植物的存活時(shí)間；FTY720是一種新型強(qiáng)效的抗移植物排斥反應(yīng)藥物，研究表明可顯著延長(zhǎng)大鼠同種異體心臟移植的存活時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)在成功建立心臟移植模型的基礎(chǔ)上，通過(guò)冠脈TGFΒL轉(zhuǎn)基因聯(lián)合應(yīng)用FTY720，觀察對(duì)大鼠移植心臟缺血一再灌注損傷的影響并探討其相關(guān)機(jī)制。方法利用CUFF技術(shù)建立頸部異位心臟移植模型，實(shí)驗(yàn)分為A、B、C、D、E共5組N6A組空白對(duì)照組供心離體灌注4CSTANFD大學(xué)停跳液；B組空載體組供心離體灌注含5109PFU／GM空白載體腺病毒顆粒的4。CSTANFD大學(xué)停跳液；C組FTY720組受體鼠自術(shù)前3天開(kāi)始至術(shù)日每天管飼FTY720，劑量為3MG／KG，供心離體灌注4CSTANFD大學(xué)停跳液；D組轉(zhuǎn)基因組供心離體灌注含5LO9PFU／GM攜帶MTGFΒL基因腺病毒顆粒的4CSTANFD大學(xué)停跳液；E組轉(zhuǎn)基因FTY720組受體鼠自術(shù)前3天開(kāi)始至術(shù)日每天管飼FTY720，劑量為3MG／KG；供心離體灌注含5109PPFU／GM攜帶MTGFΒ1基因腺病毒顆粒的4CSTANFD大學(xué)停跳液。于移植后8小時(shí)切取移植心臟，HE染色光鏡下觀察移植物病理組織學(xué)變化，電鏡下觀察移植物心肌組織超微結(jié)構(gòu)變化；免疫組化染色檢測(cè)移植物MTGFΒL、ICAM1、NFKB表達(dá)情況；應(yīng)用一步法RTPCR檢測(cè)心肌組織MTGFΒ1MRNA的轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度；測(cè)定心肌組織中超氧化物歧化酶SOD活性、丙二醛MDA含量、髓過(guò)氧化物酶MPO活性。單因素兩水平均數(shù)比較采用T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩因素兩水平均數(shù)比較采用析因設(shè)計(jì)方差分析22析因分析。結(jié)果移植后8小時(shí)，光鏡下見(jiàn)C、D、E組心肌細(xì)胞腫脹減輕，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少；電鏡下觀察見(jiàn)A、B組心肌線(xiàn)粒體水腫，部分呈空泡樣變，嵴紊亂，核周水腫，肌原纖維間水腫，部分肌絲斷裂，肌漿內(nèi)糖原顆粒明顯減少；C、D、E組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)較為完整，心肌間質(zhì)和血管周?chē)闹行粤＜?xì)胞和淋巴細(xì)胞滲出明顯減少，心肌線(xiàn)粒體水腫明顯減輕，無(wú)明顯的肌絲斷裂現(xiàn)象。免疫組化染色證實(shí)MTGFBL成功轉(zhuǎn)到心肌細(xì)胞，MTGFΒ1表達(dá)強(qiáng)度D、E兩組明顯高于其它三組P001；D、E組ICAM1及NFKB的表達(dá)較A、B、C三組顯著下調(diào)P001；TUNEL法檢測(cè)移植物組織心肌細(xì)胞凋亡示D、E兩組心肌細(xì)胞凋亡顯著減少P001；RTPCR證實(shí)D、E兩組移植心臟有外源性MTGFΒL基因轉(zhuǎn)錄；與A、B組比較，C、D、E組SOD活性明顯升高P001；MDA含量和MPO活性明顯下降P001，轉(zhuǎn)基因因素和FTY720因素對(duì)SOD、MDA和MPO的影響存在交互作用P005。結(jié)論TGFΒ1和FTY720均具有減輕移植心臟缺血再灌注損傷的作用，機(jī)制可能與抑制心肌細(xì)胞凋亡、下調(diào)ICAM1、NFKB表達(dá)、增高SOD活性等因素有關(guān)；二者聯(lián)合應(yīng)用在減輕缺血再灌注損傷方面有協(xié)同作用。第三部分目的通過(guò)經(jīng)冠脈TGFΒ1轉(zhuǎn)基因聯(lián)合應(yīng)用FTY720，觀察兩者對(duì)大鼠移植心臟急性排斥反應(yīng)的影響并探討其相關(guān)機(jī)制。方法利用CUFF技術(shù)建立頸部異位心臟移植模型。60只清潔級(jí)雄性WISTAR大鼠作供體，隨機(jī)分成5組，每組12只60只清潔級(jí)雄性SD大鼠作受體，隨機(jī)分成5組，每組12只。分別為F組空白對(duì)照組供心離體灌注4CSTANFD大學(xué)停跳液；G組空載體組供心離體灌注含5X109PFU／GM空白載體腺病毒顆粒的4CSTANFD大學(xué)停跳液；H組FTY720組受體鼠自術(shù)前3天開(kāi)始至術(shù)后第¨天每天管飼FTY720，劑量為3MG／KG，供心離體灌注4CSTANFD大學(xué)停跳液；I組轉(zhuǎn)基因組供心離體灌注含5LO9PFU／GM攜帶MTGFΒ1基因腺病毒顆粒的4CSTANFD大學(xué)停跳液；J組轉(zhuǎn)基因FTY720組受體鼠自術(shù)前3天開(kāi)始至術(shù)后第U天每天管飼FTY720，劑量為3MG／KG；供心離體灌注含5LO9PFU／GM攜帶MTGFΒ1基因腺病毒顆粒的4CSTANFD大學(xué)停跳液。各組均于術(shù)后第5天隨機(jī)選6只動(dòng)物抽取外周血后留取標(biāo)本，每組剩余6只觀察存活期。