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簡(jiǎn)介：2002年11月至2003年6月，在全球20多個(gè)國(guó)家和地區(qū)爆發(fā)的嚴(yán)重的急性呼吸道綜合征SEVEREACUTERESPIRATYSYNDROME，SARS是由一種新型的冠狀病毒CONAVIRUS，COV引起的。SARS病毒是全基因組由29，727個(gè)核苷酸組成，具有11個(gè)開(kāi)放閱讀框，基因組結(jié)構(gòu)與其它冠狀病毒相似，基因序列與原先發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒的同源性不高，被列為冠狀病毒科的新類型。其編碼的蛋白質(zhì)推測(cè)有23種，但對(duì)感染患病起重要作用的可能是5種關(guān)鍵蛋白E蛋白、S蛋白、M蛋白、N蛋白、蛋白酶復(fù)合體，蛋白酶復(fù)合體分成14個(gè)蛋白，其中包括RNA依賴的RNA聚合酶RNADEPENDENTRNAPOLYMERASE，RDRP。SARS病毒的蛋白酶復(fù)合體編碼區(qū)占基因組序列長(zhǎng)度的23，相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在翻譯時(shí)利用特有的核糖體移框RIBOSOMALFRAMESHIFTING機(jī)制產(chǎn)生兩個(gè)大小不同的F1AB和F1B編碼框編碼木瓜水解蛋白酶PAPAINLIKEPROTEINASE，PLPPRO和3C樣胰凝乳酶3CLIKEPROTEINASE，3CLPRO，二者可自身水解消化成16個(gè)成熟的復(fù)制酶蛋白亦非結(jié)構(gòu)蛋白，NONSTRUCTURALPROTEIN，NSP。通過(guò)一系列生物信息學(xué)BLAST比對(duì)，在此16個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白中發(fā)現(xiàn)RNA依賴性聚合酶RDRP，NSP12存在高度保守的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)域，并且?guī)缀跛械恼淩NA病毒都編碼有RNA依賴的RNA聚合酶，其中GDD基序高度保守的，可能與酶的催化功能相關(guān)。冠狀病毒復(fù)制酶蛋白的合成是病毒在細(xì)胞中生命活動(dòng)的開(kāi)始，復(fù)制酶蛋白復(fù)合體及其水解產(chǎn)物對(duì)于病毒基因組的復(fù)制、亞基因組的轉(zhuǎn)錄以及翻譯后的調(diào)節(jié)起到重要作用，而目前這種分子機(jī)制仍不清晰。本課題包括的研究?jī)?nèi)容有1首先利用兩對(duì)引物從SARSCOVCDNA擴(kuò)增出RDRP基因的全長(zhǎng)，分別克隆入真核表達(dá)載體PCMVMYC和原核表達(dá)載體PGEX4T1。2真核表達(dá)RDRP蛋白并研究其細(xì)胞定位。3原核誘導(dǎo)GSTRDRP融合蛋白，并純化此蛋白，為了進(jìn)一步研究RDRP蛋白的功能做準(zhǔn)備。4利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)將GDD突變?yōu)锳DD，即將甘氨酸突變?yōu)楸彼幔?gòu)建突變ADD的真核和原核表達(dá)載體PCMVMYCMPOLPGEX4T1MPOL。5原核誘導(dǎo)突變型GSTRDRP融合蛋白，并純化此蛋白，為下一步比較野生型和突變型GSTRDRP體外合成RNA的功能作準(zhǔn)備。本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)PCMVMYCPOL轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，用WESTERNBLOT方法檢測(cè)到其成功表達(dá)，并在共聚焦顯微鏡下觀察蛋白在293細(xì)胞的定位；通過(guò)構(gòu)建PGEX4T1POL和PGEX4T1MPOL，在大腸桿菌中成功地誘導(dǎo)了帶有GST標(biāo)簽的野生型和突變型重組蛋白，誘導(dǎo)表達(dá)后純化得到野生型和突變型GSTRDRP重組蛋白。結(jié)論成功構(gòu)建的真核表達(dá)載體，在真核細(xì)胞中過(guò)表達(dá)的RDRP蛋白主要定位在細(xì)胞質(zhì)。成功構(gòu)建表達(dá)突變型和野生型RDRP融合蛋白的原核表達(dá)載體，在大腸桿菌內(nèi)高效表達(dá)，純化后得到分子量約為116KDA的野生型和突變型GSTRDRP融合蛋白，為進(jìn)一步探討RDRP的功能奠定基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)對(duì)慢性乙型病毒性肝病患者血氧飽和度水平的臨床資料調(diào)查探討其發(fā)生低氧血癥的病變特點(diǎn)及中醫(yī)證候規(guī)律。方法根據(jù)慢性乙型病毒性肝病患者不同病變階段進(jìn)行分組系統(tǒng)檢測(cè)慢性乙型病毒性肝病患者的血氧飽和度。