偷窥国产在线91,亚洲无线国产观看原创,日本精品aⅴ一区二区三区,久久九九兔免费精品6

簡介：目的丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUSHCV感染是一個全球性健康問題迄今全球約有1720億HCV感染者目前仍無有效的防治方法。因此開發(fā)有效的預防和治療性HCV疫苗就成了一個亟待解決的問題。E2蛋白是HCV最重要的中和靶抗原可誘導機體產生HCV的中和抗體但因其能與人CD81分子結合使B細胞激活的正常信號傳導通路發(fā)生變化導致B淋巴細胞的異常激活和增殖紊亂從而產生免疫抑制作用而可能不適合用作疫苗的靶抗原?，F已證明HCVE2蛋白中與CD81分子結合的位點包括E2蛋白的481491及544551位氨基酸殘基對這兩個位點進行突變使之不再結合人CD81分子而仍然保持其天然構型和中和表位。故這種結構優(yōu)化的HCVE2蛋白有望成為丙肝疫苗的有效靶抗原。腺病毒以其廣泛的宿主范圍、極高的轉染效率、高水平表達外源基因且誘導機體產生針對目的蛋白的免疫應答、上調抗原提呈細胞協同刺激因子的表達、無插入突變性等優(yōu)點成為極具應用前景的基因轉移載體。因此本實驗利用ADEASY腺病毒載體系統構建、包裝重組腺病毒RADE2、RAD△E2RECOMBINANTADENOVIRUSE2、RECOMBINANTADENOVIRUS△E2并且對RADE2誘導的特異性免疫應答進行了研究為丙型肝炎疫苗的研制探索新的途徑。方法1目的基因的擴增與鑒定以PEGFPDHCVE1E2為模板擴增E2目的基因。將擴增產物與PGEMT載體連接轉化感受態(tài)菌ECOLIDH5Α提取質粒進行PCR、酶切鑒定及測序篩選重組子。2真核表達質粒PCDNA30E2的構建將鑒定正確的質粒PGEMTE2用適當的限制性內切酶酶切膠回收目的片段并與經相同酶切的PCDNA30質粒載體連接。經轉化、篩選、PCR和酶切鑒定構建真核表達質粒PCDNA30E2。3突變質粒PCDNA30△E2的構建分別在HCV481491及544551位氨基酸殘基序列中隨機選擇預突變位點486AA的半胱氨酸預突變?yōu)楸奖彼?44、545AA的脯氨酸分別預突變?yōu)榱涟彼帷⒈彼岣髟O計一對突變引物然后分別以PCDNA30E2為模板進行一步法PCR介導的突變反應得到兩種獨立含有各自突變位點的突變質粒PCDNA30△E2①、PCDNA30△E2②然后再用下段序列的突變引物以PCDNA30△E2①為模板再次進行PCR突變反應得到上下段序列同時含有突變位點的質粒PCDNA30△E2③。4重組穿梭質粒的構建將PGEMTE2、PCDNA30△E2用恰當的限制性內切酶雙酶切回收純化目的片段并與經同樣酶切的腺病毒穿梭質粒PADTRACKCMV連接經轉化、篩選、PCR和酶切鑒定構建重組穿梭質粒PADTRACKCMVE2、PADTRACKCMV△E2。5重組腺病毒質粒的構建將重組穿梭質粒PADTRACKCMVE2、PADTRACKCMV△E2分別用內切酶PMEⅠ線性化利用ADEASY系統經兩步法在大腸桿菌BJ5183中與骨架載體PADEASY1同源重組構建重組腺病毒質粒PADE2、PAD△E2。用PACⅠ酶切鑒定將陽性質粒轉化感受態(tài)ECOLIDH5Α挑取陽性克隆以堿裂解法大量提取重組質粒并用聚乙二醇POLYETHYLENEGLYCOLPEG沉淀法進行純化。6重組腺病毒的包裝與擴增將重組腺病毒質粒PADE2、PAD△E2分別用內切酶PACⅠ線性化以陽離子脂質體法轉染HEK293細胞并觀察綠色熒光蛋白GREENFLUESCENTPROTEINGFP的表達。凍融法收集初代病毒液。