HE染色光鏡下觀察排斥反應(yīng)級(jí)別；免疫組化染色檢測(cè)移植物MTGFΒ1、BCL2、BAX表達(dá)情況；應(yīng)用一步法RTPCR檢測(cè)心肌組織MTGFΒ1MRNA轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度；WESTERNBLOTTING檢測(cè)MTGFΒ1蛋白水平；應(yīng)用流式細(xì)胞儀行外周血CD3CD4T淋巴細(xì)胞和CD3CD8T淋巴細(xì)胞檢測(cè)。單因素多組間均數(shù)比較采用F檢驗(yàn)或ONEWAYANOVA方差分析，兩因素兩水平均數(shù)比較采用析因設(shè)計(jì)方差分析22析因分析。結(jié)果H、I、J組存活時(shí)間較F、G兩組明顯延長(zhǎng)PO01，其中J組最長(zhǎng)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO01。術(shù)后5天H、I、J組移植物排斥反應(yīng)級(jí)別明顯降低P001；RTPCR證實(shí)術(shù)后5天移植心臟有外源性MTGFΒL基因轉(zhuǎn)錄，免疫組化染色證實(shí)MTGFΒ1成功轉(zhuǎn)到心肌細(xì)胞，MTGFΒ1表達(dá)強(qiáng)度I、J兩組明顯高于其它三組P001，且兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO01；心肌組織BCL2的表達(dá)H、I、J組高于前兩組PO01，心肌組織BAX的表達(dá)相反P001。H、I、J三組術(shù)后5天心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯降低P001；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞型，發(fā)現(xiàn)H、J兩組與另外三組比較，CD3CD4T淋巴細(xì)胞和CD3CD8T淋巴細(xì)胞顯著減少，其中CD3／CD4T淋巴細(xì)胞減少更明顯。轉(zhuǎn)基因因素和FTY720因素在以上統(tǒng)計(jì)處理析因分析中均存在交互作用P005。結(jié)論經(jīng)冠脈TGFΒL轉(zhuǎn)基因聯(lián)合FTY720在減輕大鼠同種異體心臟移植急性排斥反應(yīng)方面有協(xié)同作用，移植物存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)。其機(jī)制可能與上調(diào)BCL2表達(dá)、下調(diào)BAX表達(dá)、抑制心肌細(xì)胞凋亡以及FTY720能上調(diào)TGFΒL基因表達(dá)等因素有關(guān)；CD3／CD4T淋巴細(xì)胞比CD3／CD8T淋巴細(xì)胞對(duì)FTY720更為敏感。

簡(jiǎn)介：華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文含NM23H1重組腺相關(guān)病毒對(duì)高頻轉(zhuǎn)移卵巢癌原位移植模型的逆轉(zhuǎn)姓名李靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專(zhuān)業(yè)婦科腫瘤指導(dǎo)教師馬丁200251華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士研究生畢業(yè)論丈表達(dá)的相對(duì)吸光度分別為060015；125士005；111士009；095士004；O72士002145士006，其中SW626表達(dá)強(qiáng)度最高，OVCAR7表達(dá)強(qiáng)度最低P005。木結(jié)論五種轉(zhuǎn)移相關(guān)表型在6株卵巢癌細(xì)胞中呈不同程度表達(dá)，其中NM23H。與腫瘤轉(zhuǎn)移力呈負(fù)相關(guān)。NM23HL低表達(dá)的卵巢癌細(xì)胞SW626具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移傾向，屬高頻轉(zhuǎn)移株，AAVNM23H對(duì)SW626建立的高頻轉(zhuǎn)移卵巢癌原位移植模型有逆轉(zhuǎn)作用。關(guān)鍵詞NM23HLJ卵巢癌，原位移植瘤模型重組腺相關(guān)病毒，轉(zhuǎn)民八2

簡(jiǎn)介：本文試圖對(duì)從認(rèn)知文體學(xué)的角度研究意識(shí)流小說(shuō)的代表作弗吉尼亞伍爾夫的達(dá)洛維夫人。本文結(jié)合文本世界理論和思維風(fēng)格理論分析達(dá)洛維夫人中認(rèn)知世界的構(gòu)建和思維風(fēng)格旨在為意識(shí)流小說(shuō)認(rèn)知層面的系統(tǒng)研究提供借鑒。本文以認(rèn)知語(yǔ)篇分析模式“文本世界理論”GAVINS2007WERTH1999與感知文本世界的獨(dú)特方式“思維風(fēng)格”FOWLER1977LEECHSHT1981SEMINO2002為理論框架探討了作為背景的語(yǔ)篇世界并且從這部小說(shuō)中歸納出三種世界轉(zhuǎn)換時(shí)空中世界轉(zhuǎn)換“聲音”里的世界轉(zhuǎn)換碎片化身份的世界轉(zhuǎn)換。本文分析了作者的思維風(fēng)格以及小說(shuō)中的兩個(gè)平行人物克萊瑞莎與塞浦提姆斯的思維風(fēng)格。雖然這兩個(gè)人物在情節(jié)發(fā)展上鮮有交集但他們?cè)谡Z(yǔ)言規(guī)律上的共同點(diǎn)和相似性使他們?nèi)缤嗷?duì)照的鏡像緊密聯(lián)系在一起。本文從認(rèn)知文體學(xué)的角度將“文本世界理論”與“思維風(fēng)格”理論應(yīng)用到一部完整的意識(shí)流小說(shuō)分析中并藉此為理解和欣賞小說(shuō)的藝術(shù)魅力特別是意識(shí)流小說(shuō)的藝術(shù)魅力提供新的視角和有效方法。

