偷窥国产在线91,亚洲无线国产观看原创,日本精品aⅴ一区二区三区,久久九九兔免费精品6

簡(jiǎn)介：目的建立病毒性心肌炎的體外模型，用新的化學(xué)方法提取到含量較高的廣棗總黃酮，研究廣棗總黃酮抗病毒的效果，明確病毒性心肌炎發(fā)病過(guò)程中是否存在細(xì)胞的凋亡，以及廣棗總黃酮是否抑制心肌細(xì)胞的凋亡。方法化學(xué)法提取廣棗總黃酮，高效液相法測(cè)定其含量。培養(yǎng)HELA細(xì)胞和乳鼠心肌細(xì)胞，在HELA細(xì)胞和心肌細(xì)胞水平上對(duì)柯薩奇B3病毒進(jìn)行毒力滴定，并測(cè)定廣棗總黃酮的藥物毒性，建立體外病毒性心肌炎模型，通過(guò)細(xì)胞病變抑制實(shí)驗(yàn)，病毒繁殖抑制實(shí)驗(yàn)測(cè)定廣棗總黃酮體外抗柯薩奇病毒能力。采用ANNEXINVFITCPI染色、HOECHST33258熒光單染觀察染色質(zhì)凝聚，觀察病毒性心肌炎發(fā)病過(guò)程中心肌細(xì)胞是否存在凋亡，以及運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)廣棗總黃酮是否抑制細(xì)胞凋亡。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用T檢驗(yàn)。結(jié)果成功建立體外病毒性心肌炎的模型，廣棗總黃酮在HELA細(xì)胞和乳鼠心肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中可有效抑制柯薩奇B病毒引起的細(xì)胞病變數(shù)P005，對(duì)病毒繁殖有抑制作用對(duì)數(shù)值升高一個(gè)以上，對(duì)細(xì)胞凋亡有抑制作用。結(jié)論成功建立體外細(xì)胞模型，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)提取的廣棗總黃酮對(duì)心肌細(xì)胞有保護(hù)作用，通過(guò)凋亡相關(guān)實(shí)驗(yàn)證實(shí)病毒性心肌炎發(fā)病過(guò)程中有心肌細(xì)胞凋亡，且廣棗總黃酮能抑制心肌細(xì)胞凋亡作用。

簡(jiǎn)介：登革熱DENGUEFEVERDF是由登革病毒引起的蟲媒病毒性傳染病，主要通A過(guò)埃及伊蚊ΑEDESΑEGYPTI和白紋伊蚊ΑEDESΑLBOPICTUS傳播，登革出血熱DENGUEHEMRHAGICFEVERDHF則是登革熱的一種嚴(yán)重類型，伴有休克癥狀的登革出血熱稱為登革休克綜合征DENGUESHOCKSYNDROME，DSS。本病廣泛流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)，是世界上分布最廣、發(fā)病人數(shù)最多、危害最大的一種蟲媒病毒性疾病，已經(jīng)成為一個(gè)世界性的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題。我國(guó)登革熱的首次流行發(fā)生于1873年福建省廈門市，建國(guó)后的首次暴發(fā)流行發(fā)生于1978年廣東省佛山市，自1978年以來(lái)我國(guó)已發(fā)生14次登革熱暴發(fā)流行或局部流行，以廣東、海南、福建等東南沿海地區(qū)為主，登革熱也已經(jīng)成為我國(guó)的一個(gè)嚴(yán)重公共衛(wèi)生問(wèn)題。登革病毒DENGUEVIRUS，DENV屬于黃病毒科，分為Ⅰ～Ⅳ型四個(gè)血清型。DENV是正鏈RNA病毒，大小約為11KB，編碼3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白。目前，登革熱的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，也沒有有效的疫苗或治療藥物。新近的研究表明，RNA干擾技術(shù)可能成為治療登革病毒感染的新的突破口。RNA干擾RNAINTERFERENCE，RNAI現(xiàn)象是一種由雙鏈RNADOUBLESTRRNA，DSRNA啟動(dòng)的序列特異性基因沉默機(jī)制，由REWZFIRE于1998年首先發(fā)現(xiàn)并命名。RNAI從線蟲到人類細(xì)胞中都廣泛存在，是自然界中生物抵抗外源基因或病毒入侵的一種防御方式。近年來(lái)，RNAI方面的研究取得了很大進(jìn)展，20002002年連續(xù)3年被SCIENCE雜志列入年度世界十大科學(xué)突破。RNAI技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于病毒防治、基因功能研究、腫瘤基因治療、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種領(lǐng)域，充分顯示了其巨大的應(yīng)用潛力。作為宿主細(xì)胞抑制病毒復(fù)制、清除病毒的一種胞內(nèi)機(jī)制，RNAI已被證明可應(yīng)用于HIV、HBV以及SARS冠狀病毒等多種抗病毒感染研究領(lǐng)域。慢病毒LENTIVIRUS是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，具有逆轉(zhuǎn)錄病毒的基本結(jié)構(gòu)，作為一種新型的基因治療載體，已廣泛應(yīng)用于多種基因功能的研究中。慢病毒能感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞，且慢病毒在感染細(xì)胞后能整合到受感染細(xì)胞的基因組中，隨著細(xì)胞的生長(zhǎng)而長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定表達(dá)目的基因，因此不需要反復(fù)感染，效果持久。慢病毒介導(dǎo)的RNAI具有高效、持久、穩(wěn)定的特點(diǎn)，是攜帶干擾RNA的理想載體。目前，由慢病毒介導(dǎo)的RNAI抑制登革病毒復(fù)制的研究尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，因此，本研究擬針對(duì)Ⅰ型登革病毒設(shè)計(jì)特定序列的SIRNASMALLINTERFERINGRNA，在白蚊伊蚊C636細(xì)胞中篩選可高效抑制登革病毒復(fù)制的SIRNA序列；再將該序列重組到慢病毒載體中，構(gòu)建長(zhǎng)效表達(dá)SIRNA慢病毒載體，包裝慢病毒，并將其導(dǎo)入C636細(xì)胞中，為下一步研究RNAI長(zhǎng)效抑制登革病毒的復(fù)制奠定基礎(chǔ)，為登革熱的疫苗研制和臨床基因治療提供依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果第一部分高效抑制登革病毒在蚊細(xì)胞中復(fù)制的SIRNA序列篩選1Ⅰ型登革病毒的擴(kuò)增與定量病毒毒株采用廣州市2002年Ⅰ型登革病毒流行株GZ02218，感染C336細(xì)胞進(jìn)行病毒擴(kuò)增，細(xì)胞病變達(dá)到時(shí)收獲病毒，TCID50測(cè)定病毒滴度，結(jié)果測(cè)得病毒TCID50為103501ML。2SIRNA序列的設(shè)計(jì)與合成根據(jù)GENBANK中廣州市2002年Ⅰ型登革病毒流行株GZ02218、Ⅰ型登革病毒參考株及其它Ⅰ型登革病毒基因序列，針對(duì)病毒基因組不同位置設(shè)計(jì)了10段SIRNA序列，經(jīng)生物信息學(xué)分析，選擇合成其中4段SIRNADENSI1～4。