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簡介：中山大學碩士學位論文重組人Γ干擾素腺病毒轉(zhuǎn)染的人BMSCS體外抗白血病作用研究姓名李曉青申請學位級別碩士專業(yè)腫瘤學指導教師呂躍20050512碩上論文重組人Y一干擾素腺病毒轉(zhuǎn)染的人BMSCS體外抗白血病作用研究中文摘要期依賴性的，而且在體細胞，腺病毒DNA通常不會整合到細胞基因組中，不會產(chǎn)生致畸、致癌等。許多研究直接將裸腺病毒注入移植物體內(nèi)或受體的血液循環(huán)，但腺病毒在體內(nèi)對組織的靶向選擇就會非常困難。特別是將裸腺病毒直接注入血液循環(huán)，當再次注入同樣的載體時，會導致載體特異性免疫反應，不僅會降低基因轉(zhuǎn)移的效率，還會導致副作用的發(fā)生，如肝臟毒性等。因此，腺病毒介導的基因轉(zhuǎn)移至靶細胞的策略可作為探索基因治療的一種理想選擇。近年來，骨髓基質(zhì)細胞由于其自身的特性，特別是其歸巢特性，已作為一些缸液系統(tǒng)惡性腫瘤基因治療的靶細胞。有人提出了“基質(zhì)細胞基因治療GENETHERAPYOFSTROMALCELLS”的概念，認為將造血生長因子的基因轉(zhuǎn)入基質(zhì)細胞，使其能分泌微環(huán)境缺損的細胞因子，將它與造血干細胞一起進行骨髓移植，可能加速造血與免疫功能的重建。用基因轉(zhuǎn)染的基質(zhì)細胞修飾造血微環(huán)境更接近造血的生理狀態(tài)，避免了全身應用造血因子的副作用，具有明顯的優(yōu)越性。并且由于具有多向分化潛能的BMSCS，有內(nèi)在的組織相容性，免去了應用其他干細胞移植時篩除異抗原的必要，可自體移植，消除了異體移植的復雜性和免疫源性，并且能廣泛遷移，易與周圍組織整合而發(fā)揮功能，是基因治療中非常有價值的載體細胞。在白血病和一些淋巴瘤等血液腫瘤中，骨髓移植作為一種根治性治療手段就是向供體輸入骨髓細胞，包括骨髓中的基質(zhì)細胞，所以EXVIVO的基因治療方法特別適用于“基質(zhì)細胞基因治療”在血液系統(tǒng)惡性腫瘤中的應用。一些研究表明基因修飾的BMSCS能夠在體外和體內(nèi)有效地分泌表達具有治療性的多種重組蛋白。因此，我們設想利用腺病毒介導IFNY基因轉(zhuǎn)移至CML患者自體骨髓基質(zhì)細胞，IFN叫基因修飾的骨髓基質(zhì)細胞回輸體內(nèi)后可歸巢至骨髓并分泌IFN．Y發(fā)揮對CML的靶向治療作用。本研究的目的研究重組人IFN吖腺病毒AD／HLFN．丫在CML病人骨髓基質(zhì)細胞8MSCS中的轉(zhuǎn)染效率、IFNY表達，并進一步觀察轉(zhuǎn)染AD／HLFN叫的骨髓基質(zhì)細胞體外抗白血病細胞株K562增殖和誘導K562細胞凋亡的作用。II

簡介：目的原發(fā)性肝癌HEPATOCELLULARCARCINOMA，HCC是人類最常見的致死性惡性腫瘤之一，丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS，HCV感染是引發(fā)HCC的重要危險因素。全球已有約2億人感染HCV，約占世界總?cè)丝诘?％，每年新增病例300萬～400萬。目前HCV抗病毒治療主要采用聚乙二醇干擾素聯(lián)合利巴韋林，但這種治療手段對高滴度HCVRNA和血清型為HCVⅠ型的患者效果并不理想。HCV感染嚴重危害人們的身體健康，因此深入研究HCV感染相關HCC的致病機理將為防治HCV感染疾病提供新的防治策略。核心蛋白是HCV病毒編碼產(chǎn)生的分子量為21KDA的多功能結構蛋白。研究表明核心蛋白參與丙型肝炎病毒的組裝、釋放，并與細胞內(nèi)重要的一些轉(zhuǎn)錄因子或者多種信號通路相互作用，削弱機體的免疫防御功能，進而引起HCV相關肝硬化甚至肝癌的發(fā)生HCV核心蛋白還能與P53、P73、PRB等抑癌基因直接結合，抑制細胞的凋亡，導致腫瘤的發(fā)生。