簡(jiǎn)介：丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUSHCV感染是引起輸血后肝炎的最主要病原體其防治工作是擺在我們面前的艱巨的任務(wù)HCV感染可有多種不同的臨床表現(xiàn)如丙肝病毒攜帶者和急性肝炎而40﹪60﹪的HCV感染者發(fā)展為慢性肝炎并比較快地進(jìn)展為肝硬變和肝癌等終末期肝病由于缺乏理想的HCV的體外感染細(xì)胞模型對(duì)病毒的生物學(xué)特性致病作用抗病毒治療和疫苗的制備等研究受到限制同時(shí)缺乏理想的HCV感染的動(dòng)物模型國(guó)內(nèi)外的科學(xué)家開(kāi)始利用HCVRNA復(fù)制中起關(guān)鍵作用的酶建立細(xì)胞外的以這些酶為靶點(diǎn)的分子模型該研究建立的HCVNS5B聚合酶細(xì)胞分子復(fù)制模型依據(jù)來(lái)源于HCVNS5B聚合酶在HCVRNA復(fù)制中所起的關(guān)鍵作用NS5B蛋白是RNA依賴(lài)性的RNA多聚酶RDRP研究證明重組NS5B具模板引物依賴(lài)性能在體外用HCV3端的核苷酸作為復(fù)制引物起動(dòng)HCVRNA負(fù)鏈的合成理論上講阻斷在病毒復(fù)制周期發(fā)揮關(guān)鍵作用的NS5B聚合酶可抑制病毒復(fù)制是我們開(kāi)展抗病毒藥物研發(fā)的有用工具和理論依據(jù)

簡(jiǎn)介：該研究針對(duì)當(dāng)前有關(guān)研究之不足以急性HCV感染的兩種轉(zhuǎn)歸即一過(guò)性及持續(xù)性感染者為對(duì)象采用PCR擴(kuò)增HCV結(jié)構(gòu)區(qū)包括C區(qū)C端、E1和E2區(qū)N端長(zhǎng)約1KB片段并進(jìn)行克隆以單鏈構(gòu)象多態(tài)性SINGLESTRCONFMATIONPOLYMPHISMSSCP異質(zhì)性雙體HETERODUPLEXHD分析為準(zhǔn)種篩選方法分析了準(zhǔn)種復(fù)雜性并對(duì)所選的代表性準(zhǔn)種進(jìn)行核酸序列分析及結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)以了解準(zhǔn)種演變進(jìn)化概貌及其與病情轉(zhuǎn)歸的關(guān)系結(jié)論①SSCPHD分析能準(zhǔn)確地檢測(cè)HCV感染者體內(nèi)病毒基因變異可較真實(shí)地反映準(zhǔn)種組成情況和分布特征②HCV持續(xù)性感染與準(zhǔn)種復(fù)雜性增大有關(guān)③宿主免疫反應(yīng)對(duì)HVR1的選擇壓力引起結(jié)構(gòu)區(qū)準(zhǔn)種的異質(zhì)性增加④HCV3B型與1A或1B型準(zhǔn)種的演變程度可能存在差異

簡(jiǎn)介：長(zhǎng)期以來(lái)，缺乏感染模型是丙型肝炎病毒HCV研究中所面臨的難題，近兩年來(lái)雖然建立了感染性的HCV細(xì)胞培養(yǎng)模型，但僅限于有限的基因型。由于缺乏理想的HCV感染小動(dòng)物模型，HCV防治研究進(jìn)展緩慢。HCV感染的標(biāo)準(zhǔn)療法是聚乙二醇化的IFNΑ與利巴韋林的聯(lián)合應(yīng)用，2、3型HCV感染對(duì)該療法的持續(xù)反應(yīng)率達(dá)75％以上，但流行最廣的1型HCV感染的持續(xù)反應(yīng)率不到50％。此外，該療法的費(fèi)用昂貴，還具有副作用。HCV分子克隆以來(lái)，HCV疫苗在發(fā)達(dá)國(guó)家一直是研究熱點(diǎn)，但迄今為止，尚無(wú)任何有效的疫苗問(wèn)世。探索更加有效的HCV治療方法，研發(fā)有效的HCV疫苗非常迫切。黑猩猩PANTROGLODYTES是目前唯一被肯定的HCV易感動(dòng)物，但使用黑猩猩作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的費(fèi)用很高，且動(dòng)物來(lái)源極為有限。近年來(lái)有TRIMERA小鼠和UPASCID小鼠被用作HCV感染模型，但兩者的制備方法復(fù)雜，且免疫缺陷的特性限制了其在HCV免疫學(xué)研究方面的應(yīng)用。樹(shù)鼩TREESHREWS，TUPAIABELANGERI是一種與靈長(zhǎng)目動(dòng)物諸多特征相似的小動(dòng)物，被用于人類(lèi)多種疾病，包括HBV、HSV等病毒感染的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究。1998年首次有報(bào)道，用HCVRNA陽(yáng)性的血清感染中國(guó)云南野生樹(shù)晌，部分可發(fā)生短期病毒血癥和HCV抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)，2007年再次有類(lèi)似報(bào)道。