3有效SIRNA序列的初步篩選采用脂質(zhì)體法將合成的4段SIRNA序列轉(zhuǎn)染到C636細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染6小時(shí)后用登革病毒攻擊。病毒攻擊5～7天后，根據(jù)各組細(xì)胞病變情況，初步確定SIRNA片段DENSI2～4無(wú)效，片段DENSI1有效，可進(jìn)一步探討其干擾作用。4SIRNA對(duì)登革病毒干擾作用的探討1SIRNA穩(wěn)定性用標(biāo)記FAM熒光基團(tuán)的SIRNA轉(zhuǎn)染C636細(xì)胞，流式細(xì)胞儀測(cè)得轉(zhuǎn)染后6H及第1、3、5、7天含有熒光的細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比分別為660％、521％、320％、135％、89％。2實(shí)驗(yàn)分組C636細(xì)胞分為以下四個(gè)組正常組無(wú)SIRNA轉(zhuǎn)染、病毒感染；SIRNA組轉(zhuǎn)染SIRNA后用病毒感染攻擊；轉(zhuǎn)染對(duì)照組轉(zhuǎn)染21NT的對(duì)照SIRNA序列后用病毒感染攻擊；病毒陽(yáng)性對(duì)照組不轉(zhuǎn)染SIRNA，直接用病毒感染攻擊。3SIRNA對(duì)受登革病毒攻擊的C636細(xì)胞形態(tài)的影響登革病毒攻擊7天后，觀察各組細(xì)胞形態(tài)，可見正常組細(xì)胞無(wú)病變；病毒陽(yáng)性對(duì)照組和轉(zhuǎn)染對(duì)照組出現(xiàn)大量細(xì)胞病變，細(xì)胞腫脹并成片融合達(dá)到，細(xì)胞數(shù)目明顯減少；SIRNA組細(xì)胞無(wú)病變，細(xì)胞數(shù)目無(wú)明顯減少。4MTT法檢測(cè)C636細(xì)胞存活率結(jié)果登革病毒攻擊7天后，MTT法測(cè)得各組細(xì)胞存活率為SIRNA組769％±45％，轉(zhuǎn)染對(duì)照組439％±36％，病毒陽(yáng)性對(duì)照組236％±146％。SIRNA組與病毒陽(yáng)性對(duì)照組相比具有顯著性差異，細(xì)胞存活率增加226倍P＜005；轉(zhuǎn)染對(duì)照組與病毒陽(yáng)性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異P＞005。5SIRNA對(duì)C636細(xì)胞內(nèi)登革病毒RNA含量的影響登革病毒攻擊7天后，用熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)登革病毒核酸量，正常組未檢測(cè)到病毒核酸，SIRNA組CT值為19914063，轉(zhuǎn)染對(duì)照組CT值為1463±091，病毒陽(yáng)性對(duì)照組CT值為1456±039。SIRNA組與病毒陽(yáng)性對(duì)照組相比△CT值為534，其病毒核酸量?jī)H為病毒陽(yáng)性對(duì)照組的12534，約140，SIRNA對(duì)C636細(xì)胞內(nèi)登革病毒復(fù)制的抑制率達(dá)到9754％，具有顯著性差異P＜005；轉(zhuǎn)染對(duì)照組與病毒陽(yáng)性對(duì)照組相比△CT值為007，無(wú)顯著性差異P＞005。第二部分SIRNA慢病毒載體的構(gòu)建、包裝及鑒定1慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定1根據(jù)第一部分篩選得到的有效SIRNA片段設(shè)計(jì)合成一對(duì)DNAOLIGO序列，經(jīng)退火形成雙鏈后，在T4鏈接酶作用下，與線性化的表達(dá)質(zhì)粒PCDNATM62GWEMGFPMIR進(jìn)行鏈接反應(yīng)，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞DH5Α，經(jīng)抗性基因BLASTICIDIN篩選得到的陽(yáng)性克隆，通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證完全正確，表明重組質(zhì)粒PCDNATM62GWEMGFPMIRSR42構(gòu)建成功，大量擴(kuò)增質(zhì)粒備用。2采用GATEWAY重組技術(shù)構(gòu)建重組慢病毒載體將重組質(zhì)粒PCDNATM62GWEMGFPMIRSR42與質(zhì)粒PDONRTM221和PLENTI6V5DEST進(jìn)行快速BPLR重組反應(yīng)，得到重組慢病毒載體PLENTI6V5DESTSR42，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞ONESHOTSTB13，經(jīng)抗性基因AMPLICILLIN篩選得到的陽(yáng)性克隆，通過(guò)測(cè)序驗(yàn)證完全正確，表明重組慢病毒載體構(gòu)建成功，大量擴(kuò)增質(zhì)粒備用。2慢病毒包裝與滴度測(cè)定用LIPOFECTAMIM2000將重組慢病毒載體PLENTI6V5DESTSR42，與包裝質(zhì)粒PLP1、PLP2、PLPVSVG共轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48H后收集病毒上清液，經(jīng)純化后感染293FT細(xì)胞進(jìn)行病毒滴度測(cè)定，測(cè)得的病毒滴度為75107TUML。3慢病毒感染293T細(xì)胞，檢測(cè)MIRNA的表達(dá)。慢病毒以MOI5感染293FT細(xì)胞，72小時(shí)后收集細(xì)胞，TRIZOL法提取總RNA，RTPCR擴(kuò)增目的序列，擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序驗(yàn)證MIRNA的表達(dá)。測(cè)序結(jié)果經(jīng)序列對(duì)比完全正確，表明重組慢病毒能夠在靶細(xì)胞中表達(dá)目的基因。4慢病毒感染C636細(xì)胞慢病毒以MOI10感染C636細(xì)胞，72小時(shí)后在熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá)情況?？梢娐《窘M細(xì)胞內(nèi)有較多綠色熒光，而空白對(duì)照組無(wú)熒光表達(dá)，表明慢病毒成功轉(zhuǎn)染至C636細(xì)胞中。結(jié)論及研究意義1獲得了一段長(zhǎng)為21NT的SIRNA序列，證實(shí)了其能夠有效抑制登革病毒在蚊細(xì)胞中的復(fù)制。SIRNA轉(zhuǎn)染C636細(xì)胞后，能增加細(xì)胞存活率，并減少病毒載量。2成功構(gòu)建了表達(dá)SIRNA的慢病毒載體，并將其成功轉(zhuǎn)染至C636細(xì)胞中，驗(yàn)證了其在靶細(xì)胞C636細(xì)胞中的表達(dá)。3為下一步研究RNAI長(zhǎng)效抑制登革病毒的復(fù)制奠定了基礎(chǔ)，為登革熱的疫苗研制和臨床基因治療提供了依據(jù)。