WNTΒCATENIN信號通路的異常激活在肝癌的發(fā)生中至關重要，目前研究表明它的異常激活至少與50％以上的HCC發(fā)生相關。HCC臨床標本中，AXIN基因突變比較少見，由ΒCATENIN基因突變引起ΒCATENIN的活化僅占20％，結腸腺瘤樣息肉基因ADENOMATOUSPOLYPOSISCOLI，APC的失活突變?nèi)晕丛贖CC中發(fā)現(xiàn)，這表明在HCC發(fā)生過程中，WNTΒCATENIN信號通路的拮抗分子如SFRPS的失活可能參與了該信號通路的異?；罨?。DNA甲基化修飾是表觀遺傳調(diào)控的重要方式，研究證實，肺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、結腸癌、肝癌等眾多實體腫瘤中均存在SFRPS啟動子區(qū)高度甲基化修飾。已有研究表明病毒感染機體后能夠以表觀遺傳修飾的方式調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄和表達，引起細胞的異常分化、增殖，導致相關疾病的發(fā)生。HCV核心蛋白能否通過甲基化、乙?；?、或組蛋白修飾等表觀遺傳水平調(diào)控SFRPS基因的表達，目前還未見研究報道。本課題組前期實驗已經(jīng)證實HCV核心蛋白能夠下調(diào)SFRP1的表達，本研究旨在進一步深入探討核心蛋白調(diào)控SFRP1的分子機制并從正反兩方面驗證表觀遺傳對腫瘤細胞生物學行為的影響。方法本課題組前期實驗已經(jīng)證實丙型肝炎病毒核心蛋白能夠下調(diào)SFRP1的表達，并且SFRP1的表達經(jīng)DAC處理后能夠部分恢復。本實驗在前期實驗的基礎上，進一步采用基因重組技術構建SFRP1啟動子區(qū)截短報告質(zhì)粒，確定啟動子區(qū)活性最強區(qū)域，并探討HCV核心蛋白對SFRP1啟動子活性的影響通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術CHROMATINIMMUNOPRECIPITATION，CHIP研究核心蛋白對SFRP1基因表觀沉默的分子作用機制。此外，通過平板克隆形成實驗、結晶紫染色、腫瘤細胞遷移實驗、侵襲實驗和肝癌裸鼠移植瘤模型系統(tǒng)研究HCV核心蛋白對細胞生物學行為的影響。進一步采用亞重硫酸鹽DNA測序方法驗證核心蛋白是否可以促進裸鼠移植瘤細胞中SFRP1啟動子區(qū)高甲基化修飾，用免疫組化方法檢測裸鼠移植瘤中PCNA、ΒCATENIN及WNT下游靶基因CMYC以及MMP2、MMP9的表達。結果本實驗利用基因重組技術成功構建了SFRP1啟動子區(qū)截短報告質(zhì)粒，通過雙熒光素酶活性檢測方法確定SFRP1啟動子區(qū)活性最強區(qū)域為407～27NT，并且證實HCV核心蛋白能夠抑制SFRP1啟動子區(qū)的活性。CHIP結果顯示在過表達核心蛋白的HUH7及SKHEP1細胞中，核心蛋白可增強DNMT1、HDAC1及甲基化結合蛋白MBD1，MBD2，MECP2富集于SFRP1的啟動子區(qū)，抑制乙酰化組蛋白H3、組蛋白乙酰化轉(zhuǎn)移酶P300結合于SFRP1啟動子區(qū)。平板克隆形成實驗和結晶紫實驗均證實，在穩(wěn)定表達HCV核心蛋白的肝癌細胞系中，核心蛋白促進肝癌細胞增殖，沉默DNMT1和（或）回復SFRP1能夠抑制這種作用。遷移以及侵襲實驗表明，HCV核心蛋白增強肝癌細胞系HUH7及SKHEP1細胞遷移及侵襲能力，同樣，沉默DNMT1和（或）回復表達SFRP1能夠抑制這種作用。體內(nèi)實驗研究表明沉默DNMT1和（或）回復表達SFRP1能夠抑制裸鼠皮下移植瘤的生長，下調(diào)ΒCATENIN和WNT下游靶基因的表達。同時也證明，沉默DNMT1和（或）回復SFRP1能夠抑制MMP2、MMP9的表達。結論HCV核心蛋白可通過增強DNMT1，HDAC1及甲基化相關蛋白MBD1、MBD2、MECP2富集于SFRP1啟動子區(qū)，誘導其甲基化，抑制其啟動子區(qū)活性，導致SFRP1基因表達沉默。體外及體內(nèi)實驗證實HCV核心蛋白通過下調(diào)WNTΒCATENIN信號通路抑制分子SFRP1的表達，誘導WNT信號通路活化，最終參與HCV相關肝痛的發(fā)生。