取初代病毒液感染293細胞進行第二輪擴增同法進行第三、四輪大量擴增大量收集第四代病毒液用腺病毒純化試劑盒進行純化。7重組腺病毒滴度測定待293細胞在96孔板中生長至7080％匯合時以不同稀釋倍數的各代病毒液感染細胞培養(yǎng)48H后以GFP陽性細胞計數法測定病毒滴度病毒滴度熒光細胞數病毒液的稀釋倍數病毒液量。8用PCR、RTPCR分別對重組腺病毒進行鑒定同時用第三代重組腺病毒RADE2感染293細胞2448H后收集細胞WESTERNBLOT法檢測HCVE2的表達。9同法擴增并純化本室前期構建的AD并測定病毒滴度。10用堿裂解法從轉化的DH5Α大腸桿菌中提取質粒PCDNA3E2用聚乙二醇沉淀法進行純化。11動物實驗將68周齡雄性BALBC小鼠隨機分為4組分別為RADE2實驗組、PCDNA30E2陽性對照組、AD陰性對照組和PBS空白對照組。疫苗采用股四頭肌注射其中RADE2組和AD組每間隔2周免疫一次共免疫兩次PCDNA30E2組和PBS組每間隔3周免疫一次共免疫3次。末次免疫后3周每組3只小鼠取脾臟制備淋巴細胞懸液用細胞計數試劑盒CELLCOUNTINGKIT8CCK8進行淋巴細胞增殖活性和特異性細胞毒性T淋巴細胞CYTOTOXICTLYMPHOCYTECTL殺傷活性的檢測。結果1成功構建了質粒PGEMTE2限制性酶切鑒定及測序結果與預期值相符。2成功構建了真核表達質粒PCDNA30E2及三種突變質粒PCDNA30△E2其中PCDNA30△E2①包含的預突變位點486AA的半胱氨酸預突變?yōu)楸奖彼嵛挥贖CV481491AA序列中PCDNA30△E2②包含的預突變位點544及545AA的脯氨酸分別預突變?yōu)榱涟彼?、丙氨酸位于HCV544551AA序列中PCDNA30△E2③同時包含上述兩段序列中的突變位點。3成功構建重組穿梭質粒PADTRACKCMVE2、PADTRACKCMV△E2PCR鑒定及限制酶切分析證明符合預期設計。4成功構建重組腺病毒質粒PADE2、PAD△E2用PACⅠ酶切均得到約30KB的大片段和一個45KB的小片段。5成功包裝并擴增純化重組腺病毒RADE2、RAD△E2。6重組腺病毒RADE2、RAD△E2①③初代至第四代病毒滴度分別為22104PFUML、40107PFUML、10108PFUML、75108PFUML25104PFUML、10107PFUML、265108PFUML、60108PFUML30104PFUML、41107PFUML、37108PFUML、95108PFUML18104PFUML、40106PFUML、67107PFUML、39108PFUML。7PCR對重組腺病毒RADE2、RAD△E2病毒液鑒定RTPCR對第三代重組腺病毒RADE2、RAD△E2感染的293細胞鑒定1％瓊脂糖凝膠電泳均檢測到特異性目的條帶三代RADE2病毒液感染293細胞2448H后提取細胞總蛋白WESTERNBLOT檢測到細胞中有E2蛋白的表達。8小鼠脾淋巴細胞增殖試驗分別以滅活的重組腺病毒RADE2病毒液和刀豆蛋白ACONCANAVALINACONA體外刺激淋巴細胞檢測細胞增殖活性。其中陽性對照CONA刺激時各組均檢測到淋巴細胞非特異性增殖以RADE2病毒液刺激時各組未見到顯著的特異性淋巴細胞增殖。9小鼠脾臟特異性CTL殺傷活性經單因素方差分析表明以重組腺病毒感染的SP20作為靶細胞時ADE2組、AD組及PCDNA30E2組均與PBS組有差別ADE2組、AD組與PCDNA30E2組也有差別P＜005但是ADE2組、AD組兩組無差別以PCDNA30E2轉染SP20作為靶細胞時各組間均無差別P＞005。結論本研究利用ADEASY腺病毒載體系統構建、包裝重組腺病毒RADE2、RAD△E2為丙型肝炎疫苗的研制奠定了基礎。