簡(jiǎn)介：◎厶爹辦孑碩士學(xué)位論文HANDONGUNIVERSITYMASTERSTHESIS論文題目老年女性急性腦梗死后認(rèn)知障礙與性激素水平的關(guān)系研究INVESTIGATIONOFTHERELATIONSHIPBETWEENMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTANDSERUMSEXUALHORMONESLEVELAFTERACUTEISCHEMICSTROKEOFOLD腸MEN作專導(dǎo)合作導(dǎo)2010年LO月20日結(jié)論?????????????????????????????????????．18附表???????????????????????????????????19參考文獻(xiàn)????????????????????????????．21綜述???????????????????????????????．23致謝??????????????????????????????．31

簡(jiǎn)介：抑郁障礙是一種常見的情感障礙，是目前導(dǎo)致殘疾和死亡的第四大疾病。這種疾病嚴(yán)重地影響一個(gè)人的情緒、思維、自我感覺、人際交往以及軀體功能狀態(tài)，16％的人在一生中某個(gè)時(shí)候可能罹患抑郁。而在臨床上，抑郁癥狀常常和焦慮癥狀合并存在，抑郁障礙患者伴有明顯的焦慮癥狀和認(rèn)知功能損害。在影響抑郁障礙發(fā)病的因素中，隱性認(rèn)知易感因素和應(yīng)對(duì)方式起著非常重要的作用。伴有焦慮癥狀的抑郁障礙患者表現(xiàn)更多的緊張、擔(dān)憂及恐慌的情緒，嚴(yán)重者表現(xiàn)為精神運(yùn)動(dòng)性激越，也多伴植物神經(jīng)癥狀和軀體不適，癥狀更重、更痛苦認(rèn)知功能障礙也更加突出和頑固。因此，本研究引進(jìn)并修訂了國(guó)外RISKIND等人編制的對(duì)焦慮癥狀有特異性的工具隱性不適應(yīng)風(fēng)格問(wèn)卷，來(lái)測(cè)查患者的隱性認(rèn)知風(fēng)格，并對(duì)抑郁障礙患者的隱性認(rèn)知風(fēng)格、應(yīng)對(duì)方式及抑郁癥狀、焦慮癥狀、認(rèn)知功能損害間的關(guān)系進(jìn)行了研究。本研究以281名大學(xué)生及272名抑郁障礙患者為研究對(duì)象，采用訪談法、問(wèn)卷調(diào)查法和心理測(cè)驗(yàn)等方法收集數(shù)據(jù)。本研究包括三個(gè)方面研究一是隱性不適應(yīng)風(fēng)格問(wèn)卷的修訂。選取國(guó)外應(yīng)用較普遍的隱性不適應(yīng)風(fēng)格問(wèn)卷，采用訪談法和問(wèn)卷調(diào)查法收集數(shù)據(jù)，對(duì)問(wèn)卷進(jìn)行跨文化的修訂。研究二是伴與不伴焦慮癥狀兩組抑郁障礙患者隱性認(rèn)知風(fēng)格、抑郁癥狀及認(rèn)知功能的比較研究。采用問(wèn)卷調(diào)查及心理測(cè)驗(yàn)的方法收集數(shù)據(jù)，用T檢驗(yàn)、方差分析等方法，分析比較患者的隱性認(rèn)知風(fēng)格、抑郁癥狀及認(rèn)知功能損害。研究三是隱性認(rèn)知風(fēng)格與抑郁障礙癥狀間的關(guān)系研究。通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查、心理測(cè)驗(yàn)的方法收集數(shù)據(jù)，用結(jié)構(gòu)方程模型驗(yàn)證應(yīng)對(duì)方式對(duì)隱性認(rèn)知風(fēng)格和抑郁障礙癥狀抑郁癥狀、焦慮癥狀、認(rèn)知功能損害間關(guān)系的中介效應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)1本研究修訂的隱性不適應(yīng)風(fēng)格問(wèn)卷LMSQ在大學(xué)生中具有較好的信效度，對(duì)抑郁障礙患者樣本也適用，可作為一種有效的隱性認(rèn)知風(fēng)格測(cè)量工具在心理學(xué)中使用。2與不伴焦慮癥狀的抑郁障礙患者相比，伴有焦慮癥狀抑郁障礙患者的抑郁癥狀更嚴(yán)重；認(rèn)知功能損害更突出、更頑固；隱性認(rèn)知風(fēng)格得分更高，更傾向于高估外界的威脅。3在隱性認(rèn)知風(fēng)格與抑郁障礙癥狀的關(guān)系上，隱性認(rèn)知風(fēng)格可以正向預(yù)測(cè)抑郁障礙患者的焦慮癥狀，負(fù)向預(yù)測(cè)應(yīng)對(duì)方式。應(yīng)對(duì)方式可部分中介隱性認(rèn)知風(fēng)格對(duì)抑郁癥狀、焦慮癥狀和認(rèn)知功能的效應(yīng)。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多基于柯薩奇B3反向遺傳系統(tǒng)的病毒示蹤及CXCL10重組疫苗的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：推進(jìn)信息化教育，開展多媒體教學(xué)與網(wǎng)絡(luò)教學(xué)迫切需要大批優(yōu)質(zhì)的三維動(dòng)畫學(xué)習(xí)資源，然而部分開發(fā)者對(duì)于三維動(dòng)畫的認(rèn)識(shí)，還停留在信息傳遞的層面，把學(xué)習(xí)者放在被動(dòng)接受的地位上。認(rèn)知工具的基本思想是將學(xué)習(xí)者放在認(rèn)知主體的地位上，幫助學(xué)習(xí)者完成認(rèn)知操作、促進(jìn)學(xué)習(xí)者進(jìn)行思維、問(wèn)題解決和反思。本文認(rèn)為用認(rèn)知工具思想來(lái)指導(dǎo)三維動(dòng)畫學(xué)習(xí)資源的設(shè)計(jì)，可以發(fā)揮三維動(dòng)畫在教育領(lǐng)域的價(jià)值，有效促進(jìn)學(xué)習(xí)者的認(rèn)知。圍繞這個(gè)主題，本研究主要完成了以下幾個(gè)方面的工作第一，分析了三維動(dòng)畫的特點(diǎn)及其在教育領(lǐng)域的開發(fā)情況，梳理了國(guó)內(nèi)外有關(guān)認(rèn)知工具理論的研究，探討三維動(dòng)畫作為認(rèn)知工具的特點(diǎn)和功能目標(biāo)。第二，在理論研究的基礎(chǔ)上，分析了學(xué)習(xí)者的認(rèn)知過(guò)程和視知覺規(guī)律，提出了具有較好操作性的設(shè)計(jì)策略，并且結(jié)合案例進(jìn)行闡述，以幫助三維動(dòng)畫的開發(fā)者設(shè)計(jì)出優(yōu)質(zhì)的、符合學(xué)習(xí)需要的資源。第三，在認(rèn)知工具理論的指導(dǎo)下，基于上述設(shè)計(jì)策略，開發(fā)了三維教學(xué)動(dòng)畫作品，并且分析了設(shè)計(jì)策略在具體實(shí)例的開發(fā)中的運(yùn)用，歸納了具體實(shí)例開發(fā)中的一些經(jīng)驗(yàn)及努力方向。最后，對(duì)本研究進(jìn)行了總結(jié)，反思了不足之處，探討了進(jìn)一步的研究方向。