簡介：第二軍醫(yī)大學博士學位論文乙型肝炎病毒X蛋白介導MICRNA在原發(fā)性肝癌中的機制研究姓名張小英申請學位級別博士專業(yè)遺傳學指導教師孫樹漢20090501第二軍醫(yī)大學博士學位論文防止HCC轉(zhuǎn)移和復發(fā)，提高肝癌患者的存活率。基于上述發(fā)現(xiàn)，展開研究，利用REALTIMEPCR技術對P21一HBX轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠肝臟的MIRNA進行了表達水平分析，功能分析，并在HCC患者標本中進行驗證，初步探討了與HBX功能相關的MIRNAS在HCC發(fā)生發(fā)展中的作用。通過實驗我們發(fā)現(xiàn)，與野生型小鼠相比，轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟中有7個MIRNA的表達水平發(fā)生變化，其中，5個上調(diào)的MIRNAMIR212，MIR23A，MIR155，MIR175P和MIR20A，2個下調(diào)的MIRNAMIR152和MIR200A，它們的變化趨勢隨著腫瘤的發(fā)展而表現(xiàn)的更為明顯。隨后，利用HBX敲入將PEGFPHBX轉(zhuǎn)入HEPG2細胞和敲出用ADRHBX干擾HEPG2215細胞中HBX的表達的細胞模型發(fā)現(xiàn)，篩選出的這7個特異性MIRNA的表達水平與HBX的表達水平密切相關，它們呈劑量依賴關系。體外功能實驗證明它們能調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞凋亡和細胞侵襲的潛能，并可能在HCC發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用過表達的MIR212，MIR23A，MIR一155，MIR一175P和MIR20A能抑制細胞凋亡，而過表達的MIR152和MIR200A則能促進細胞凋亡；過表達的MIR212，MIR175P和MIR一20A能促進細胞增殖，而過表達的MIR200A則能抑制細胞增殖；另外，過表達的MIR212，MIR23A，MIR一175P和MIIR一20A能顯著增強細胞侵襲和遷移的潛能；而過表達的MIR152和MIR一200A則明顯抑制了細胞侵襲和遷移的潛能，這些MIRNAS的表達模式均在HCC患者標本中得以驗證。我們的實驗結果表明這組MIRNA參與了HBX介導的HCC發(fā)生發(fā)展過程，因此可能是HBV相關HCC的標志物。同時，實驗結果顯示MIR一143在10月齡的轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟正常，未發(fā)現(xiàn)病變中的表達水平明顯降低，而在22月齡的轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟發(fā)生HCC中的表達水平明顯上升，尤其是那些伴隨肺轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)基因小鼠，上調(diào)水平更明顯，接著，HBV相關HCC患者標本中MIR143的表達模式也進一步驗證了上述結果MIR143在HBV相關HCC標本中顯著上調(diào)，尤其是具有轉(zhuǎn)移特點的HBV相關HCC標本中顯著上調(diào)。體外功能實驗發(fā)現(xiàn)MIR一143并不能影響細胞的增殖和凋亡，卻能顯著提高細胞的侵襲能力，并且其促進細胞侵襲和遷移的能力是通過HBX調(diào)控途徑而實現(xiàn)。