簡介：目的本研究采集正常產婦抗凝臍帶血樣本進行人巨細胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUSHCMV分離和鑒定分析探討合肥地區(qū)HCMV先天性感染的分子流行病學特征和病毒糖蛋白B基因型別。為進一步研究其致病性、免疫性以及研制HCMV亞單位疫苗提供依據。方法從臨床采集正常順產婦年齡在1938歲的臍帶血樣本160例按實驗設計分別作如下處理1HCMV先天性感染的實驗室檢測HCMV病毒分離將樣本接種至人胚成纖維細胞HF上觀察CPECYTOPATHICEFFECTCPE對分離得到的病毒株應用間接免疫熒光法INDIRECTIMMUNOFLUESCENCEASSAYIFA鑒定后體外培養(yǎng)病毒并提取DNA采用PCR檢測HCMVIE和UL83基因。同時應用PP65抗原血癥的方法直接檢測臍帶血白細胞樣本中HCMVPP65抗原。記錄分析結果確定合肥地區(qū)新生兒HCMV先天性感染率。2HCMV先天性感染臨床分離株的基因型分析通過限制性片段長度多態(tài)性分析RFLP對RSAI和HINFI酶切位點的突變情況進行分析對PCR產物進行純化后測序并且使用MEGA40軟件用鄰接法NEIGHBJOINING構建進化樹。3建立隨訪檔案HCMV先天性感染臨床資料的收集與分析對HCMV先天性感染的新生兒建立隨訪檔案對其進行回顧性調查以及遠期臨床追蹤調查特別是基因變異較大的新生兒應該作為首選隨訪對象。結果1HCMV先天性感染的實驗室檢測結果從臨床采集的160份樣本中經病毒分離鑒定后得到陽性樣本40份病毒分離陽性率為250％PP65抗原血癥的方法得到陽性樣本39份陽性率為244。分析結果后確定合肥地區(qū)HCMV先天性感染率約為250。2HCMV先天性感染臨床分離株的基因型分析應用RFLP分析結果顯示40例陽性標本均為GB2型未見其他型別。同時發(fā)現該基因型已有變異其中HEFEI01HEFEI03和HEFEI21標本分別有24795個28個927和30個突變位點993。MEGA40軟件繪制的系統發(fā)育樹顯示所有的臨床樣本與HCMVAD169株在同一個側枝上但是HEFEI01HEFEI03和HEFEI21三株臨床樣本變異很大與HCMVGB2型的進化距離較遠。3建立隨訪檔案HCMV先天性感染臨床資料的收集與分析HEFEI21分離株的新生兒出生時出現早產胎兒宮內發(fā)育遲緩出生時低體質量出生時體重僅22千克符合宮內發(fā)育遲緩的診斷標準。結論1對160例正常順產婦所娩新生兒的抗凝臍帶血進行HCMV較系統的實驗室檢測和鑒定初步確定合肥地區(qū)正常順產婦所娩新生兒HCMV先天性感染率的基線數據約為2502對于鑒定為HCMV先天性感染的樣本分別命名為HEFEI01HEFEI40。HCMV先天性感染的GB基因序列比對及進化樹分析表明合肥地區(qū)正常順產婦所娩新生兒HCMV先天性感染的基因型別均為GB2型未見其他型別。3同時發(fā)現HEFEI01HEFEI03和HEFEI21三例臨床標本分離病毒株基因變異很大變異最大的HEFEI21分離株的新生兒出生時體重僅22千克。4今后開展臨床隨訪調查時應該將基因變異較大的新生兒作為首選的隨訪對象。