盡管如此，目前對(duì)樹(shù)鼩是否可用作HCV感染的動(dòng)物模型還存在爭(zhēng)議。病毒體與宿主細(xì)胞表面受體的結(jié)合是病毒進(jìn)入細(xì)胞的第一步，病毒與細(xì)胞表面相應(yīng)受體的結(jié)合是病毒感染復(fù)制的始動(dòng)環(huán)節(jié)。雖然HCV進(jìn)入靶細(xì)胞的確切機(jī)制現(xiàn)在仍不十分清楚，但一系列確鑿的證據(jù)表明這與HCV包膜糖蛋白E2與靶細(xì)胞表面的多種受體相關(guān)分子的相互作用有關(guān)，這些分子包括CD81、SRBI、CLAUDIN1CLDN1以及最近鑒定出的OCCLUDINOCLN。從1997年到2008年，有一些研究表明HCV病人血漿能感染PTHPRIMARYTUPAIAHEPATOCYTES，能感染樹(shù)鼩，但樹(shù)鼩能否作為小動(dòng)物模型但是仍然存在爭(zhēng)議。使用HCV病人血漿作為病毒來(lái)源，則無(wú)法保證研究的連貫性和重復(fù)性。因此，除臨床病毒株病人血漿外，使用來(lái)源穩(wěn)定、背景一致、感染性高的細(xì)胞培養(yǎng)HCV病毒代替丙型肝炎病人血漿進(jìn)行HCV動(dòng)物模型的研究是最好的解決方法。由于病毒特異性受體的表達(dá)和分布是影響病毒感染的宿主和組織親嗜性的重要限制性因素，因此關(guān)于樹(shù)鼩CD81、CLDN1、SRBI以及OCIN功能的研究有著重要的意義。本研究克隆了樹(shù)鼩的CD81、SRBI、CLDN1以及OCLN基因，用一系列功能實(shí)驗(yàn)分析這些分子是否可介導(dǎo)HCV感染，觀察了HCV假病毒HCVPSEUDOPATTICLES，HCVPP和細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生的HCVCELLCULTUREPRODUCEDHCV，HCVCC對(duì)PTH的感染性，并用HCVCC體內(nèi)感染樹(shù)鼩，檢測(cè)樹(shù)鼩血清中是否可產(chǎn)生HCV病毒血癥。方法1抽提PTH的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為CDNA，設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增出樹(shù)鼩CD81、SRBI、CLDN1以及OCLN基因序列。2構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒PET32ATCD81LELLARGEEXTRACELLULARLOOP，在大腸桿菌BL21中表達(dá)樹(shù)鼩CD81LEL的重組蛋白，用ELISA分析HCV包膜E2蛋白與樹(shù)鼩CD81LEL的結(jié)合活性。3構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒PCITCD81、PCITSRBI轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HCVE2蛋白與其結(jié)合活性。4將樹(shù)鼩CD81基因轉(zhuǎn)染HEPG2細(xì)胞，再用熒光素酶作為報(bào)告基因的假HCV顆粒HCVPPLUC感染，檢測(cè)熒光素酶在細(xì)胞中的表達(dá)。5構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒PCITCLDN1，轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，再用HCVPPLUC感染，檢測(cè)熒光素酶活性。6將人CD81、SRBI、CLDN1以及樹(shù)鼩OCLN共轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，然后用HCVPPLUC感染，檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)。7分離培養(yǎng)PTH，用HCVPPLUC感染，檢測(cè)熒光素酶活性。8細(xì)胞培養(yǎng)的HCVCCJ6JFH1感染PTH，WESTERNBLOT檢測(cè)HCV蛋白的表達(dá)。9用HCVCCJ6JFHL感染PTH連續(xù)培養(yǎng)3周，取不同時(shí)間的培養(yǎng)上清感染HUH75細(xì)胞，免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的HCV蛋白。10HCVCCJ6JFH1感染樹(shù)鼩6只實(shí)驗(yàn)組，6只對(duì)照組，連續(xù)十次1次周取血，REALTIMEPCR檢測(cè)血清中HCV拷貝數(shù)，同時(shí)檢測(cè)ALT水平的變化。結(jié)果1擴(kuò)增出樹(shù)鼩CD81GENBANKEF581831，CLDN1GENBANKEF584564，SRBIGENBANKEF584564，OCLNGENBANKFJ809937編碼基因。2擴(kuò)增出樹(shù)鼩和人的CD81LEL，并構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒PET32ATCD81LEL、PET32AHCD81LEL，獲得重組蛋白。ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)人與樹(shù)鼩的CD81LEL都能結(jié)合可溶性HCV包膜E2蛋白，且二者與HCVE2的結(jié)合活性相似。