進一步用軟件分析和CHIP實驗發(fā)現(xiàn)NFKB可以直接結合到人MIR143基因上游的5KB左右位點，并且直接調(diào)控MIR一143的表達。隨后，利用TARGETSCAN分析軟件和熒光素報告酶系統(tǒng)篩選出其下游靶基因為FNDC3BFIBRONECTINTYPEIIIDOMAINCONTAINING3B。體內(nèi)外實驗均證明，受NFKB調(diào)控的MIR143通過下調(diào)靶基因FNDC3B，從而參與了由HBX介導的HCC腫瘤轉(zhuǎn)移的過程，這一發(fā)現(xiàn)為HBV相關性HCC的腫瘤轉(zhuǎn)移網(wǎng)絡補充了一條重要的信號通路HB／NFKB，MIR143／FNDC3B。與HBX特異相關的MIRNA及其在原發(fā)性肝細胞癌中的功能機制研究將為闡明

簡介：2THEDETECTIONOFEPSTEINBARRVIRUSANDITSCOOPERATIONWITHHEPATITISCVIRUSESINTHEHEPATOCELLULARCARCINOMAADISSERTATIONSUBMITTEDTOGRADUATESCHOOLOFSHANTOUUNIVERSITYMEDICALCOLLEGEAPPLYINGFORTHEDEGREEOFMASTEROFGENERALSURGERYBYCHENGUANGCANUNDERTHEGUIDANCEANDSUPERVISIONOFPROFESSORLIWEIDEPARTMENTOFSURGERYMAY2004,SHANTOU,GUANGDONG,CHINA中文摘要背景肝細胞癌（HEPATOCELLULARCARCINOMA，HCC）是嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤，居人類常見惡性腫瘤的第五位，全世界每年約有50萬人死于HCC。其病因迄今未明，根據(jù)高發(fā)區(qū)流行病學調(diào)查，其發(fā)病因素可能與病毒性肝炎、黃曲霉毒素、飲水污染、遺傳因素等有關，其中與病毒的相關因素引起國內(nèi)外有關專家學者的密切關注。病毒作為腫瘤的病因之一已經(jīng)得到公認，肝炎病毒與肝細胞癌密切相關，近年有人提出EPSTEINBARRVIRUS（EB病毒，EBV）與肝細胞癌相關，并通過體外試驗證實其能促進HEPATITISCVIRUS（丙型肝炎病毒，HCV）的復制，推測其對肝細胞起一定的影響而在肝細胞癌變過程中起一定的作用。我們實驗組的首期實驗發(fā)現(xiàn)EBV在HCC中有一定的感染率且其與HBV在HCC中無明顯協(xié)同作用。本研究通過對本地區(qū)手術切除的HCC的標本進行EBV以及HCV的檢測，以期探討EBV在HCC發(fā)生中的作用以及其與HCV的相互關系。第一部分目的EBV是人類惡性腫瘤的相關皰疹病毒，在人群中有較高的感染率，近年來，有人提出EBV與HCC相關，本研究通過對本地區(qū)手術切除的HCC的標本進行EBV的檢測，以期探討EBV與HCC的關系。方法實驗組（HCC行手術切除標本）共127例，對照組（肝內(nèi)膽管結石行左肝外側(cè)葉切除標本）共41例。（為了避免HCC的主要病

簡介：背景和目的同源盒基因在胚胎發(fā)育中調(diào)節(jié)細胞的生長、分化和遷移GAXGROWTHARRESTHOMEOBOX基因是一個主要存在于心血管系統(tǒng)的同源盒基因血管壁中GAX基因表達在球囊損傷后快速下調(diào)在受有絲分裂原刺激后由G期向G期轉(zhuǎn)變的血管平滑肌細胞VSMC中也明顯降低其降低程度與有絲分裂原刺激DNA合成的能力有關GAX基因在VSMC中的這種表達模式與GASGROWTHARRESTSPECIFIC基因和GADDGROWTHARRESTDNADAMAGEINDUCIBLE基因相似后二者中的一