簡(jiǎn)介：第一部分覆蓋中國(guó)人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位的確定及預(yù)測(cè)目的覆蓋中國(guó)人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位的確定及預(yù)測(cè)。方法1、根據(jù)山東大學(xué)衛(wèi)生系統(tǒng)計(jì)教研室薛付忠老師建立的中國(guó)HLAⅠ積累表型頻率（CPF）空間預(yù)測(cè)系統(tǒng)依次預(yù)測(cè)A2，A24，A1，A3，A11，A68，B44，B7，A23，A26，B35，B38，B8，B27十四個(gè)基因位點(diǎn)在中國(guó)人群的覆蓋率（CPF值），評(píng)價(jià)和預(yù)測(cè)HLA特異的HCMV串聯(lián)表位核酸疫苗在中國(guó)不同地理位置上人群內(nèi)的免疫效果；2、利用從1996年以來(lái)發(fā)表在PUBMED上被SCI收錄的23篇研究HCMV表位的文獻(xiàn)，從中選擇能針對(duì)HCMV多種蛋白抗原的多個(gè)CTL表位、TH表位和B細(xì)胞表位，能夠激發(fā)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答，且能與HLAⅠ分子和HLAⅡ分子的基因位點(diǎn)穩(wěn)定結(jié)合的表位；3、利用SYFPEITHIMHC表型及表位預(yù)測(cè)系統(tǒng)和MAPPP蛋白酶體降解預(yù)測(cè)系統(tǒng)對(duì)所選表位進(jìn)行表位肽預(yù)測(cè)和MAPPP蛋白酶體切割表位生成預(yù)測(cè)；4、從PUBMEDNUCLEOTIDENC_001347人巨細(xì)胞病病毒AD169株各蛋白的基因序列中找出各表位相對(duì)應(yīng)的核苷酸序列并核對(duì)，將各表位的核苷酸序列按等位基因的頻率分布順序排列起來(lái)，串聯(lián)成一條核苷酸序列；5根據(jù)KOZAK規(guī)則引入KOZAK序列以獲得HCMV串聯(lián)表位核苷酸序列在真核表達(dá)載體中的高效表達(dá)；6將HCMV串聯(lián)表位的核苷酸序列輸入DNAMAN軟件，根據(jù)輸出的酶切位點(diǎn)結(jié)果結(jié)合所要構(gòu)建入穿梭載體的多克隆位點(diǎn)，確定串聯(lián)表位核苷酸序列兩端的酶切位點(diǎn)。結(jié)論1、根據(jù)山東大學(xué)衛(wèi)生系統(tǒng)計(jì)教研室薛付忠老師建立的中國(guó)HLAⅠ積累表型頻率（CPF）空間預(yù)測(cè)系統(tǒng)，對(duì)所選HCMV表位結(jié)合的14個(gè)HLA基因位點(diǎn)及其組合進(jìn)行了預(yù)測(cè)，顯示A2，A24，A1，A3，A11五個(gè)優(yōu)勢(shì)基因位點(diǎn)的CPF值是881％，；A2，A24，A1，A3，A11，A68，B44，B7，A23，A26，B35，B38，B8，B27十四個(gè)基因位點(diǎn)的CPF值是921％，顯示HLA特異的HCMV串聯(lián)表位核酸疫苗在中國(guó)人群的覆蓋頻率達(dá)90％以上，預(yù)測(cè)了HLA特異的HCMV串聯(lián)表位核酸疫苗在中國(guó)不同地理位置上人群內(nèi)的免疫效果，理論上其免疫效果可達(dá)90％以上。2、我們選擇了HCMV的十五種抗原蛋白PP28，PP50，PP65，PP150，PP71，GH，GB，IE1，IE2，US2，US3，US6，US11，UL16，UL18，分別在病毒的黏附、復(fù)制、組裝及再激活過(guò)程中表達(dá)，在這些抗原中選取了84個(gè)表位，其中針對(duì)HLAⅠ分子基因位點(diǎn)的CTL表位76個(gè)，針對(duì)HLAⅡ分子基因位點(diǎn)的TH表位7個(gè)，能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的B細(xì)胞表位1個(gè)，通過(guò)啟動(dòng)針對(duì)上述抗原表位的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答，理論上可以在各個(gè)階段控制病毒的復(fù)制，防止HCMV疾病的形成。3、應(yīng)用DNAMAN軟件、KOZAK規(guī)則及PUBMEDNUCLEOTIDENC001347HUMANHERPESVIRUS5STRAINAD169HCMV基因組得出了覆蓋中國(guó)人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位核苷酸序列，在起端加上了KOZAK序列，可以獲得串聯(lián)表位核苷酸序列在真核表達(dá)載體中的高效表達(dá)；末端加上了6個(gè)HIS標(biāo)簽序列，可以通過(guò)6個(gè)HIS抗體應(yīng)用WESTERNBLOT及細(xì)胞免疫組化檢測(cè)HCMV串聯(lián)表位的表達(dá)；起始兩端加入了NHEⅠ和NOTⅠ酶切位點(diǎn)，可以插入穿梭載體PHMCMV5載體的多克隆位點(diǎn)，為制備中國(guó)人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位腺病毒載體核酸疫苗打下了基礎(chǔ)。第二部分中國(guó)人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位腺病毒核酸疫苗的制備目的HCMV感染是引起移植患者和新生兒高發(fā)病率和死亡率的原因，世界范圍的醫(yī)學(xué)會(huì)組織指出應(yīng)優(yōu)先發(fā)展控制HCMV疾病的疫苗，盡管做出了很大的努力但目前仍無(wú)被臨床許可的疫苗嵌合型復(fù)制缺陷型腺病毒載體AD5F35比傳統(tǒng)的AD5型具有更好的趨向性和更高的容納外源基因的能力，在多種細(xì)胞上高效表達(dá)外源基因。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用嵌合型AD5F35構(gòu)建多重HLAⅠ、HLAⅡ分子限制CTL、TH多表位核酸疫苗AD5F35CTLTH以及針對(duì)體液免疫應(yīng)答的HCMV線性B細(xì)胞表位核酸疫苗AD5F35AD1。方法1、采用重疊區(qū)擴(kuò)增基因拼接法（GENESPLICINGBYOVERLAPEXTENSION，SOEING）和PCR技術(shù)合成HCMV串聯(lián)T細(xì)胞表位全長(zhǎng)基因；2、應(yīng)用PCR技術(shù)從HCMVAD169全基因組擴(kuò)增線性B細(xì)胞表位GBAD1的基因；3、利用同源重組技術(shù)從穿梭載體，將CTLTH和AD1基因分別插入PHMCMV5的NHEⅠNOTⅠ和KPNⅠAFLⅡ酶切位點(diǎn)，構(gòu)建穿梭載體PHMCMV5CTLTH和PHMCMV5AD1，應(yīng)用NHEⅠNOTⅠ和KPNⅠARLⅡ酶切分析和測(cè)序分析鑒定目的載體；4、利用ⅠCEUⅠPⅠSCEⅠ雙酶切和體外重組技術(shù)將穿梭載體上包含CMV啟動(dòng)子、目的基因、SV40POLYA尾的表達(dá)盒插入腺病毒表達(dá)載體PAD5F35，構(gòu)建重組腺病毒表達(dá)載體AD5F35CTLTH和PAD5F35AD1，應(yīng)用XHOⅠ和ⅠCEUⅠPⅠSCEⅠ酶切分析和測(cè)序分析鑒定目的載體；5、應(yīng)用PACⅠ線性化重組腺病毒表達(dá)載體AD5F35CTLTH和PAD5F35AD1，用