3構(gòu)建樹(shù)鼩CD81真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CD81分子可在CHO細(xì)胞表面表達(dá)，且CHO細(xì)胞表面的CD81分子能與可溶性HCVE2蛋白結(jié)合。4人或樹(shù)鼩的CD81表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的HEPG2細(xì)胞均可被HCVPP感染。5構(gòu)建人與樹(shù)鼩的SRBI的真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示HCV包膜E2蛋白能與表達(dá)在CHO細(xì)胞表面的SRB1分子結(jié)合。6轉(zhuǎn)染人或樹(shù)鼩CLDN1表達(dá)質(zhì)粒到293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞能被HCVPP感染。7共轉(zhuǎn)染人CD81、SRBI、CLDN1及樹(shù)鼩OCLN后CHO細(xì)胞能被HCVPP感染。8HCVPP和HCVCC可感染PTH，且HCVCC感染PTH可產(chǎn)生生產(chǎn)性感染。9J6JFH1HCVCC感染的6只樹(shù)鼩中，有2只血清中能間歇性檢測(cè)到HCVRNA。結(jié)論1樹(shù)鼩CD81、SRBI、CLDN1以及OCIN可介導(dǎo)HCV感染。2HCVPP、HCVCC能感染PTH，并且HCVCC感染PTH能完成完整的病毒復(fù)制過(guò)程，產(chǎn)生感染性HCV顆粒。3J6JFH1HCVCC可感染樹(shù)鼩，產(chǎn)生病毒血癥。以上結(jié)果為用樹(shù)鼩作為HCV小動(dòng)物感染模型的可行性提供了依據(jù)。

簡(jiǎn)介：研究目的開(kāi)展避孕節(jié)育知情選擇可以使育齡群眾變被動(dòng)接受服務(wù)為主動(dòng)尋求服務(wù)，服務(wù)者與服務(wù)對(duì)象的關(guān)系由單向的政策指導(dǎo)轉(zhuǎn)變?yōu)殡p向的互動(dòng)交流，從而提高育齡婦女節(jié)育率、降低生育水平、保證其生殖健康，對(duì)穩(wěn)定低生育水平、提高人口素質(zhì)有重要的意義；然而我國(guó)目前在此方面的研究不夠深入，本研究旨在評(píng)估三水區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)人員相關(guān)知識(shí)掌握情況和工作開(kāi)展現(xiàn)狀，對(duì)干預(yù)措施效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，從中發(fā)現(xiàn)三水區(qū)計(jì)劃生育知情選擇工作開(kāi)展過(guò)程中存在的問(wèn)題和影響因素，為今后研究奠定基礎(chǔ)；為我區(qū)計(jì)劃生育部門(mén)制定知情選擇相關(guān)政策措施提供依據(jù)。資料與方法本研究主要采用問(wèn)卷調(diào)查、比較分析和專(zhuān)家訪(fǎng)談等研究方法。同時(shí)，還利用了文獻(xiàn)研究法收集和分析資料，以期從多角度保證得出的結(jié)論科學(xué)合理。1、對(duì)三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員的基線(xiàn)調(diào)查了解三水區(qū)從事計(jì)劃生育服務(wù)的基層工作人員年齡、性別、學(xué)歷、文化程度的基本情況。并分析三水區(qū)從事計(jì)劃生育服務(wù)的基層工作人員對(duì)一般避孕知識(shí)和不同避孕節(jié)育措施知識(shí)的掌握水平以及影響因素。2、干預(yù)前后計(jì)劃生育工作人員相關(guān)知識(shí)掌握情況對(duì)比分析對(duì)計(jì)劃生育工作人員實(shí)施避孕節(jié)育知情選擇相關(guān)知識(shí)宣傳教育形式的干預(yù)，并對(duì)干預(yù)效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)內(nèi)容包括干預(yù)前后對(duì)避孕節(jié)育知情選擇認(rèn)知度、不同避孕節(jié)育措施相關(guān)知識(shí)、避孕節(jié)育相關(guān)知識(shí)掌握水平，目的是對(duì)我區(qū)目前宣教活動(dòng)的方式方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，為進(jìn)一步提高宣教活動(dòng)的效果提供指導(dǎo)。3、研究我區(qū)開(kāi)展避孕節(jié)育知情選擇影響因素通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查和深入訪(fǎng)談，從管理、服務(wù)和群眾三個(gè)層面系統(tǒng)分析我區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)人員在開(kāi)展避孕節(jié)育知情選擇過(guò)程中所面臨的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)。4、統(tǒng)計(jì)方法對(duì)于計(jì)劃生育人員的基本情況采用描述性分析。