些基因表達增強時可抑制細胞生長說明GAX基因?qū)SMC的生長和增殖可能起著抑制作用考慮到VSMC的增殖、遷移以及凋亡失調(diào)在血管成形術后再狹窄病灶新生內(nèi)膜形成中起著重要作用該實驗通過構建攜帶GAX基因的重組腺病毒載體并轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的VSMC研究GAX基因表達增強后VSMC增殖、遷移和凋亡等生物學行為所受影響及其機制從而探討增強GAX基因表達對血管成形術后再狹窄的作用和意義結論1PDGFBB刺激使GAX基因在細胞轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的表達均下降且隨PDGFBB濃度的升高GAX基因表達下降程度更加顯著2該實驗構建的復制缺陷型腺病毒重組體ADCMVGAX轉(zhuǎn)染VSMC后可顯著增強GAX基因在VSMC的表達3ADCMVGAX轉(zhuǎn)染使VSMC表達GAX增強后可抑制由有絲分裂原刺激所引起的VSMC增殖GAX基因抑制VSMC增殖的機制與其增強P21和P27表達、抑制CDK2和PCNA的活性有關GAX基因?qū)X43表達的調(diào)控使正常的細胞間連接通訊得到維護也是其抑制VSMC增殖的重要機制4ADCMVGAX轉(zhuǎn)染使VSMC表達GAX增強后可抑制由有絲分裂原刺激所引起的VSMC遷移GAX基因抑制VSMC遷移的作用可通過抑制MMP2的表達和骨橋蛋白的轉(zhuǎn)錄來實現(xiàn)5ADCMVGAX轉(zhuǎn)染使VSMC表達GAX增強后可促進有絲分裂原刺激后的VSMC凋亡但對靜止期細胞無促進凋亡的作用GAX基因?qū)SMC凋亡的調(diào)控可通過促進BAX蛋白和抑制BCL2蛋白的表達來實現(xiàn)6GAX基因所介導的上述作用可能有利于減輕血管球囊損傷后新生內(nèi)膜的形成對RS的防治有益

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簡介：學位論文獨創(chuàng)性聲明學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名T寫凇丈簽字日期2。廠碑易月鄉(xiāng)日學位論文版權使用授權書本學位論文作者完全了解南昌大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權南昌大學可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編本學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所和中國學術期刊光盤版電子雜志社將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡向社會公眾提供信息服務。保密的學位論文在解密后適用本授權書學位論文作者簽名手寫主，拿支簽字日期勘肛年6月弓日鋤引矧分即狄簽字日期伽，Z年B月廠日摘要摘要目的在成骨分化過程中，若祖細胞在向終末成骨分化為成骨細胞過程中的信號通路中斷，可導致骨肉瘤的生成。誘導骨肉瘤細胞向成骨方向分化，可能會抑制骨肉瘤細胞的惡性表型，因此，我們應用ADEASY腺病毒載體系統(tǒng)，構建具有成骨分化作用的人LMP一1基因腺病毒重組體，感染體外培養(yǎng)的骨肉瘤細胞系U20S，并鑒定LMP一1基因在U20S中的表達，為研究骨肉瘤細胞成骨分化奠定基礎。方法以K562細胞的CDNA為文庫，采用PCR方法對LMP一1進行擴增，將目的基因通過TA克隆與PGEM．T載體連接并測序。雙酶切后將目的基因插入至腺病毒穿梭質(zhì)粒PADTRACK．CMV，經(jīng)雙酶切和測序鑒定，轉(zhuǎn)染HEK一293T細胞系并通過熒光顯微鏡、RTQPCR和WESTERNBLOT檢測PADTRACKCMVLMP一1的表達。線性化PADTRACK．