簡介：中國圖書資料分類法分類號單位代碼10660R73735學號S080334貴陽醫(yī)學院貴陽醫(yī)學院2011屆臨床醫(yī)學碩士專業(yè)學位材料臨床醫(yī)學碩士專業(yè)學位材料臨床論文部分臨床論文部分人乳頭狀瘤病毒人乳頭狀瘤病毒在外陰惡性腫瘤中在外陰惡性腫瘤中感染感染情況的情況的研究研究研究生朱向陽導師楊英捷教授年級2008級專業(yè)婦產科學2011年05月29日貴陽醫(yī)學院2011屆碩士研究生畢業(yè)論文0目錄摘要??????????????????????1前言??????????????????????2材料與方法????????????????????3結果??????????????????????7討論??????????????????????11參考文獻?????????????????????13英文摘要?????????????????????16致謝??????????????????????17略縮詞表?????????????????????18論文原創(chuàng)性聲明??????????????????19綜述??????????????????????20附臨床能力考核有關材料臨床輪轉考核表按時間順序學術活動情況表按時間順序臨床能力考試及學位答辯情況表

簡介：既往乙肝病毒感染的彌漫大B細胞淋巴瘤患者利妥昔單抗聯合化療乙肝病毒再激活及臨床分析⑧論文作者簽名竭盛指導教師簽名金盜論文評閱人1亟堂進圭堡醫(yī)垣楦趔吏紅主金醫(yī)瞳評閱人2童自匿主堡醫(yī)亟逝選太堂醫(yī)堂院隨屆筮二醫(yī)院評閱人3佟紅墊圭廷醫(yī)垣逝塹太堂醫(yī)堂院附屬箍二醫(yī)院評閱人4評閱人5答辯委員會主席毖瞳紅塾攮逝江太堂匡堂醫(yī)隨屬箍三醫(yī)院委員1邁丞民塾攮逝塹太堂匡堂院隨屬』L童醫(yī)醫(yī)委員2筮苤夔塾援逝迤太堂醫(yī)堂陵隨屬箍三醫(yī)醫(yī)委員3直遄蘭塾援逝江省史醫(yī)暄委員4重漁蓬塾援逝塹太堂醫(yī)堂暄隨屬筮二醫(yī)院委員5浙江大學碩士學位論文致謝致謝三年前，初次接觸血液科，為這個科室濃厚的學術氛圍和主任的淵厚知識所吸引，決然選擇了血液科作為自己的人生目標。在這里，我認識了很多新朋友，度過了人生中很重要的一段時期。在這三年里，我慢慢了解了自身的優(yōu)缺點，了解了自己想要的是什么，如何去應對困難，一點點走向成熟。感謝很多人陪伴我一起走過這三年。首先要感謝我的導師金潔教授，您跟病人耐心、細致而富于人文關懷的溝通、嚴謹而清晰的臨床思維、一絲不茍的敬業(yè)態(tài)度、不斷學習的熱情是我學J的榜樣。感謝您對我臨床和論文上付出的心血和汗水。希望您身體健康，工作順利感謝浙醫(yī)一院血液科錢文斌教授、孟海濤主任、麥文淵主任、佟紅艷主任、黃健老師、俞文娟老師、婁引軍老師、徐偉來老師、李穎老師、王敬瀚老師等醫(yī)護人員在臨床學習及論文寫作中予的支持和幫助感謝一起共同奮斗的陳菲菲博士、陳健博士、路莎莎博士、陰秀峰博士、胡超博士、余夢霞博士、朱志娟碩士、金晶碩士、李晨瑩碩士等在論文寫作中對我的無私幫助和支持感謝輪轉過的各個大內科的老師、師兄師姐對我臨床工作的指點，在這些科室，我度過了充實而愉快的研究生輪轉生活感謝答辯委員會和參加論文評閱的專家老師們?yōu)檎撐乃鞯闹笇Ш蛶椭銈兊目隙◣椭翼樌厴I(yè)最后，感謝我的父母、我的親人對我學業(yè)給予的無限支持

簡介：A型流感病毒是一類重要的、具有高度傳染性的病原體。它引發(fā)了每一年的季節(jié)性流感，造成了1918年、1957年、1968年和2009年的流感大爆發(fā)。此外，有些H5N1流感病毒株具有跨種族傳播和可能引起類似1918年大規(guī)模流感的能力，加大了潛在的危險性。A型流感病毒非結構蛋白NS1A是一個關鍵的毒力因子，在病毒繁殖周期中起著至關重要的作用。它通過拮抗干擾素ΑΒ調節(jié)宿主細胞抗病毒狀態(tài)，利用細胞的機制進行自身RNA加工、蛋白合成和顆粒的形成，以及抑制宿主的免疫機制和凋亡反應等發(fā)揮作用。NS1A通常分為兩個結構域，一個是RNA結合區(qū)RBD，另一個是受體蛋白結合區(qū)ED。ED和許多宿主因子有相互作用，而RBD的主要作用是結合病毒的DSRNA，同時也能結合其它因子。RBD、ED以及它們各自的復合物晶體已經得到解析，但是由于缺乏全長結構的信息使得RBD和ED之間的關系仍然無法確定。先前解析得到的全長結構只能用于詳細說明DSRNA的隔離，但也留下許多未曾解決的問題，如RBD和ED之間的關系、RBD結合DSRNA的本質和后果。這些問題只能通過解析有生物學功能的全長結構來回答。我們解析了野生型和3個根據生理功能進行突變的APR834H1N1NS1A全長結構。它首次描述了RBD和ED之間存在的功能關系。結合結晶學、生化分析和熒光光譜學進行實驗，我們闡明了NS1A在溶液中的構象，同時也展示了相應的生物學功能。