對(duì)于得分在不同性別、年齡段、學(xué)歷和從業(yè)時(shí)間分段的比較，在數(shù)據(jù)滿(mǎn)足正態(tài)分布和方差齊時(shí)，采用T檢驗(yàn)和方差分析，當(dāng)不滿(mǎn)足上述兩個(gè)條件時(shí)，采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)進(jìn)行分析。干預(yù)前后掌握情況的比較，采用卡方檢驗(yàn)分析。結(jié)果1、三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員的基本情況三水區(qū)共有從事計(jì)劃生育服務(wù)的基層工作人員154人，本研究有效調(diào)查人數(shù)為148人，有效率9610％；其中女性占7863％，男性占2137％；平均年齡為328±75歲，其中4797％的人在30～40歲范圍之內(nèi)，20～30歲組和40歲以上組各占25％左右。學(xué)歷以高中及中專(zhuān)為主，其次為初中學(xué)歷，而大專(zhuān)以上只占08％；平均從業(yè)時(shí)間為572±498年，從業(yè)時(shí)間在5年～10年的人最多，其次是05年的工作人員，最少為10年以上組。2、三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員避孕知識(shí)掌握情況三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員對(duì)于一般避孕節(jié)育知識(shí)問(wèn)題回答平均得分為71554分總分15分；在不同年齡組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，2030歲年齡組得分最高為80323，40歲以上年齡組得分最低為69091；在不同性別、學(xué)歷、從業(yè)時(shí)間之間的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員對(duì)輸卵管結(jié)扎方法的掌握在不同年齡組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，2030歲年齡組得分最高為184總分2分，40歲以上年齡組得分最低為145；緊急避孕方法掌握情況在不同年齡組間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，40以上歲年齡組得分最高為194，3040歲年齡組得分最低為164；其他避孕方法知識(shí)的掌握情況在不同性別、學(xué)歷、從業(yè)時(shí)間之間的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、干預(yù)前后三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員避孕知識(shí)的掌握情況對(duì)比三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員在干預(yù)后的一般避孕節(jié)育知識(shí)問(wèn)題得分為84054總分15分，比干預(yù)前提高125，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。女性工作人員在干預(yù)后避孕節(jié)育知識(shí)問(wèn)題回答得分為84660，比干預(yù)前正確率提高12427，干預(yù)前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在不同年齡、學(xué)歷、從業(yè)時(shí)間組的工作人員，在干預(yù)前后的差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員在干預(yù)后對(duì)宮內(nèi)節(jié)育器知識(shí)的掌握總體提高效果比較顯著，干預(yù)后得分為32973總分4分，比干預(yù)前提高03378，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)其他四種避孕措施相關(guān)知識(shí)的掌握情況干預(yù)前后的總體效果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。干預(yù)前后，不同特征人群對(duì)某些避孕措施知識(shí)掌握情況的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員在干預(yù)后對(duì)育齡婦女不同時(shí)期避孕節(jié)育相關(guān)知識(shí)的掌握比干預(yù)前均有所提高，大部分知識(shí)點(diǎn)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)特殊情況下避孕藥具的使用知識(shí)的掌握出現(xiàn)比干預(yù)前差的情況。4、三水區(qū)計(jì)劃生育工作人員對(duì)開(kāi)展避孕節(jié)育知情選擇環(huán)境因素調(diào)查三水區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)人員對(duì)開(kāi)展避孕節(jié)育知情選擇的環(huán)境條件比較樂(lè)觀，尤其認(rèn)為服務(wù)層面的各種因素比較有利于避孕節(jié)育知情選擇的開(kāi)展，而政策層面和群眾層面的環(huán)境還需要進(jìn)一步改善。