CMVLMP．1，在BJ5183菌內(nèi)完成與骨架質(zhì)粒PADEASY．1的同源重組，構建重組腺病毒質(zhì)粒ADLMP．1。通過脂質(zhì)體介導在HEK一293A細胞內(nèi)包裝出重組腺病毒ADLMP一1，大量擴增、純化并測定滴度。用ADLMP一1感染骨肉瘤細胞系U20S，通過熒光顯微鏡、RTQPCR和WESTERNBLOT檢測LMP一1在U20S細胞中的表達。結果限制性雙酶切和DNA測序鑒定穿梭質(zhì)粒PADTRACK．CMVLMPL構建成功，熒光顯微鏡證實轉(zhuǎn)染了PADTRACK．CMVLMP一1質(zhì)粒的HEK一293T細胞質(zhì)內(nèi)有綠色熒光蛋白表達；RTQPCR發(fā)現(xiàn)與空白對照、空載轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染后24HIHEK．293T細胞LMP一1MRNA表達量升高800倍，轉(zhuǎn)染后48H后升高1500倍，與對照組相比有統(tǒng)計學差異羋P0．01；WESTERNBLOT驗證了LMP一1及HIS標簽蛋白的表達量明顯高于對照組。ADLMP．1通過擴增、純化滴度達到1．5X109PFU／ML。熒光顯微鏡下觀察ADLMP一1感染的U20S內(nèi)有綠色熒光蛋白表達；RTQPCR發(fā)現(xiàn)與空白對照、轉(zhuǎn)染空載ADGFP組相比，轉(zhuǎn)染24H后，U20S細胞LMP一1MRNA表達量升高420倍，48H升高650倍，與對照組相比有統(tǒng)計學差異冰P0．02；WESTERNBLOT檢測發(fā)現(xiàn)ADLMP．1感染U20S后，LMP．1的蛋白表達量明顯高于對照組。結論構建了人LMP一1基因腺病毒重組體一ADLMP一1，為下一步成骨分化抑制骨肉瘤惡性表型奠定了基礎。

簡介：心肌纖維化是在心肌的正常組織結構中膠原纖維過量積聚或膠原成分發(fā)生改變是病毒性心臟病包括急、慢性心肌炎和部分擴張型心肌病特征性病理變化過度的心肌纖維化是病毒性心臟病出現(xiàn)心律失常、心力衰竭、心臟性猝死等并發(fā)癥以及由心肌炎發(fā)展到心肌病的決定因素但其發(fā)生機制尚未完全闡明該研究致力于探討心肌纖維化在病毒性心臟病不同階段的發(fā)生機制并尋求有效的藥物干預手段全文共分為以下四部分第一部分病毒性心臟病動物模型的建立目的建立急、慢性心肌炎和擴張性心肌病系列動物模型方法BALBC小鼠120只隨機分為3組分別7天組N30、三月組N40和9月組N5從每組中任選10只腹腔注射EAGELS病毒培養(yǎng)液EMEM作為正常對照其余小鼠均以柯薩奇病毒B3腹腔注射制作急、慢性凡肌炎和擴張型心肌病動物模型分別于接種后第7天、第3月和第9月對各組對照組和模型組小鼠行心臟超聲檢查其后殺鼠取心臟作組織學和形態(tài)學檢查提取血清樣品作后續(xù)生化檢測第二部分病毒性心臟病心肌纖維化的發(fā)生機制研究目的探討病毒性心臟病心肌纖維化的發(fā)生機制第三部分黃芪甲甙對病毒性凡肌炎心肌纖維化的影響目的觀察黃芪甲甙對急、慢性心肌炎小鼠心肌纖維化的影響并探討其作用機理第四部分螺內(nèi)脂對慢性病毒性心肌炎心肌纖維化的影響目的探討螺內(nèi)脂對小鼠慢性心肌炎心肌纖維化的影響及其作用機理

簡介：點擊查看更多利用桿狀病毒載體高效表達重組人胰島素樣生長因子1(rhIGF-1)的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：背景與目的慢性乙型肝炎是一種嚴重威脅人類健康的傳染病。目前所采取的抗病毒治療個體反應差異大，療效的早期預測還面臨著重大挑戰(zhàn)。本研究的目的是1監(jiān)測抗病毒治療過程中乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白LHBS、乙肝病毒表面抗原HBSAG及HBVDNA的動態(tài)變化，探尋更好的早期預測抗病毒治療應答的指標，為慢性乙型肝炎患者的個體化治療提供依據(jù)2比較LECTHEPA和FIBROSCAN對乙型肝炎肝纖維化的診斷價值，尋找新的評估肝纖維化的非創(chuàng)傷性指標。