簡介：蘇州大學碩士學位論文注意缺陷多動障礙患兒漢字認知事件相關電位的研究姓名謝娜申請學位級別碩士專業(yè)神經病學指導教師董選20090401注意缺陷多動障礙患兒漢字認知的事件相關電位研究中文摘要結論一、N2波幅與漢字語義啟動的難度成正相關，ADHD兒童完成相同的語義啟動任務需比正常兒童投入更多的心理資源，本研究漢字相關N2和不相關P3波幅可成為監(jiān)測ADHD認知水平的量化指標，并能對ADHD的診斷及療效的評估提供一定的幫助；二、腦電生物反饋治療后漢字認知ERP表現為相關N2波幅降低，不相關P3潛伏期縮短，研究提示腦電生物反饋能改善ADHD的注意缺陷能力，提高ADHD工作記憶能力及漢字認知速度，降低患兒漢字認識難度。關鍵詞注意缺陷多動障礙ADHD語義啟動事件相關電位EI心腦電生物反饋治療視聽整合持續(xù)操作測試IVACPTIL作者謝娜指導老師董選

簡介：該實驗選用HCMV特異性抗原替代活病毒以自體樹突細胞DC作為抗原呈遞細胞與淋巴細胞在體外共同培養(yǎng)來誘導病毒特異性T細胞的活化和增殖因為未成熟的DC可以攝取抗原分化成熟并通過MHCⅠ類和MHCⅡ類途徑向淋巴細胞呈遞抗原誘導其活化DC作為抗原呈遞細胞需要抗原的存在而當前HCMV抗原多來自病毒感染的細胞培養(yǎng)或人工合成的多肽工作量較大而且得率很低因此我們選用生物工程的方法即用含HCMVPP65基因的載體轉化大腸桿菌在菌體內合成即65抗原該實驗分為兩個部分主要內容和結果如下1HCMV特異性T細胞的體外誘導與增殖2HCMVPP65蛋白的表達

簡介：點擊查看更多糖皮質激素對流感病毒感染小鼠嗅覺障礙干預作用研究.pdf精彩內容。

簡介：人類乙型肝炎病毒屬嗜肝DNA病毒科至少有4種亞型AYW、ADR、AYR和ADW其中ADR亞型是中國人的主要流行株其基因組DNA已被克隆全長32KBP與其他3種亞型在DNA水平和蛋白水平具有一定差異目前對中蛋白在乙型肝炎病毒生活周期中的功能及與其它乙型肝炎病毒蛋白間的相互作用尚不清楚轉基因技術是研究基因功能的理想方法建立表達中蛋白的轉基因小鼠將為中蛋白功能的研究提供理想的動物模型該研究采用已經構建了的含有CMV啟動子和PRES2S基因ADR亞型開放閱讀框的PRES2S基因表達載體PCDNA3S2S酶切鑒定證實載體構建成功DNA測序證實插入的PRES2S基因序列與報道的序列一致上述結果表明目的基因不但可以在轉基因小鼠體內穩(wěn)定地遺傳而且可以在轉基因小鼠體內表達目的蛋白該品系轉基因小鼠的建立為研究乙型肝炎病毒中蛋白的功能及基于中蛋白的治療性DNA疫苗提供了一個候選的動物實驗模型