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染HEK293，包裝重組腺病毒AD5F35CTLTH和AD5F35AD1，待培養(yǎng)10天出現(xiàn)CPE效應(yīng)時(shí)收取病毒；6、應(yīng)用HEK293細(xì)胞大量擴(kuò)增重組腺病毒AD5F35CTLTH和AD5F35AD1，擴(kuò)增至五代，應(yīng)用快速腺病毒感染性滴度（TCID50）檢測(cè)試劑盒測(cè)定大量擴(kuò)增后的的重組腺病毒的滴度；7、用重組腺病毒AD5F35CTLTH和AD5F35AD1分別轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞，利用RTPCR和WESTERNBLOT技術(shù)分析CTLTH和AD1在MRNA和蛋白水平的表達(dá)；8、用重組腺病毒AD5F35CTLTH和AD5F35AD1分別轉(zhuǎn)染PBMC，利用細(xì)胞免疫化學(xué)和臺(tái)盼蘭染色分析重組腺病毒在PBMC上的表達(dá)和對(duì)PBMC活性的影響。結(jié)論1、我們成功制備出中國(guó)人群HLA特異的HCMV串聯(lián)T細(xì)胞表位腺病毒載體核酸疫苗AD5F35CTLTH和針對(duì)體液免疫應(yīng)答的HCMV線性B細(xì)胞表位腺病毒載體核酸疫苗AD5F35AD1，為下一步的免疫應(yīng)答實(shí)驗(yàn)打下了基礎(chǔ)。2、重組腺病毒疫苗AD5F35CTLTH和AD5F35AD1可以在PBMC高效表達(dá)目的蛋白，且不影響PBMC的活性。第三部分中國(guó)人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位腺病毒核酸疫苗體外免疫效果評(píng)價(jià)目的過(guò)繼免疫包括體液免疫和細(xì)胞免疫在控制HCMV感染方面起關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)中國(guó)人群HLA特異的HCMV串聯(lián)表位腺病毒核酸疫苗的體外免疫效果。方法1、用EBV轉(zhuǎn)化PBMC，建立類淋巴母細(xì)胞系（LYMPHOBLASTOIDCELLLINESLCL）；2、應(yīng)用HCMV多表位腺病毒載體疫苗AD5F35CTLTH刺激HCMV健康攜帶者的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），體外擴(kuò)增抗原特異性CTL；3、應(yīng)用抗原特異性CTL進(jìn)行細(xì)胞毒試驗(yàn)，檢測(cè)CTL的殺傷活性；4、應(yīng)用ELISPOT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AD5F35CTLTH刺激HCMV健康攜帶者的PBMC后和抗原特異性CTL分泌IFNΓ的情況；5、細(xì)胞內(nèi)染色法檢測(cè)AD5F35CTLTH刺激HCMV健康攜帶者的PBMC后CD8T細(xì)胞IFNΓ的表達(dá)。結(jié)論1、本實(shí)驗(yàn)顯示了多表位抗原提呈系統(tǒng)擴(kuò)增抗原特異性T細(xì)胞的有效性。2、本試驗(yàn)顯示了HCMV多表位腺病毒核酸疫苗可以高效擴(kuò)增免疫顯性和亞顯性的抗原特異性T細(xì)胞。3、實(shí)現(xiàn)了單個(gè)表達(dá)結(jié)構(gòu)可以擴(kuò)增免疫顯性和亞顯性的抗原特異性T細(xì)胞，較之以前擴(kuò)增不同的抗原特異性T細(xì)胞需要不同的刺激策略具有強(qiáng)大的優(yōu)勢(shì)。4、我們的多表位重組技術(shù)可以有望適用于不同疾病的臨床過(guò)繼免疫治療。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多孕期吸入異氟醚對(duì)子代大鼠認(rèn)知功能的影響.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：睡眠是人類不可缺少的生理過(guò)程。睡眠不僅可以維持個(gè)體生存及正常的生理功能，還具有促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育、易化學(xué)習(xí)、形成記憶的功能。睡眠和覺醒是一個(gè)包括復(fù)雜的神經(jīng)環(huán)路和多種神經(jīng)化學(xué)成分的行為反應(yīng)。神經(jīng)遞質(zhì)在此過(guò)程中發(fā)揮了極其重要的作用。神經(jīng)肽SNEUROPEPTIDES，NPS是在2004年最新研究發(fā)現(xiàn)的一種與睡眠和覺醒相關(guān)的神經(jīng)肽，其相應(yīng)的G蛋白偶聯(lián)受體即為神經(jīng)肽S受體NEUROPEPTIDESRECEPT，NPSR。最早的研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)肽S廣泛分布在脊椎動(dòng)物人、小鼠、大鼠、雞、猩猩、牛中，在成年大鼠的腦組織、甲狀腺、唾液腺和乳腺中都較高表達(dá)。神經(jīng)肽S與其特異性受體結(jié)合發(fā)揮其生理作用，能夠調(diào)節(jié)睡眠覺醒、減少驚恐發(fā)作、影響攝食行為、調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)及變態(tài)反應(yīng)等。而其中尤以它與睡眠覺醒方面的作用最為突出和明確。由于神經(jīng)肽S發(fā)現(xiàn)時(shí)間較晚，目前對(duì)于神經(jīng)肽S在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的分布及功能研究很少，僅有少數(shù)研究報(bào)道。為進(jìn)一步深入對(duì)神經(jīng)肽S功能的認(rèn)識(shí)，本研究首先系統(tǒng)研究了神經(jīng)肽S在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)和分布特點(diǎn)，為深入研究其功能打下基礎(chǔ)。在此實(shí)驗(yàn)中，我們對(duì)大鼠腦組織和脊髓做連續(xù)切片，首次全面研究神經(jīng)肽S在大鼠整個(gè)神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)分布情況。其次，鑒于神經(jīng)肽S已被發(fā)現(xiàn)的最主要的作用調(diào)節(jié)睡眠覺醒的作用，首次研究了不同時(shí)程REM期睡眠剝奪后大鼠下丘腦內(nèi)神經(jīng)肽S的表達(dá)變化，以期進(jìn)一步研究神經(jīng)肽S與睡眠覺醒的關(guān)系。最后，首次研究了中樞給予神經(jīng)肽S是否可以改善REM睡眠剝奪導(dǎo)致的大鼠認(rèn)知功能損害，并探索其可能的分子機(jī)制。本研究使用免疫組織化學(xué)、原位雜交技術(shù)研究神經(jīng)肽S蛋白和MRNA在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)和分布特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，神經(jīng)肽S廣泛分布于大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，且免疫組織化學(xué)結(jié)果和原位雜交結(jié)果具有高度一致性。