收集其臨床資料與癥狀、體征等相關(guān)臨床數(shù)據(jù)歸納總結(jié)慢性乙型病毒性肝病發(fā)生低氧血癥的病變特點(diǎn)以及證候分布規(guī)律。結(jié)果慢性乙型病毒性肝病患者發(fā)生低氧血癥年齡分布上45歲以上患者出現(xiàn)低氧血癥的發(fā)病率明顯升高低氧血癥的發(fā)生與年齡成正比體現(xiàn)了該病發(fā)病與年齡相關(guān)。并且低氧血癥的發(fā)生率隨病變的加重呈上升趨勢(shì)不同疾病階段的發(fā)病率存在顯著性差異P＜001。病變臟腑主要涉及肝、脾、肺。證候要素以肝郁100％、毒100、脾虛9192、血瘀9091、陰虛8788為主。結(jié)論慢性乙型病毒性肝病患者低氧血癥發(fā)病具有年齡相關(guān)性特點(diǎn)其基本病位在肝脾涉及肺三者之間密切相關(guān)。證型以肝郁脾虛、瘀血阻絡(luò)、肝腎陰虛三型為多。慢性乙型病毒性肝病血氧飽和度水平隨病情的發(fā)展呈梯形下降趨勢(shì)。

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文HPV16E7重組腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建及其在真核細(xì)胞中的表達(dá)姓名張娟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)婦科腫瘤指導(dǎo)教師林仲秋20040519◇妻盤箋童HPVL6E7重組腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建及其在真核細(xì)胞中的表達(dá)摘要抗原并激發(fā)體內(nèi)特異性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)CTL。利用病毒載體攜帶抗原基因轉(zhuǎn)染DCS，由于其效率高、特異性強(qiáng)，成為近年研究的熱點(diǎn)。腫瘤抗原編碼基因?qū)隓CS后，能在DCS內(nèi)持續(xù)表達(dá)腫瘤抗原，使DCS抗原提呈能力得到增強(qiáng)，從而達(dá)到有效殺傷腫瘤細(xì)胞的目的。在病毒載體系統(tǒng)的應(yīng)用中，腺相關(guān)病毒載體系統(tǒng)AAV最受關(guān)注。腺相關(guān)病毒載體具有高效轉(zhuǎn)染、定向整合、不破壞體細(xì)胞的特點(diǎn)，在臨床應(yīng)用中很有潛力。但是傳統(tǒng)的腺相關(guān)病毒載體包裝系統(tǒng)通常需要腺病毒或其它輔助病毒的輔助才能進(jìn)行包裝，盡管包裝后對(duì)腺病毒進(jìn)行滅活，但是病毒滅活產(chǎn)物產(chǎn)生的免疫原性不可避免，因此其安全性還有待研究。本實(shí)驗(yàn)采用的是“AA、，HELPERFREESYSTEM”，即質(zhì)粒輔助重組腺相關(guān)病毒載體系統(tǒng)。該系統(tǒng)對(duì)傳統(tǒng)的腺相關(guān)病毒載體系統(tǒng)進(jìn)行了改進(jìn)，使得腺相關(guān)病毒載體包裝時(shí)不再需要輔助病毒，而是利用含有腺病毒的VA、E2A和E4基因的質(zhì)粒進(jìn)行病毒包裝，大大提高了腺相關(guān)病毒載體應(yīng)用的安全性和可靠性，該載體系統(tǒng)被認(rèn)為是“目前最具有應(yīng)用前景的病毒載體系統(tǒng)”。本研究的目的是將HPVL6E7基因重組至該腺相關(guān)病毒載體系統(tǒng)，并檢測(cè)該重組載體在真核細(xì)胞中的表達(dá)，建立宮頸癌免疫治療的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。本研究分以下兩部分第一部分HPVL6E7重組腺相關(guān)病毒載體的構(gòu)建及滴度測(cè)定一、目的構(gòu)建HPVL6E7質(zhì)粒輔助重組腺相關(guān)病毒載體，獲得可供轉(zhuǎn)染的滴度，為下一步檢測(cè)該基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)提供物質(zhì)基礎(chǔ)，并為以后進(jìn)一步研究富頸癌樹突狀細(xì)胞疫苗奠定良好基礎(chǔ)。二、方法一PCR克隆HPVL6E7基因1、引物設(shè)計(jì)根據(jù)GENEBAILK報(bào)道，HPVL6E7基N的CDNA和GENOME序列相同。在GENEFISHERII