簡介：第二軍醫(yī)大學碩士學位論文攜帶干擾素一13基因的腺病毒治療結肝轉移小鼠模型的實驗研究腸癌THETHERAPEUTICEFFECTOFADENOVIRUSEXPRESSINGINTERFERONPONCOLONCANCERHEPATICMETASTASESINMICE姓名導師專業(yè)名稱申請學位培養(yǎng)單位鄭濤楊甲梅教授外科學I臨床醫(yī)學碩士學位第二軍醫(yī)大學東方肝膽外科醫(yī)院第二軍醫(yī)大學東方肝膽外科醫(yī)院二。一二年五月獨創(chuàng)性聲明ILLLLLFLLJ／JLLLIILLLUIJIJLLFLRLFLURLFJPFJJY2111141本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。本人承擔本聲明的法律責任。學位論文作者簽名琦確日期易垃年∥月午日學位論文版權使用授權聲明本人完全了解第二軍醫(yī)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，第二軍醫(yī)大學有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和電子版。允許論文被查閱和借閱。本人授權第二軍醫(yī)大學可以將學位論文全文或部分內容編入中國學位論文全文數據庫、中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數據庫等數據庫進行檢索?？梢圆捎糜坝?、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。保密的學位論文在解密后適用本授權書翩虢彤鬈B物，1年G旯貝蓀1＼日4／名、、，躲辦者年儲諺文乙敝么位期學日

簡介：點擊查看更多呼吸道合胞病毒致大鼠腎病彈性蛋白酶基因表達與蛋白尿相關性研究.pdf精彩內容。

簡介：南華大學南華大學2012屆碩士學位論文屆碩士學位論文H2S對甲醛損傷大鼠學習記憶和認對甲醛損傷大鼠學習記憶和認知功能的改善作用及其機制知功能的改善作用及其機制學位申請人莊元元導師及職稱唐小卿副教授專業(yè)名稱生理學論文評閱人論文評閱人姜志勝（教授、博導，南華大學）袁中華（教授、碩導，南華大學）答辯委員會答辯委員會答辯主席胡弼（教授、碩導，南華大學）答辯委員唐朝克（教授、博導，南華大學）謝明（教授、碩導，南華大學）陳臨溪（教授、碩導，南華大學）田紹文（副教授、碩導，南華大學）本工作承蒙本工作承蒙國家自然科學基金國家自然科學基金81071005國家自然科學基金國家自然科學基金30770740資助

簡介：基因轉錄水平上的調控對基因的表達至關重要，甚至對機體的發(fā)育也起到極大的作用?；虮磉_的調控過程主要發(fā)生在轉錄水平上，轉錄因子通過其特定的結構域與染色體或其他蛋白質相結合，起到對基因轉錄的促進或阻礙作用。鋅指蛋白是一類具有手指狀結構域的轉錄因子，在基因表達調控、細胞分化、胚胎發(fā)育、增強植物抗逆性等方面具有重要的作用。鋅指蛋白ZBTB20由741個編碼氨基酸組成，N端含有POZ結構域（通常介導蛋白間的相互作用），C端含有5個C2H2鋅指結構域（通常介導DNA的結合），與已知的POZ鋅指蛋白BCL6和PLZF有3040％的同源性1。利用ZBTB20基因特異性敲除小鼠模型，本實驗室揭示了ZBTB20基因在個體發(fā)育、物質代謝和神經調控等方面有重要的生理功能26。盡管如此，關于ZBTB20的生物學功能、其調控的下游靶基因以及介導的信號轉導通路仍有許多未明之處。重組腺病毒是非整合型雙鏈DNA病毒，因而無插入突變，無致癌性，它具有感染分裂期和非分裂期細胞的能力，且易于構建、濃縮和純化，出毒率較高。我們前期的研究提示ZBTB20在肝臟物質代謝、肝癌的發(fā)展中具有重要作用，因此具有肝臟靶向性的腺病毒表達載體無疑是我們進一步研究ZBTB20在肝臟的生物學功能及其作用機制的首選工具，于是我們構建了ZBTB20的過表達腺病毒和干擾腺病毒兩種重組腺病毒，以便從正反兩方面進行ZBTB20的生理和病理功能的研究。我們將帶有FLAG標簽的ZBTB20的CDNA片段（ZBTB20FLAG）克隆至PADTRACKCMV載體，并轉化至細菌內，使該重組載體與ADEASY質粒進行同源重組，從而獲得重組腺病毒載體ADZBTB20。之后轉染293細胞進行包裝，并進行三輪擴增，經濃縮純化后檢測病毒滴度。我們利用ZBTB20肝臟特異性敲除小鼠的原代肝細胞和肝臟組織模型，于離體和在體兩個水平鑒定所制備的重組腺病毒ADZBTB20介導的ZBTB20RNA和蛋白的表達情況并利用報告基因技術檢測過表達的ZBTB20蛋白的功能活性。另一方面我們將CMVZBTB20SHRNA片段克隆至PADTRACKCMV載體，同樣將該重組載體與ADEASY質粒進行細菌內同源重組，從而獲得重組腺病毒載體ADZBTB20SHRNA。之后轉染293細胞進行包裝，并進行三輪擴增，經濃縮純化后檢測病毒滴度。我們采用ZBTB20正常表達小鼠的原代肝細胞和肝臟組織模型，于離體和在體兩個水平鑒定所制備的重組腺病毒ADZBTB20SHRNA對內源性ZBTB20RNA和蛋白的干擾效果。最后結果表明本研究所構建的ADZBTB20重組腺病毒可以介導ZBTB20的過表達并具備轉錄調節(jié)活性，ADZBTB20SHRNA重組腺病毒能干擾ZBTB20的表達，為今后研究ZBTB20的相關生物學功能奠定了基礎。