研究對象與方法本研究第一部分納入了102例分別接受聚乙二醇干擾素ΑPEGIFNΑ、恩替卡韋ETV或替比夫定LDT單藥治療的HBEAG陽性慢性乙型肝炎初治患者，其中PEFNΑ組21例，ETV組41例，LDT組40例，療程至少48周。檢測基線、4周、12周、24周、36周及48周各時間點LHBS、HBSAG及HBVDNA水平。治療48周時出現(xiàn)HBVDNA轉(zhuǎn)陰＜1000拷貝ML定義為病毒學應答，治療48周是出現(xiàn)HBEAG轉(zhuǎn)陰或血清學轉(zhuǎn)換定義為血清學應答。本研究第二部分入組239例慢性乙型肝炎及乙型肝炎肝硬化患者，所有患者進行肝功能、B超、血常規(guī)、FIBROSCAN等檢查，同時測定反映血清Α1酸性糖蛋白AGP糖鏈改變的LECTHEPA，分析其對乙肝肝硬化的診斷價值及其影響因素，并與目前比較公認的非創(chuàng)傷性指標FIBROSCAN相比較。結果第一部分治療前LHBS水平與HBVDNA、HBSAG呈正相關LHBSVSHBVDNA，R0530，P＜0001LHBSVSHBSAG，R0503，P＜0001。在抗病毒治療過程中，LHBS與HBVDNA下降顯著均呈雙相模式，HBSAG下降緩慢。在PEGIFNΑ組，治療4周時血清LHBS小于8846NGML顯示出對病毒學應答的預測價值，此時受試者工作特征曲線下面積AUROC值達096P＜001，預測病毒學應答的敏感性、特異性、陽性和陰性預測值分別為100％，857％，889％和100％聯(lián)合檢測LHBS、HBSAG、HBVDNA能將預測病毒學應答的時間提前至基線AUROC079，P003，且在治療12周時能較好預測血清學應答AUROC080，P003。在ETV組，治療4周時LHBS同樣能預測病毒學應答AUROC078，P＜001聯(lián)合檢測LHBS、HBSAG、HBVDNA將基線時預測病毒學應答的AUROC值提高至089P＜001，并且4周時能較好預測血清學應答AUROC083，P001。在LDT組，治療12周時LHBS定量小于5742NGML能預測血清學應答AUROC074，P002聯(lián)合檢測LHBS、HBSAG、HBVDNA能在4周時預測病毒學應答AUROC090，P＜001，12周時預測血清學應答的AUROC值提高至086P＜001。第二部分LECTHEPA與FIBROSCAN值呈正相關R0556，P＜0001。LECTHEPA診斷肝硬化的ROC曲線下面積為0818P＜0001，診斷的敏感性、特異性分別為725％和780％FIBROSCAN診斷肝硬化的ROC曲線下面積為0845P＜0001，診斷的敏感性、特異性分別為870％和738％，二者ROC曲線下面積比較無顯著差異。LECTHEPA在ALT正常組和升高組中分布無明顯差別P0160，在兩組中診斷肝硬化的界值分別為7469和0347FIBROSCAN值在ALT升高組中明顯較ALT正常組高P＜0001，在兩組中診斷肝硬化的界值分別為885KPA和2805KPA。結論慢性乙型肝炎抗病毒治療中早期監(jiān)測血清LHBS水平對PEGIFNΑ、ETV或LDT治療48周時病毒學或血清學應答有較好的預測價值，聯(lián)合測定LHBS、HBSAG和HBVDNA能有效提高對病毒學及血清學應答預測的靈敏性和特異性。LECTHEPA相對于FIBROSCAN而言不受肝臟炎癥程度的影響，是比較可靠的評估慢性乙型肝炎肝纖維化的無創(chuàng)性標志物。