簡(jiǎn)介：HBV基因組剪接變異體SPLICEDVARIANTSOFHEPATITISBVIRUSGENOMES是由HBV前基因組RNAPREGENOMICRNA，PGRNA經(jīng)剪接并逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的亞基因組DNA。長(zhǎng)度為22KB的HBV剪接變異體又稱為2447NT489NTHBV剪接變異體占80％以上，可編碼剪接特異性蛋白HEPATITISBSPLICEDPROTEIN，HBSP，并與病毒的持續(xù)性感染及致病性相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)室先前利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩查肝細(xì)胞中與HBSP蛋白相互作用的細(xì)胞蛋白，分別獲得纖維蛋白原Γ鏈FIBRINOGENGAMMAPOLYPEPTIDE，F(xiàn)GG和微粒體環(huán)氧化物水解酶MICROSOMALEPOXIDEHYDROLASE，MEH，編碼基因?yàn)镋PHX1等幾種候選蛋白。本研究在酵母雙雜交系統(tǒng)初步篩查的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步驗(yàn)證HBSP蛋白分別與FGG和MEH的相互作用，并探討HBSP蛋白對(duì)患者凝血功能與肝臟生物轉(zhuǎn)化功能的影響，從而探索其致病性。第一部分旨在證實(shí)HBSP與FGG及MEH蛋白間的相互作用。為此，構(gòu)建了PGEXHBSP載體用于GSTPULLDOWN、PDSREDHBSP載體用于激光共聚焦、PBINDHBSP、PBINDHBSP147和PBINDHBSP64111載體用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞雙雜交和免疫共沉淀；同時(shí)，采用RTPCR技術(shù)從HUH7細(xì)胞擴(kuò)增得到FGG和EPHX1全長(zhǎng)基因并構(gòu)建PCMVTNTFGG和PCMVTNTEPHX1載體用于體外轉(zhuǎn)錄翻譯、PACGFPFGG和PACGFPEPHX1載體用于激光共聚焦。體外和體內(nèi)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HBSP蛋白可以和FGG或MEH直接相互作用，而且該相互作用由HBSP蛋白的N端47個(gè)氨基酸介導(dǎo)。第二部分旨在高效表達(dá)并獲得高純度HBSP融合蛋白，為此，將HBSP全長(zhǎng)基因片段及其N端區(qū)域編碼N端47個(gè)氨基酸和C端區(qū)域編碼N端64個(gè)氨基酸分別克隆入原核表達(dá)載體PET431A中，并在目的基因的C端引入可編碼STREPⅡ標(biāo)簽蛋白的基因片段，構(gòu)建了PET43HBSPSTREPⅡ、PET43HBSP147STREPⅡ、PET43HBSP48111STREPⅡ和對(duì)照質(zhì)粒PET43STREPⅡ。之后應(yīng)用IPTG誘導(dǎo)融合蛋白NUSHBSPSTREPⅡ、NUSHBSP147STREPⅡ、NUSHBSP48111STREPⅡ和NUSSTREPⅡ在ROSETTADE3中的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明目的基因獲得高效、可溶性表達(dá)，并通過(guò)STREPTACTIN系統(tǒng)親和層析方法純化得到高純度的融合蛋白。第三部分探討HBSP蛋白對(duì)FGGMEH相關(guān)功能的影響。應(yīng)用純化后的融合蛋白進(jìn)行纖維蛋白原凝集實(shí)驗(yàn)、血小板粘附實(shí)驗(yàn)和血小板聚集實(shí)驗(yàn)；結(jié)果表明HBSP蛋白可以通過(guò)與FGG結(jié)合抑制纖維蛋白原的凝集、干擾血小板對(duì)纖維蛋白原的粘附、激活和ADP引起的血小板聚集，從而抑制凝血功能，且HBSP蛋白的完整性對(duì)其功能至關(guān)重要；同時(shí)應(yīng)用高效液相方法體外驗(yàn)證了完整的HBSP蛋白與MEH結(jié)合可大大增強(qiáng)MEH的酶活性，并促進(jìn)苯并芘BENZOAPYRENE，BAP的代謝，增加了最終致癌物BENZOAPYRENE7R，8SDIHYDRODIOL9S10REPOXIDE±BPDE的生成。結(jié)果提示HBSP蛋白可能抑制患者的凝血功能，與HBV感染者的出血傾向有關(guān)；HBSP蛋白可以促進(jìn)多環(huán)芳香烴的代謝，加速了致癌物的致癌作用。

簡(jiǎn)介：浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文增殖型溶瘤腺病毒SG511PHSP70IL24治療肝癌的研究姓名王芳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師錢其軍20100301浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文的抗腫瘤能力。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)我們證實(shí)，SG511PHSP70IL24選擇性殺傷肝癌細(xì)胞的能力比SG511和ADLL一IL24要高。由此，我們得出結(jié)論，SG511PHSP70IL24結(jié)合了病毒治療與基因治療的優(yōu)勢(shì)，是一種廣譜、特異、安全、高效的溶瘤病毒，為肝癌等的生物治療提供了一種新的工具。關(guān)鍵詞肝癌；病毒基因治療；條件增殖型腺病毒；IL24基因；HSP70啟動(dòng)子II