簡介：第一軍醫(yī)大學碩士學位論文EB病毒與胃腸道腫瘤相關性研究姓名劉換新申請學位級別碩士專業(yè)病理指導教師丁彥青20030531EB病毒與胃腸道腫瘤相關性研究研究生劉換新導師丁彥青教授中文摘要EPSTEINBARREBV病毒是一種分布廣泛、人群感染率頗高的人類DNA皰疹病毒，幾乎所有25歲以上的成年人都能檢測到EBV抗體。EBV是傳染性單核細胞增多癥的主要致病因素，在多種人類良性或惡性病變中都能檢測到該病毒的存在，如口腔粘膜白斑，炎性假瘤，BURKITT淋巴瘤，鼻咽癌，胃癌，霍奇金病HODGKIN’SDISEASELID和非霍奇金淋巴瘤以及其他一些器官的淋巴上皮樣腫瘤。大多數EBV相關腫瘤陽性率都較低，或僅在某些地域發(fā)生率較高。許多學者的研究已證實部分胃癌與EBV相關，但由于地區(qū)差異和檢測方法的特異性和敏感性不同，EBV相關胃癌的比例各國報道有較大差異，美國和德國報道陽性率為1618％，國內報道為1．6％10．3％；對于食道癌及大腸癌與EBV的相關性研究，國內外亦有報道，但迄今尚無定論。分子生物學方法在EB病毒相關性疾病的診斷和監(jiān)測中作用越來越突出。運用原位雜交檢測活檢組織中的EB病毒編碼RNA即EBERS被認為是確認某一疾病是否與EB病毒相關的金標準，LMPI免疫組化和PCR方法也被常規(guī)地用于隱性感染的檢測，因此，本課題擬運用原位雜交結合免疫組化和PCR，闡明EB病毒與胃腸道腫瘤的相關性。我們收集了257例胃腸道腫瘤組織，全部為石蠟包埋塊，包括52例食道癌及癌旁組織28例，75例胃癌及癌旁組織40例，130例大腸腫瘤及正常大腸粘膜組織30例。所有的標本都分別進行了原位雜交、PCR和免疫組化檢測，然后運用SPSSL0．0對檢測結果進行統計學處理。研究發(fā)現，75例胃癌中7例原位雜交陽性，占9．3％，另有11例14．7％PCR陽性，4例5．3％免疫組化陽性；癌旁組織PER檢測3例陽性，占7．5％，而原位雜交及免疫組化檢測均為陰性，二者有顯著性差異；食道癌組織中3例5．8％PCR反應陽性，癌旁組織2例陽性7．1％；3