在嗅球、初級(jí)嗅皮質(zhì)區(qū)域，神經(jīng)肽S均呈陽(yáng)性染色，陽(yáng)性染色主要集中在細(xì)胞胞體，證實(shí)神經(jīng)肽S可能參與中樞嗅覺系統(tǒng)的興奮傳遞過(guò)程。神經(jīng)肽S強(qiáng)陽(yáng)性染色集中在大腦運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)、軀體感覺皮質(zhì)區(qū)、梨狀皮質(zhì)和嗅皮質(zhì)，尤其是在運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)、軀體感覺皮質(zhì)區(qū)第V層存在致密染色，提示神經(jīng)肽S可能參與神經(jīng)局部環(huán)路的構(gòu)建。在海馬中，在CA1CA3區(qū)錐體細(xì)胞的胞體和軸突均呈現(xiàn)不同程度的神經(jīng)肽S陽(yáng)性染色，提示神經(jīng)肽可能參與海馬的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)傳遞，也可能與認(rèn)知功能有關(guān)。在丘腦的很多神經(jīng)核團(tuán)中，尤其是前腹側(cè)核、前內(nèi)側(cè)核、前背側(cè)核和腹外側(cè)核中發(fā)現(xiàn)神經(jīng)肽S廣泛表達(dá)；在下丘腦的室旁核和背內(nèi)側(cè)核也有神經(jīng)肽S陽(yáng)性神經(jīng)元表達(dá)。神經(jīng)肽S在這些部位的分布提示它可能參與機(jī)體多種生理活動(dòng)，包括調(diào)節(jié)體溫、水鹽代謝、活動(dòng)能力、飲食、睡眠覺醒和激素分泌等。在腦干中，神經(jīng)肽S受體強(qiáng)陽(yáng)性染色分布在藍(lán)斑、外側(cè)臂旁核、三叉神經(jīng)中腦核、三叉神經(jīng)運(yùn)動(dòng)核。在小腦皮質(zhì)中，浦肯野細(xì)胞中神經(jīng)肽S陽(yáng)性染色最強(qiáng)，幾乎所有的浦肯野細(xì)胞均為陽(yáng)性染色。致密染色集中在細(xì)胞胞體和軸突上。在脊髓頸部、胸部、腰部、骶部灰質(zhì)區(qū)均有神經(jīng)肽S陽(yáng)性細(xì)胞分布，在背角染色較強(qiáng)。其次，使用免疫組織化學(xué)、原位雜交、RTPCR等技術(shù)觀察不同時(shí)程REM睡眠剝奪對(duì)大鼠下丘腦神經(jīng)肽S蛋白及MRNA表達(dá)量的影響。將成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組CC、環(huán)境對(duì)照組TC、REM睡眠剝奪組SD，每組又分為1天、3天、5天組。采用改良多平臺(tái)水環(huán)境睡眠剝奪法MMPM建立大鼠的REM睡眠剝奪模型，完成相應(yīng)時(shí)間的REM睡眠剝奪后，測(cè)定大鼠下丘腦神經(jīng)肽S表達(dá)量的變化。免疫組織化學(xué)及原位雜交結(jié)果顯示在REM期睡眠剝奪后，下丘腦的背內(nèi)側(cè)核和室旁核的NPS蛋白和MRNA表達(dá)發(fā)生改變。在這兩個(gè)核團(tuán)，CC組和TC組的NPS表達(dá)較少，散在分布于核團(tuán)中。而REM期睡眠剝奪1天后，大鼠背內(nèi)側(cè)核和室旁核NPS蛋白和MRNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)仍較少。到REM期睡眠剝奪的第3天，可以觀察到大鼠背內(nèi)側(cè)核和室旁核NPS蛋白和MRNA陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量均增多，在REM期睡眠剝奪的第5天，仍呈現(xiàn)這樣的趨勢(shì)。RTPCR結(jié)果顯示，CC組和TC組下丘腦內(nèi)NPSMRNA的表達(dá)量很少，在REM期睡眠剝奪1天后，大鼠下丘腦的NPSMRNA的表達(dá)也較少。而在REM期睡眠剝奪3天和5天組，大鼠下丘腦中NPSMRNA的表達(dá)量較CC組，TC組和SD1天組明顯升高。最后，我們研究了中樞給予神經(jīng)肽S對(duì)REM睡眠剝奪導(dǎo)致的大鼠認(rèn)知功能損害是否有改善作用，并探索其可能的分子機(jī)制。SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組CC、環(huán)境對(duì)照組TC、REM睡眠剝奪組SD，其中每組又分為神經(jīng)肽S側(cè)腦室給藥組NPS和人工腦脊液對(duì)照組ACSF?？偣卜譃榱MCCACSF組，TCACSF組，SDACSF組，CCNPS組，TCNPS組和SDNPS組。睡眠剝奪時(shí)間為72小時(shí)。各組大鼠側(cè)腦室置管，恢復(fù)后采用改良多平臺(tái)水環(huán)境睡眠剝奪法MMPM建立大鼠的REM睡眠剝奪模型，同時(shí)側(cè)腦室給予神經(jīng)肽S或人工腦脊液。選用MRIS水迷宮的定位航行實(shí)驗(yàn)對(duì)所有大鼠進(jìn)行空間認(rèn)知學(xué)習(xí)能力的測(cè)定，72小時(shí)的REM睡眠剝奪結(jié)束后，利用MRIS水迷宮的空間探索實(shí)驗(yàn)測(cè)定大鼠的空間記憶能力。迷宮測(cè)試完畢，運(yùn)用免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)免疫印跡WESTERNBLOT等方法測(cè)定大鼠海馬磷酸化的CREBPCREB表達(dá)的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明72小時(shí)REM期睡眠剝奪后，大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力與正常對(duì)照和環(huán)境對(duì)照組的大鼠相比明顯減退；正常對(duì)照組與環(huán)境對(duì)照組大鼠的空間記憶能力無(wú)明顯差異P＞005；CCNPS組大鼠和TCNPS組大鼠的空間記憶能力比CCACSF組和TCACSF組有所提高，而空間學(xué)習(xí)能力無(wú)差別；SDNPS組大鼠的空間記憶能力較SDACSF組明顯增強(qiáng)，空間學(xué)習(xí)能力也有所提高；72小時(shí)REM期睡眠剝奪后，大鼠海馬的PCREB表達(dá)下降，SDNPS組大鼠海馬的PCREB表達(dá)量較SDACSF組增高。本課題聯(lián)合使用免疫組織化學(xué)和原位雜交技術(shù)，首次系統(tǒng)研究了神經(jīng)肽S蛋白和MRNA在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)和分布特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)該神經(jīng)肽廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元中，在皮質(zhì)、杏仁核、海馬、丘腦、下丘腦、腦干、脊髓、嗅球都有分散表達(dá)。提示神經(jīng)肽S可能參與多種神經(jīng)生理活動(dòng)。