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簡(jiǎn)介：呼吸道合胞病毒RESPIRATYSYNCYTIALVIRUS，RSV屬于副粘病毒科肺病毒屬，是引起嬰幼兒嚴(yán)重呼吸道疾病的主要病原體。RSV存在極高的重復(fù)感染率，直至第三次感染時(shí)病癥才有所減輕。迄今，尚無(wú)成功的疫苗問(wèn)世。目前在研的候選疫苗有減毒活疫苗及表達(dá)G蛋白的病毒載體。一種名為FG的嵌和糖蛋白在以棉鼠為動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，它能夠有效的誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體，并能抵抗鼻腔途徑的病毒攻擊。其它處于實(shí)驗(yàn)中疫苗還包括DNA疫苗，重組蛋白疫苗和活載體疫苗等。雖然已經(jīng)證明人體的血清抗體能有效的中和病毒，但即使高滴度的中和抗體也不能排除嚴(yán)重的RSV感染。最為嚴(yán)重的感染往往發(fā)生在母體抗體滴度最高的嬰兒時(shí)期。有證據(jù)表明，血清中的中和抗體有利于保護(hù)下呼吸道，但不能阻止重復(fù)感染。也就是說(shuō)，體液免疫對(duì)RSV感染提供的保護(hù)是很不完全的。CD8CTL在抗RSV感染的保護(hù)性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，因此，一個(gè)理想的疫苗應(yīng)該能誘導(dǎo)保護(hù)性細(xì)胞免疫，以提高免疫保護(hù)水平，抑制感染的傳播。有鑒于此，本文設(shè)想發(fā)展一種既能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫也能產(chǎn)生體液免疫的新型重組蛋白疫苗。以此為目標(biāo)，本研究首先克隆了RSVG蛋白基因，該蛋白含有誘導(dǎo)中和抗體的表位。本文首先通過(guò)RTPCR，從A亞型病毒中擴(kuò)增獲得G蛋白基因的全長(zhǎng)DNA，經(jīng)測(cè)序和同源性比對(duì)，它與同亞型病毒G蛋白核苷酸的同源性為91％，氨基酸同源性為93％。插入全長(zhǎng)CDNA的載體命名為PUC18G10。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)PCR擴(kuò)增了3個(gè)G蛋白片段，分別為G101，G126和G151，對(duì)應(yīng)于G蛋白的125225，100225或75225AA。這些G蛋白片段將被用作體液免疫抗原，誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。為了提高G蛋白片段的免疫原性，選用了DSBA，CKS，MBP和GST等4個(gè)載體蛋白，并將載體蛋白連接在G蛋白片段的N端進(jìn)行融合表達(dá)?？偣搏@得了14個(gè)表達(dá)載體，它們是PET15BDSBAG101，PET15BDSBAG126，PET15BDSBAG151，PET15BCKSG101，PET15BCKSG126，PMBPPG101，PMBPPG126，PET15BGSTG101，PET15BDSBA，PET15BCKS，PMBPPG101，PMBPP和PET15BGST。這些載體表達(dá)的重組蛋白抗原為DSBAG101，DSBAG126，DSBAG151，CKSG101，CKSG126，MBPG101，MBPG126，GSTG101，DSBA，CKS，MBP和GST。構(gòu)建這一系列載體的目的是希望通過(guò)比較，可以從中發(fā)現(xiàn)最佳的載體蛋白和G蛋白片段抗原。上述表達(dá)載體被導(dǎo)入ECOLI，并獲得成功表達(dá)。重組蛋白表達(dá)含量最高可達(dá)71％，最低者小于10％。大多數(shù)重組蛋白抗原獲得可溶形式或者部分可溶形式表達(dá)。其中，DSBA，DSBAG101，DSBAG126和DSBAG151等4個(gè)重組蛋白經(jīng)大量表達(dá)后，通過(guò)親和層析獲得純化。通過(guò)凝血酶切割和第二次親和層析，獲得了單獨(dú)的G101片段。經(jīng)免疫BALBC小鼠證實(shí)，純化的DSBAG101，DSBAG126和DSBAG151能在體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗體。針對(duì)抗原自身的ELISA抗體滴度為L(zhǎng)OG1049～53，針對(duì)G101的抗體滴度為L(zhǎng)OG1046～48，而針對(duì)RSV的抗體滴度為L(zhǎng)OG1027～35。分析抗體產(chǎn)生的動(dòng)力學(xué)曲線發(fā)現(xiàn)，重組蛋白抗原可在體內(nèi)很快刺激體液免疫反應(yīng)。在首次免疫的10天后，即可檢測(cè)到抗體的產(chǎn)生，較低的抗體滴度為L(zhǎng)OG103左右，較高的抗體水平達(dá)到LOG105。