簡介：慢性阻塞性肺疾病CHRONICOBSTRUCTIVEPULMONARYDISEASES，COPD是呼吸系統疾病中最常見的疾病之一，由于患病人數多，死亡率高，COPD目前居全球死亡原因的第4位，在經濟發(fā)展不平衡和人口日趨老齡化的今天，已成為全球眾多發(fā)展中國家重要的人群健康問題。在中國，呼吸疾病COPD為主要組成部分在農村位列死因第三位，在城市位列第四位。然而很大一部分COPD患者早期無明顯臨床表現，很多COPD患者在確診時病情已發(fā)展到中重度，治療效果并不理想。COPD患病人數多，病死率高及社會經濟負擔重，目前已成為重要的公共衛(wèi)生問題。但目前人們對其認識和重視不夠社會各界包括臨床醫(yī)生，尤其是非呼吸科專科醫(yī)師，對COPD的認識和重視不夠是普遍存在的問題，作為COPD診斷和治療的重要依據的肺功能檢測也不夠普及，在部分省市二級醫(yī)院以上COPD診斷中肺功能檢查的比例僅18％。本課題通過對上海市兩個區(qū)下轄四個社區(qū)居民進行現場調查來研究上海市社區(qū)人群COPD患病率以及影響COPD在社區(qū)人群中分布的因素，研究還在上海市部分社區(qū)全科醫(yī)生中開展了有關COPD知識的問卷調查，以初步了解社區(qū)醫(yī)生對COPD的認知水平。研究分為以下二個部分。第一部分上海部分地區(qū)社區(qū)人群慢性阻塞性肺疾病COPD的流行病學調查目的了解上海部分地區(qū)社區(qū)人群慢性阻塞性肺疾病COPD的患病率及影響COPD在社區(qū)人群中分布的因素，為在社區(qū)人群中開展COPD的預防和控制提供基礎信息和策略依據。方法采用針對性抽樣方法，抽取上海市長寧區(qū)和嘉定區(qū)所轄的北新涇社區(qū)、周家橋社區(qū)、程家橋社區(qū)、江橋社區(qū)為研究現場。再以整群抽樣的方法隨機抽取12個居委為研究點，以抽到的研究點中所有40歲以上的社區(qū)戶籍居民為研究對象。參考BURDENOFOBSTRUCTIVELUNGDISEASEBOLD問卷自行制定流行病學調查問卷，由經培訓的調查員對符合本次研究定義的調查對象進行面對面問卷，并做相應的體格檢查。再由呼吸科專業(yè)技術人員對受調查居民進行肺功能檢測，以FEV1FVC＜70％為COPD的診斷依據，結合呼吸道病史做出COPD診斷。結果研究共調查1252名社區(qū)居民，資料完整且肺功能檢查質控合格者1216人，從中獲得確診的COPD患者104人，研究人群總患病率為86％。男性COPD患病率為119％，女性為49％，男性COPD患病率高于女性，差異有統計學意義X21908P＜0001。研究發(fā)現，社區(qū)人群COPD患病率分布可能與下列五項因素有關，分別為吸煙1058，95％CI6791650、家族史4374，95％CI25757430、兒童期呼吸道感染史2104，95％CI10384266、職業(yè)粉塵暴露39123，95％CI9260165292和廚房通風狀況差1392，95％CI8382312結論上海部分地區(qū)COPD患病率86％，男性COPD患病率為119％，女性為49％，男性COPD患病率高于女性。而吸煙、家族史、兒童期呼吸道感染史、職業(yè)粉塵暴露、廚房通風狀況差是COPD的危險因素。第二部分部分社區(qū)全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認知度目的調查上海部分社區(qū)全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認知水平，了解短期培訓對改善社區(qū)醫(yī)生COPD診療知識的效果，為開展COPD相關知識和臨床診療培訓提供依據。通過短期培訓提高全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認識水平。方法對上海市上海市長寧區(qū)和嘉定區(qū)所轄的北新涇、周家橋、程家橋和江橋4個社區(qū)的全科醫(yī)師開展COPD知識問卷調查，并在調查的基礎上進行短期培訓，進而比較培訓前、后社區(qū)醫(yī)生有關COPD知識的改善情況。問卷共包含10個有關COPD診療的題目，每題1分，總分10分。結果1培訓前，社區(qū)全科醫(yī)師COPD認識水平平均得分410±118及格率為115％。培訓后，社區(qū)全科醫(yī)師COPD認識水平平均個人得分790±090及格率為100％。研究顯示年齡、文化程度、從醫(yī)年限、技術職稱、工作崗位可能影響全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認知2培訓前各試題的正確率很低，全科醫(yī)師對各題的正確率都不超過60％，培訓后全科醫(yī)師對各題的正確率都超過60％。通過短期培訓全科醫(yī)生對慢性阻塞性肺疾病COPD的認識水平差異均有統計學意義P＜0001結論上海的社區(qū)全科醫(yī)師對慢性阻塞性肺疾病COPD的認知較低，通過短期培訓可以有效提高社區(qū)全科醫(yī)師對COPD的認識水平。