首次研究了REM期睡眠剝奪后，大鼠下丘腦內(nèi)NPS蛋白和MRNA的表達(dá)變化情況，發(fā)現(xiàn)在持續(xù)REM期睡眠剝奪狀態(tài)下，下丘腦內(nèi)的NPS表達(dá)增加，證實(shí)了NPS與覺醒的相互關(guān)系，在受到外天刺激無(wú)法正常睡眠時(shí)，機(jī)體會(huì)自身調(diào)節(jié)，分泌足量的NPS來(lái)維持覺醒。我們還發(fā)現(xiàn)，REM睡眠剝奪對(duì)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力有損害作用，神經(jīng)肽S可以緩解REM期睡眠剝奪造成的認(rèn)知功能損傷，REM期睡眠剝奪后，海馬的PCREB表達(dá)下調(diào)，NPS可以部分逆轉(zhuǎn)睡眠剝奪引起的PCREB表達(dá)下調(diào)。提示神經(jīng)肽S可能通過(guò)調(diào)節(jié)PCREB的表達(dá)來(lái)改善REM睡眠剝奪造成的認(rèn)知功能損傷。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)UDC博士學(xué)位論文密級(jí)OSAHS對(duì)認(rèn)知功能的影響及相關(guān)機(jī)理研究COGNITIVEIMPAIRMENTINOSAHSPATIENTSANDITSRELATEDMECHANISM作者姓名王衛(wèi)紅學(xué)科專業(yè)護(hù)理學(xué)學(xué)院系、所護(hù)理學(xué)院指導(dǎo)教師何國(guó)平教授論文答辯日期蘭D答辯委員會(huì)磕遺中南大學(xué)二0一二年五月原創(chuàng)性聲明Y2197070IIIIIIIRLLLLLLLLLLLLLLLHIIIIIIIIIIIIIII1I本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)RRPR導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，淪文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明。作者簽名墨蘭』蘭日期墨蘭年￡月坦日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。作者虢絲跏簽感絲年』生日

簡(jiǎn)介：揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文人乳頭瘤病毒16型E6E7基因疫苗的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究姓名謝錚申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)皮膚病學(xué)與性病學(xué)指導(dǎo)教師高慧20100401揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文2IFA法分析基因免疫在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。結(jié)果構(gòu)建的HPVL6E6E7基因重組質(zhì)粒PCDNAE6E7，能在COS7細(xì)胞中暫態(tài)表達(dá)，免疫小鼠的J『N清中可檢鋇TLN抗E7抗體，而原載體PEDNA31和生理鹽水注身J’后，未檢測(cè)M特異的抗F7抗體通過(guò)ELISA定量檢測(cè)細(xì)胞因子IL2和IFNL分泌情況，實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生的IL2明顯高于對(duì)照組與空白組，P001；實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)生的IFN7明顯高于對(duì)照組與空白組，P005各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明構(gòu)建的HPVL6E6E7基因疫苗能夠在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中暫態(tài)表達(dá)，免疫小鼠后通過(guò)IFA法和ELISA定量檢測(cè)分析該疫苗株可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性的體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)。本文通過(guò)HPV16E6E7的基因疫苗的基礎(chǔ)研究為HPV感染性疾病相關(guān)性疫苗的研制提供了實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，為HPV的治療尋找一種有效的方法，為HPVL6E6E7基因疫苗的開發(fā)做了有益的嘗試。因此本研究工作將為下一步利用基因疫苗治療HPV感染性疾病的臨床前期研究打下了基礎(chǔ)，同時(shí)本研究結(jié)果在控制HPV感染性疾病方面將會(huì)有潛在的應(yīng)用價(jià)值。關(guān)鍵詞人乳頭瘤病毒16型，E6E7基因，DNA疫苗，體液免疫和細(xì)胞免疫

簡(jiǎn)介：學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明1、堅(jiān)持以“求實(shí)、創(chuàng)新“的科學(xué)精神從事研究工作。2、本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作和取得的研究成果。3、本論文中除引文外，所有實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實(shí)的。4、本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外，不包含其他人或其它機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。5、其他同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中作了聲明并表示了謝意。作者簽名日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解南京師范大學(xué)有關(guān)保留T使用學(xué)位論文的規(guī)定；學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版；有權(quán)將學(xué)位論文用于非贏利目的的少量復(fù)制并允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱；有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索；有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。