通過(guò)空斑抑制實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，血清抗體和粘膜抗體均能在體外抑制病毒的增殖。10倍稀釋的血清抗體對(duì)病毒的抑制可達(dá)到60％。在DSBAG101，DSBAG126和DSBAG151等3個(gè)抗原中，DSBAG126相對(duì)更佳，因?yàn)樗T導(dǎo)產(chǎn)生的針對(duì)RSV的抗體滴度和中和抗體滴度均是最高的。總之，這些重組蛋白抗原能有效的誘導(dǎo)體液免疫并能成功保護(hù)免疫小鼠不受RSV感染。獲得長(zhǎng)效的體內(nèi)CTL活性是疫苗發(fā)展中需重點(diǎn)考慮的問(wèn)題之一。為了探尋一種能在體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生長(zhǎng)效的病毒特異的CTL的方法，本文構(gòu)建了DSBAFM28195這一新的重組蛋白。DSBAFM28195能在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生病毒特異的CTL反應(yīng)，并能為免疫小鼠提供保護(hù)。與單獨(dú)的FM28195相比，該重組蛋白抗原延長(zhǎng)體內(nèi)CTL的壽命達(dá)293倍。本研究結(jié)果表明，DSBA刺激產(chǎn)生的非抗原特異的TH反應(yīng)對(duì)延長(zhǎng)CD8型的CTL壽命是必要的。如何發(fā)展一種既能誘導(dǎo)有效的細(xì)胞免疫又能產(chǎn)生有效的體液免疫的疫苗已成為當(dāng)今疫苗設(shè)計(jì)中的挑戰(zhàn)。為此，在本研究中將含有中和抗體表位的抗原DSBAG101和含有CTL表位的抗原DSBAFM28195共免疫BALBC小鼠，并檢測(cè)產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫的能力?？上驳氖?，G蛋白片段的存在能加強(qiáng)由嵌和CTL表位誘導(dǎo)產(chǎn)生的CTL反應(yīng)，雖然G蛋白片段本身不能誘導(dǎo)細(xì)胞免疫。相比之下，嵌和CTL表位的存在對(duì)誘導(dǎo)抗體反應(yīng)存在不利的影響。在共免疫小鼠中，針對(duì)RSV的ELISA抗體滴度和中和抗體滴度均有所下降。攻擊實(shí)驗(yàn)表明，共免疫能進(jìn)一步降低病毒在小鼠肺組織和鼻腔中增殖，表明共免疫對(duì)抵抗病毒更加有效。這一結(jié)果表明，研制能同時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫的疫苗將是RSV疫苗發(fā)展的有效策略。在此研究的基礎(chǔ)上，本研究還構(gòu)建了含有中和抗體表位G126和CTL表位FM28195的新型抗原。WESTERNBLOTTING結(jié)果顯示，CTL表位的加入不影響中和抗體表位與相應(yīng)抗體的結(jié)合?？傊狙芯繛殚_(kāi)展RSV重組蛋白疫苗研究項(xiàng)目奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。本文建立了高效的重組蛋白表達(dá)體系，純化重組蛋白抗原的方法，以及在體外和在體內(nèi)評(píng)價(jià)重組蛋白抗原活性的技術(shù)平臺(tái)。同時(shí)，本研究也發(fā)現(xiàn)了一些能有效誘導(dǎo)細(xì)胞免疫或體液免疫的抗原，找到了延長(zhǎng)體內(nèi)CTL活性的方法，發(fā)展了一種能同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫的免疫策略。值得一提的是，這些抗原免疫小鼠后均不會(huì)導(dǎo)致小鼠體重的嚴(yán)重下降，暗示了抗原免疫為小鼠提供的保護(hù)不僅是有效的，而且安全。

簡(jiǎn)介：目的2型糖尿病作為當(dāng)前一項(xiàng)重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題，其病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，在過(guò)去的30年中，遺傳因素、自身免疫和病毒感染作為胰島Β細(xì)胞損傷的可能原因被廣泛研究。本文通過(guò)對(duì)2型糖尿病T2DM病人血清中白細(xì)胞介素1IL1Β、白細(xì)胞介素6IL6、白細(xì)胞介素10IL10、白細(xì)胞介素12IL12、白細(xì)胞介素18IL18、腫瘤壞死因子TNFΑ、干擾素INTERFERONΓIFNΓ的水平及糖尿病人外周血中柯薩奇病毒CVB3IGM、CVB4IGM、CVB5IGM的陽(yáng)性率的測(cè)定，探討病毒及其誘發(fā)的免疫機(jī)制在2型糖尿病發(fā)病機(jī)理中的作用及臨床意義。