結(jié)論與建議1、基本情況三水區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)人員相對(duì)不足、年齡結(jié)構(gòu)合理、從業(yè)時(shí)間大多在5到10年范圍內(nèi)。2、知識(shí)掌握現(xiàn)狀對(duì)避孕節(jié)育知識(shí)及使用方法掌握不夠全面，而且知識(shí)掌握水平與年齡有一定關(guān)系，但是未發(fā)現(xiàn)其與性別、學(xué)歷和從業(yè)時(shí)間有關(guān)聯(lián)。3、干預(yù)效果干預(yù)后研究對(duì)象對(duì)一般避孕知識(shí)的掌握有明顯提高，且前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明干預(yù)措施取得一定的效果；干預(yù)后研究對(duì)象對(duì)不同避孕節(jié)育措施相關(guān)知識(shí)掌握效果不理想；工作人員的學(xué)歷、年齡、從業(yè)時(shí)間對(duì)其知情選擇知識(shí)的認(rèn)知度有一定影響。4、環(huán)境影響因素計(jì)劃生育工作人員認(rèn)為我區(qū)服務(wù)層面各種因素有利于避孕節(jié)育知情選擇的開(kāi)展，而在政策層面和群眾層面還存在一些不利因素，需要不斷改善。5、建議我們必須制定切實(shí)可行的避孕節(jié)育知情選擇推進(jìn)方案和工作規(guī)范，不斷改革計(jì)劃生育考核模式，為知情選擇的全面開(kāi)展創(chuàng)造一個(gè)良好的政策法規(guī)環(huán)境，通過(guò)宣教和培訓(xùn)增強(qiáng)計(jì)劃生育工作人員對(duì)避孕節(jié)育知情選擇的認(rèn)識(shí)和理解，提高他們尊重和保護(hù)群眾權(quán)利的意識(shí)，提高他們的相關(guān)知識(shí)水平和咨詢(xún)服務(wù)技巧，保證避孕節(jié)育知情選擇順利開(kāi)展。

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)R71／31Y762817單位代碼11904學(xué)號(hào)20021045博士學(xué)位研究生論文腺病毒介導(dǎo)的血管抑素K1．5對(duì)卵巢癌的抑制作用ADENOVIRUSMEDIATEDTRANSFEROFANGIOSTATINKL5GENEINHIBITSNUDEMURINEOVARIANCARCINOMA專(zhuān)業(yè)婦產(chǎn)科研究生劉恩令導(dǎo)師糜若然教授天津醫(yī)科大學(xué)二零零五年五月天律暉科大學(xué)博士學(xué)位論文縮寫(xiě)M0LMVDOECCODPBSPCRRNASEARPMIL640PFU戳PCRTETCID50VEGF英文全稱(chēng)MUTTIPLICITYOFINFECTIONMIEROVESSELDENSITYOVARIANEPITHELIALCELLCARCINOMAOPTICALDENSITYPHOSPHATEBUFFEREDSALINEPOLYMEMSECHAINREACTIONRIBONUCLEASEARPMLL640MIDIUM1640PLAQUEFORMINGUNITRETROPOLYMERASECHAINREACTIONTRIS腕DTABUFFERTISSUECULTUREINFECTIOUSDOSE50VASCULAREPITHELIALGRO誡HFACTORG中文全稱(chēng)感染復(fù)數(shù)微血管密度卵巢上皮細(xì)胞癌光吸收度磷酸鹽緩沖液多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RNA懿ARPMLL640培養(yǎng)基空斑形成單位逆轉(zhuǎn)最多聚酶鏈?zhǔn)降顟?yīng)TRIS／EDTA緩沖液50％組織培養(yǎng)感染劑懇盤(pán)警肉發(fā)生長(zhǎng)囂孑

簡(jiǎn)介：人乳頭瘤病毒（HUMANPAPILLOMAVIRUSHPV）是重要的性傳播因子可引起人皮膚粘膜的增生性疾病及惡性腫瘤該組多年攻關(guān)研究及國(guó)外報(bào)道均表明HPV16E6及E7為病毒的主要轉(zhuǎn)化基因E6及E7的表達(dá)為癌細(xì)胞惡性表型維持所必須流行病調(diào)查資料顯示人群感染HPV16后可產(chǎn)生抗HPV16E6及E7特異免疫因而研制防治HPV16相關(guān)疾病的疫苗E6和E7是理想的靶抗原根據(jù)T淋巴細(xì)胞活化的雙信號(hào)學(xué)說(shuō)和MHC（MAJOHISTOCOMPLEX）I類(lèi)分子呈遞抗原的規(guī)律為了有效地活化T細(xì)胞該研究構(gòu)建淋巴細(xì)胞活化所必需的共刺激分子B71的真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA31B71采用裸DNA肌肉接種的免疫方式使E6E7在機(jī)體組織內(nèi)翻譯成蛋白進(jìn)入MHCI類(lèi)分子抗原呈遞途徑同時(shí)輔以共激活分子B71基因共同免疫以期有效地活化機(jī)體的免疫反應(yīng)特別是CTL（CYTOTOXICTLYMPHOCYTECTL）活性該實(shí)驗(yàn)從臨床標(biāo)本中克隆了HPV16E6E7基因突變修飾后消除了轉(zhuǎn)化活性而保留了抗原性以此構(gòu)建的FME6E7DNA疫苗與單獨(dú)E7基因免疫相比FME6E7基因可更好地活化機(jī)體的CTL活性協(xié)同共激活分子B71基因免疫可增強(qiáng)FME6E7的免疫原性不僅使CTL更好的活化還可使33﹪的小鼠免受HPV16的C3腫瘤的攻擊表明中國(guó)山東地方株E6E7融合基因可用于DNA疫苗的構(gòu)建協(xié)同B71基因聯(lián)合免疫在HPV16治療性疫苗研究中前景廣闊

簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建SARS病毒E、M、N基因真核及原核表達(dá)重組質(zhì)粒，評(píng)價(jià)這3種基因在SARS病毒感染快速診斷以及疫苗研制中的價(jià)值。方法通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得SARSCOVE、M、N基因片斷，將其分別克隆入真核表達(dá)載體PVAX1，將所得真核表達(dá)重組質(zhì)粒PVAX1E、PVAX1M和PVAX1N分別肌肉注射小鼠和兔子，檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)抗SARSCOV抗體，觀察實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物的體重變化，處死后對(duì)重要臟器進(jìn)行病理檢查。將SARSCOVE、M、N基因片斷克隆入原核表達(dá)載體PGEX4T1，優(yōu)化表達(dá)條件、純化重組蛋白。以重組蛋白PGEX4T1N為抗原，檢測(cè)真核表達(dá)重組質(zhì)粒注射動(dòng)物血清中抗體。結(jié)果真核表達(dá)重組質(zhì)粒PVAX1E、PYAX1M和PYAX1N以及原核表達(dá)重組質(zhì)粒PGEX4T1E、PGEX4T1M和PGEX4T1N基因測(cè)序結(jié)果與GENEBANK公布的一致。真核表達(dá)重組質(zhì)粒經(jīng)肌肉注射免疫小鼠和兔子后，在動(dòng)物體內(nèi)能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗SARSCOV抗體。通過(guò)觀察動(dòng)物一般狀態(tài)和對(duì)重要臟器的病理研究顯示，重組質(zhì)粒安全無(wú)害。經(jīng)過(guò)IPTG誘導(dǎo)，SDSPAGE電泳可見(jiàn)PGEX4T1NBL21DE3有特異蛋白表達(dá)帶。誘導(dǎo)后的PGEX4T1EBL21DE3和PGEX4T1MBL21DE3菌體沉淀以鼠抗GSTTAG為一抗，進(jìn)行WESTERNBLOT，可發(fā)生免疫印劑反應(yīng)。通過(guò)WESTERNBLOT分析顯示重組蛋白PGEX4T1N可與小鼠重組質(zhì)粒PVAX1N免疫血清發(fā)生免疫印跡反應(yīng)。結(jié)論真核表達(dá)重組質(zhì)粒PVAX1E、PVAX1M和PVAX1N具有較好的免疫原性和安全性，有可能成為具有預(yù)防作用的基因疫苗。PGEX4T1NBL21DE3可高效表達(dá)重組N蛋白，該蛋白有可能成為SARSCOV感染血清學(xué)診斷的候選抗原之一。

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文小兒特發(fā)性血小板減少性紫癜與人微小病毒B19感染及細(xì)胞因子關(guān)系的研究姓名韓靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專(zhuān)業(yè)兒科學(xué)指導(dǎo)教師張寶璽郭穩(wěn)捷200231LO天～6個(gè)月。所有患兒入院前未服用影響免疫功能的藥物，入院第2天取空腹靜脈血待檢。急性組治療后為18例，男LO例，女8例，年齡210歲，治療方法①大劑量丙種球蛋白04∥KGD靜滴，連用5天②同時(shí)應(yīng)用地塞米松025“05M叭KGD，連用37天后漸減量維持4～8周。入院后5至LO天，血小板上升至100109／L以上取血待檢。正常對(duì)照組為健康兒童30例，男18例，女12例，年齡2～10歲。本實(shí)驗(yàn)采用酶標(biāo)記免疫吸附雙抗夾心ELISA方法測(cè)定其血清中IL2、IL一6、IL8及TNFA的含量，用聚核酶鏈反應(yīng)PCR技術(shù)檢測(cè)人微小病毒B，。HPVB，。，實(shí)驗(yàn)方法均依據(jù)試劑盒說(shuō)明操俸。結(jié)果42例急性ITP患兒HPVB。陽(yáng)性8例，陽(yáng)性率為1905％慢性ITP及對(duì)照組B，。病毒均為陰性，急性盯P組HPVBL9DNA陽(yáng)性率高于慢性組及對(duì)照組，差異有顯著意義?；純貉錓L2含量為269377116P昏ML，其中急性組為2765146565PG／ML，慢性組為254527665PG／ML，較正常對(duì)照組353198165PGZML明顯降低P001；血清IL6含量瘸例組為2335432PG／ML，急性組為24634，75PG／ML，慢性組為2254508PG／ML，較正常對(duì)照組1753317PS／M1高P001IL8含量病例組為1743511543PG／ML，急性組為1393847286PG／ML，慢性組為2436814904PGSML，較正常對(duì)照組61541343PG／M1明顯升高P001有顯著意義；TNFQ水平病例組為157L4473PG／ML，急性組16024516PEDML，慢