作者簽名日期目錄IUIIIIIIL11111TILLIIIY1728503中文摘要OOOOOO1英文摘要OOOOOSOOOOOOOOO2前言一一””一””“”一3刖吾”“””一”””“”一”一一“””””一”“”””一““”“””一”一一3第一章文獻(xiàn)綜述OOOOOOIOO8一、認(rèn)知風(fēng)格的概念8二、認(rèn)知風(fēng)格研究的歷史的回顧12三、以人格為中心的認(rèn)知風(fēng)格研究24四、本研究的整體思路和要解決的問(wèn)題32第二章研究方法OOOOOO35一、詞匯學(xué)方法35二、AB5C方法00000039三、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法41四、測(cè)驗(yàn)量表、被試和施測(cè)過(guò)程46第三章認(rèn)知風(fēng)格詞匯表的編制EOOOOOOOO一EOOOOOOOOEEE49一、研究目的49二、認(rèn)知風(fēng)格詞匯表的編制‘乞‘J_一J49三、認(rèn)知風(fēng)格詞匯表的信度和效度檢驗(yàn)5L第四章認(rèn)知風(fēng)格的特質(zhì)結(jié)構(gòu)’J_“53一、研究目的53二、研究方法53三、研究結(jié)果ID0053四、討論58五、結(jié)論62第五章認(rèn)知風(fēng)格特質(zhì)結(jié)構(gòu)的效度檢驗(yàn)64一、研究目的64

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多病毒性傳染病患者外周血sPD-1的表達(dá)和T細(xì)胞的活化及其臨床意義.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：【研究背景】乙型肝炎病毒HBV（HEPATITISBVIRUS）是指引起人類急、慢性肝炎的DNA病毒，也稱丹氏顆粒。HBV基因組（HBVDNA）由雙鏈不完全環(huán)形結(jié)構(gòu)的DNA組成，含約3200個(gè)核苷酸，主要分為P、C、X、S四個(gè)區(qū)。HBVDNA具有高度突變性，并由此形成了HBVDNA不同的亞型。研究發(fā)現(xiàn)高度重疊性和MRNA逆轉(zhuǎn)錄復(fù)制中間體是其高突變的主要誘因。根據(jù)全基因序列異質(zhì)性≥8％且同源性我國(guó)是乙肝發(fā)病大國(guó)，就目前的流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)來(lái)看，中國(guó)的乙肝基因型主要為A、B、C、D這四種基因型，并且發(fā)現(xiàn)了不同基因型的HBV的致病性所存在的差異，其基因型與乙型肝炎病情的進(jìn)展、臨床表現(xiàn)、治療耐藥、預(yù)后有著密切的關(guān)系。然而對(duì)于HBV的早期檢測(cè)和分型，至今仍無(wú)準(zhǔn)確有效的檢測(cè)方法，因此，建立一種高效、準(zhǔn)確、易于普及的對(duì)HBV進(jìn)行基因型分析的方法有利于我國(guó)衛(wèi)生事業(yè)對(duì)乙型肝炎的治療前診斷和治療實(shí)施?！狙芯糠椒ā勘緦?shí)驗(yàn)立足于對(duì)HBV進(jìn)行基因分型，通過(guò)生物信息學(xué)分析比對(duì)了全球49個(gè)HBV全基因，其中包括14個(gè)NCBI中作為參考標(biāo)準(zhǔn)的HBV標(biāo)準(zhǔn)株基因型，另外將此結(jié)果同時(shí)與中國(guó)提交給GENBANK的部分HBV全基因比較，最終選擇HBV病毒8種基因型的PRES2和S區(qū)共同保守序列進(jìn)行擴(kuò)增，并在選擇的區(qū)域中進(jìn)一步挑選每種基因型特有的檢測(cè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)相應(yīng)探針，采用反向核酸雜交技術(shù)，結(jié)合BAS通過(guò)ABSELISA和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)擴(kuò)增的PRES2和S區(qū)檢測(cè)片段進(jìn)行快速雜交反應(yīng)，建立一種新型SNP位點(diǎn)檢測(cè)方法，進(jìn)而完成對(duì)HBV基因型別的區(qū)分?！狙芯拷Y(jié)果】1證實(shí)PRES2、PRES1、S基因區(qū)具有重要的分型意義通過(guò)大規(guī)模多重比對(duì)HBV基因組序列，發(fā)現(xiàn)HBVDNA的S區(qū)具有型內(nèi)高度保守、型間差異性大的位點(diǎn)，且這些位點(diǎn)在HBV基因組高突變情況下仍然可作為分型依據(jù)。同時(shí)在構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)序比對(duì)過(guò)程中，證實(shí)了這些位點(diǎn)的高度保守性和型間差異性。而相對(duì)于P區(qū)、C區(qū)和X區(qū)比較，均未發(fā)現(xiàn)較高的連續(xù)型內(nèi)保守區(qū)段。證明S基因區(qū)對(duì)HBV基因型具有重要的分型意義。2獲得西安地區(qū)HBV基因型分布趨勢(shì)通過(guò)對(duì)282例西安地區(qū)乙肝患者抽取血清并提取HBVDNA進(jìn)行構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品并測(cè)序比對(duì)其HBV基因型，獲得了的西安地區(qū)乙肝感染者的HBV基因型分布比例，未見A型，B型占145％，C型占819％，D型占36％，此統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)不同于以往流病調(diào)查的B型和C型比例相近的結(jié)果，有文獻(xiàn)稱HBVC型較HBVB型患者繼發(fā)肝硬化、肝癌的比例要高，此實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可通過(guò)對(duì)采血病人進(jìn)行追蹤調(diào)查證實(shí)HBV患者繼發(fā)癥和HBV基因型的關(guān)系。3建立了一種具有高效、快速、準(zhǔn)確優(yōu)勢(shì)的分型方法此方法同其他HBV的分型檢測(cè)方法相比，可以針對(duì)單堿基進(jìn)行區(qū)分檢測(cè)，其靈敏度不遜色于其他方法依賴機(jī)器的檢測(cè)；不依賴于高昂的設(shè)備和嚴(yán)格的反應(yīng)條件，比其他方法更容易推廣；該方法檢測(cè)具有較快的檢測(cè)速度同時(shí)檢測(cè)條件簡(jiǎn)便，水浴條件下雜交即可完成檢測(cè)，通過(guò)擴(kuò)大單個(gè)膜塊面積和相應(yīng)增多探針數(shù)量則可完成高通量檢測(cè)；該方法的檢測(cè)范圍就HBV分型已經(jīng)完成630BP長(zhǎng)度的片段捕獲，更利于探針設(shè)計(jì)和樣本制備?！狙芯拷Y(jié)論】1HBV的S基因區(qū)具有分型意義，并且能夠作為分型依據(jù)。2西安地區(qū)HBVC型高發(fā)，未見HBVA型，且HBVB型和D型所占比例較小。3證實(shí)TAQ酶的識(shí)別性與單堿基突變位點(diǎn)的位置直接相關(guān)。4完成了一種高效、快速、準(zhǔn)確的乙型肝炎病毒基因分型方法。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多溶瘤腺病毒SG655-mGMP對(duì)腫瘤干細(xì)胞的治療作用研究.pdf精彩內(nèi)容。