方法采集并分離了300例2型糖尿病病人和300例健康查體者的空腹血清，采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清中柯薩奇病毒和多種細(xì)胞因子如IL1Β、IL6IL10、IL12、IL18、TNFΑ、IFNΓ等的情況，并將糖尿病組與對(duì)照組的結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和比較，以期發(fā)現(xiàn)可能影響2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展的因素，為2型糖尿病的治療和預(yù)防提供有價(jià)值的指導(dǎo)和依據(jù)。結(jié)果1T2DM病例組中經(jīng)檢測(cè)有CVBIGM陽(yáng)性20例，CVB感染率為67％，明顯高于正常對(duì)照組的1％CVB陽(yáng)性3例，二者差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0053對(duì)兩組檢測(cè)出的CVBIGM陽(yáng)性者23例與根據(jù)具有對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)選擇的CVBIGM陰性者23例的血清進(jìn)行IL1Β、IL6、IL10、IL12、IL18和TNFΑ、IFNΓ測(cè)定值比較，發(fā)現(xiàn)CVBIGM陽(yáng)性組各細(xì)胞因子水平均高于陰性組，其中IL1Β、IL6、IL18、TNFΑ、IFNΓ的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P00542型糖尿病組經(jīng)住院治療后與治療前進(jìn)行血清測(cè)定相比，IL1Β、IL6、IL10、IL12、IL18、TNFΑ、IFNΓ的測(cè)定值水平低于治療前，其中IL1Β、IL6、IL18、TNFΑ、IFNΓ的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。結(jié)論1T2DM病人血清中IL1Β、IL6、IL10、1112、IL18、TNFΑ、IFNΓ等細(xì)胞因子的水平明顯高于健康對(duì)照組，且在治療后，病例組的細(xì)胞因子水平相對(duì)治療前有所下降，提示這些細(xì)胞因子在2型糖尿病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中可能起某些作用，其水平在病程及治療中的變化對(duì)于探討2型糖尿病的發(fā)病機(jī)理、糖尿病的預(yù)防及治療均有重要參考價(jià)值。2與健康對(duì)照組相比，2型糖尿病病人存在較高的CVB感染概率，表明CVB感染可能與2型糖尿病發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。3多種炎性細(xì)胞因子所致的胰島Β細(xì)胞損害和功能障礙及胰島素抵抗可能是導(dǎo)致2型糖尿病發(fā)生和發(fā)展的重要因素。

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簡(jiǎn)介：中圖分類號(hào)B844碩士學(xué)位論文單位代碼10231學(xué)號(hào)2013300288兒童期心理虐待對(duì)特質(zhì)抑郁的影響反芻思維和創(chuàng)傷后認(rèn)知改變的中介作用碩士研究生導(dǎo)師學(xué)科專業(yè)答辯日期授予學(xué)位單位曾慶巍劉愛(ài)書教授發(fā)展與教育心理學(xué)2015年12月哈爾濱師范大學(xué)目錄目錄摘詈獸IABSTRACTⅡ第一章緒論。111選題的背景L1。2研究的目的313研究的意義314研究的假設(shè)4第二章文獻(xiàn)綜述。521兒童心理虐待和特質(zhì)抑郁5211兒童期心理虐待5212狀態(tài)抑郁和特質(zhì)抑郁622反芻思維7221反芻思維的概念及分類7222反芻思維的測(cè)量9223反芻思維的相關(guān)理論10224反芻思維的產(chǎn)生機(jī)制13225反芻思維的相關(guān)研究14226反芻思維的心理治療1823創(chuàng)傷后認(rèn)知改變20231創(chuàng)傷后認(rèn)知改變的概念及測(cè)量2024心理虐待、反芻思維、創(chuàng)傷后認(rèn)知改變和特質(zhì)抑郁間的研究21241心理虐待和抑郁21242心理虐待、反芻思維和抑郁。21243心理虐待、創(chuàng)傷后認(rèn)知改變和抑郁22244心理虐待、反芻思維、創(chuàng)傷后認(rèn)知改變和抑郁22第三章研究方法2331研究對(duì)象2332研究工具23

簡(jiǎn)介：目的探討慢性乙型肝炎中醫(yī)證侯分布規(guī)律及特點(diǎn)為其分類及規(guī)范化診斷提供參考為中醫(yī)辨證施治提供依據(jù)。方法通過(guò)應(yīng)用結(jié)構(gòu)化臨床信息采集系統(tǒng)采集慢性乙型肝炎患者的臨床數(shù)據(jù)應(yīng)用數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)再對(duì)其進(jìn)行分析研究探討慢性乙型肝炎患者中醫(yī)臨床信息的特點(diǎn)、中醫(yī)證候的分布特點(diǎn)、中藥辨證治療對(duì)患者生活質(zhì)量的影響。結(jié)果1各組中醫(yī)證型構(gòu)成比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異。2就診患者性別構(gòu)成比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異。3各證型之間的性別構(gòu)成比較差異無(wú)顯著性。4六組中醫(yī)證型總體比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異。5六組中醫(yī)證型總體比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異。6肝腎陰虛型與其他證型在低非復(fù)制期和免疫清除期的分布比較經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異。在肝腎陰虛型患者中不同治療方法是否聯(lián)合抗病毒西藥對(duì)HBV感染史的分期影響經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異。7各證型慢性肝病量表CLDQ評(píng)分除無(wú)證可辨型外的其他五種證型在治療前后比較均有顯著差異。CLDQ各維度評(píng)分比較腹部癥狀A(yù)S、疲勞FA、全身癥狀SS和焦慮WO維度評(píng)分治療前后也有顯著性差異。結(jié)論1本病存在無(wú)證可辨型發(fā)病年齡最小病程最短但在正式的病毒性肝炎中醫(yī)辨證方案中尚未被提及需要進(jìn)一步研究和規(guī)范其診治問(wèn)題。2本病男性發(fā)病率明顯高于女性。3無(wú)證可辨型和肝郁脾虛型是慢性乙型肝炎發(fā)病的初期階段。肝郁脾虛型和肝膽濕熱型為最常見(jiàn)的證型。4慢性乙型肝炎病機(jī)轉(zhuǎn)歸具有階段性規(guī)律。5肝腎陰虛型在HBV感染自然史的低非復(fù)制期出現(xiàn)率明顯多于其他證型。中藥聯(lián)合西藥抗病毒治療較之單純中藥治療更易使肝腎陰虛型患者進(jìn)入預(yù)后較好的低非復(fù)制期。6中醫(yī)藥辨證治療能夠改善患者的生活質(zhì)量。7應(yīng)用結(jié)構(gòu)化臨床信息采集系統(tǒng)進(jìn)行中醫(yī)藥證候規(guī)律研究是可行的。

簡(jiǎn)介：計(jì)算機(jī)病毒的頻繁爆發(fā)給整個(gè)社會(huì)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而病毒防御技術(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)跟不上病毒技術(shù)的發(fā)展。2004年5月至2005年5月，在我國(guó)由計(jì)算機(jī)病毒造成的網(wǎng)絡(luò)安全事件占到了整個(gè)網(wǎng)絡(luò)安全事件的83％1。為了更好的進(jìn)行計(jì)算機(jī)病毒的防治，有必要進(jìn)行計(jì)算機(jī)病毒理論的研究，其中病毒傳播模型的研究具有重要的理論意義和現(xiàn)實(shí)意義。一個(gè)合理的病毒傳播模型不僅能夠準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)病毒帶來(lái)的危害，而且能夠幫助我們找到病毒傳播過(guò)程中存在的薄弱環(huán)節(jié)，從而找到更好的防御病毒的辦法。本文在討論病毒各種傳播機(jī)制的基礎(chǔ)上，討論了不同傳播機(jī)制的病毒傳播模型，針對(duì)傳染病學(xué)模型的缺點(diǎn)給出了一個(gè)離散的計(jì)算機(jī)病毒傳播模型，并且利用我們的模型討論了NIMDA，WITTY兩種蠕蟲病毒的傳播過(guò)程。主要內(nèi)容包括通過(guò)對(duì)病毒歷史的回顧，總結(jié)了病毒的類型及其基本特征。分析了計(jì)算機(jī)病毒的傳播途徑，對(duì)于現(xiàn)今比較流行的和理論上的加快病毒傳播的技術(shù)都進(jìn)行了描述。給出了EMAIL網(wǎng)絡(luò)的生成算法，討論了不同傳播機(jī)制的病毒傳播模型，對(duì)于現(xiàn)存的大多數(shù)的模型進(jìn)行了描述，分析了它們的優(yōu)缺點(diǎn)，探討了我們今后的努力方向。在分析了現(xiàn)存模型的優(yōu)缺點(diǎn)，病毒感染機(jī)器所需的時(shí)間以及易感主機(jī)和已感主機(jī)“補(bǔ)丁率”不同的基礎(chǔ)上，給出了選擇性隨機(jī)掃描的蠕蟲IVEROMSCANNINGWMS傳播模型，分析了模型中各個(gè)因素對(duì)于病毒傳播過(guò)程的影響，從而發(fā)現(xiàn)易感機(jī)器的免疫率對(duì)于病毒的傳播過(guò)程影響最大。通過(guò)與WEAVER的模擬數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，可以發(fā)現(xiàn)模型較好的反映了病毒的傳播過(guò)程。在忽略病毒感染機(jī)器所需時(shí)間的基礎(chǔ)上，證明了我們的模型與SMP模型的等價(jià)性。最后用我們的模型討論了WITTYWM和NIMDAWM的傳播過(guò)程。最后給出了EMAIL網(wǎng)絡(luò)生成算法的C語(yǔ)言源程序。

簡(jiǎn)介：目的首次調(diào)查我省三江地區(qū)部分乙型肝炎病毒HBV基因型分布狀況，并探討HBV基因型與HBV相關(guān)肝病臨床的可能相關(guān)性。方法隨機(jī)選取HBV感染者，29例無(wú)癥狀攜帶者、52例慢性肝炎、7例肝硬化、8例原發(fā)肝癌患者外周血，采用巢式PCR法檢測(cè)HBVDNA基因型，并分析研究HBV基因型與臨床的相關(guān)性。結(jié)果在96例血清標(biāo)本中HBV基因型檢出率分別是B型24例2500﹪，C型70例7292﹪，D型1例104﹪，B、C混合型1例104﹪，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)A、E、F型。組、CHB組與LC組和HCC組的基因型構(gòu)成差異有非常顯著性X2978，P00205，用X2分割作各組之間兩兩比較，結(jié)果CHB、HCC中C型所占百分比高于B型分別為8077﹪比1731﹪X2685，P00089和8750﹪比0﹪X2491，P00267，F(xiàn)ISHER檢驗(yàn)P00343，與LC中無(wú)差別。結(jié)論我省三江地區(qū)乙肝病毒基因型存在B、C、D三個(gè)型別，以C型為主。C型與B型相比，C型HBV感染易引起較重肝臟損傷。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明17／TS‘1‘本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本毒廿口矗律主，T尸明廿垅1旱見(jiàn)7I工。論文作者簽名蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊光盤版電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在年一月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文酉論文作者簽名導(dǎo)師簽名塑垡鯉日期鄉(xiāng)呈羅

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文RNA干擾抑制HBV蛋白表達(dá)和病毒復(fù)制的研究姓名任向榮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師徐安龍20041108為驗(yàn)證在動(dòng)物水平RNAI的抗病毒作用，將PU6SIHBV質(zhì)粒用HYDRODYNAMICS的方法經(jīng)尾靜脈注射到HBV轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)，注射后小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶有一過(guò)性升高，但很快恢復(fù)正常，肝臟切片沒(méi)有明顯的病理性改變，說(shuō)明這種注射方法是安全的。質(zhì)粒注射后5天，血清HBSAG下降了567％，抑制作用至少持續(xù)2周。肝臟免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示HBCAG陽(yáng)性細(xì)胞明顯減少，說(shuō)明RNAI能有效抑制轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)HBV的蛋白質(zhì)表達(dá)。但HBVDNA定量沒(méi)有明顯的降低。除上述質(zhì)粒介導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)外，還用化學(xué)合成的SIRNA進(jìn)行了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示SIRNA最佳的作用濃度是100NM，轉(zhuǎn)染后3天抑制率最高。蛋白質(zhì)和MRNA水平的檢測(cè)都證實(shí)SIRNA能有效并且特異地抑制HBV蛋白質(zhì)的表達(dá)。總之，本論文從細(xì)胞到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明RNAI能有效抑制HBV的蛋白表達(dá)和病毒復(fù)制，為其用于乙型肝炎的治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。尤其是穩(wěn)定細(xì)胞株的建立，不僅實(shí)現(xiàn)了對(duì)HBV蛋白表達(dá)和病毒復(fù)制的穩(wěn)定抑制，而且為RNAI抗HBV的機(jī)制研究搭建了一個(gè)良好的平臺(tái)。關(guān)鍵詞HBV；HBV轉(zhuǎn)基因小鼠；RNA干擾；穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；2215細(xì)胞II