簡介：目錄摘要1前言2日U舌2材料與方法4結果7討侖14參考文獻17英文摘要22致謝OOOOOOOOOOO24論文原創(chuàng)性聲明25附綜述2620T0屑碩士硎究生學位論義代謝綜合征對老年人輕度認知功能損害的影響包含MS4項組分中的任意1項的23倍OR23，95％CI1246和35倍OR35，95％CI1775。結論高血糖、高血壓和脂代謝紊亂是MCI發(fā)生的危險因素。隨著所含MS組分的增多，MCI發(fā)生的風險也明顯增加。因此，積極防治MS對于保持老年人認知功能正常有重要意義。關鍵詞代謝綜合征輕度認知功能損害危險因素巢式病鋼對照研究1前言隨著人口老齡化在全球范圍的迅速進展，老年人健康問題已成為我國社會的主要衛(wèi)生問題之一。以阿爾茨海默病ALZHEIMERDISEASE，AD為代表的老年認知功能障礙疾患已成為近年來國內(nèi)外關注的熱點問題。該病病程長，病人的生活自理能力逐漸喪失，而昂貴的護理和醫(yī)療費用，使病人家屬承受巨大的經(jīng)濟壓力，給家庭和社會帶來了沉重的負擔。迄今為止，由于尚未找到理想的治療措施，因而其發(fā)病早期的研究成為很多專家學者的研究焦點N1。輕度認知功能損害MILDCOGNITIVEIMPAIRMENT，MCI是一種介于正常衰老矛TLALZHEIMER病AD之間的中間過渡狀態(tài)，是AD的早期階段乜吲。國內(nèi)外研究顯示，老年人MCI的患病率處于較高水平，并且，輕度認知功能損害可增加發(fā)生癡呆的危險N叫3L。因此，對MCI患者的致病因素研究有助于癡呆的早期診斷和干預，具有更大的公共衛(wèi)生意義。代謝綜合征METABOLICSYNDROME，MS又稱為X綜合征或胰島素抵抗綜合癥INSULINRESISTANCESYNDROME，IRS，指一組由多種心血管因素肥胖或中心性肥胖、糖尿病或糖調(diào)節(jié)受損、高血壓、血脂異常以及胰島素抵抗聚集的癥候群N4I。有研究顯示，血管性因素是老年人MCI發(fā)生或發(fā)展的危險因素之一N5、163。因此，MS與MCI之間的關系日益引起人們的關注。目前國內(nèi)外已有研究證實代謝綜合征各單項組分與MCI的發(fā)生存在一定關系。①肥胖尤其中心性肥胖是代謝綜合征一個較為顯要的特征。目前人們已經(jīng)逐漸認識到它在增加認知功能損害方面的作用。一項大樣本的前瞻性研究在校正了糖尿病和血管性疾病后發(fā)現(xiàn)肥胖能夠增加患認知功能損害的風險引。另一項隨訪研究在校正了年齡因素后發(fā)現(xiàn)患認知功能損害的婦女與正常人相比，具有更高的BMIT旨數(shù)。隊列研究發(fā)現(xiàn)老年人攝入大量N6多不飽和脂肪酸N62

簡介：復旦大學博士學位論文上海地區(qū)兒童腹瀉輪狀病毒感染的臨床流行病學研究姓名曾玫申請學位級別博士專業(yè)臨床技能訓練與研究指導教師朱啟镕20030330將PAGE檢測輪狀病毒陽性的糞便標本重新用TRIZOL抽提，328份含有足量RNA的標本進一步行RTPCR擴增VP7全基因，共有254份標本774％獲得陽性產(chǎn)物CDNAS，將CDNAS與G1G4型特異探針進行雜交分型試驗，結果顯示G1血清型占第一位141例555％，G3血清型占第二位70例276％。G2血清型占第三位24例94％，混合感染血清型占第四位16例63％，G4很少見僅發(fā)現(xiàn)L例O4％，未分型2例O8％，G1G3占分型株的988％。所有G2型均為電泳短型，而GL、G3、G4均為電泳長型。輪狀病毒的發(fā)病年齡與臨床癥狀的嚴重程度與不同G血清型無關。三輪狀病毒合并人類杯狀病毒感染的研究493份輪狀病毒陽性的標本用TRIZOL抽提后，采用RTPCR法檢測杯狀病毒，有9份標本同時合并感染杯狀病毒，混合感染率為18％。9例混合感染者散發(fā)在2000年12月至2001年10月，5例來自社區(qū)感染，4例來自院內(nèi)感染，患兒年齡最小僅15月，最大11個月，其中4例有發(fā)熱，持續(xù)15天，發(fā)熱高峰3823950C，9例均有腹瀉，持續(xù)215天，24小時腹瀉最多次數(shù)220次，2例有嘔吐，持續(xù)I5天，2例發(fā)生輕度脫水，分別發(fā)生在10月齡與11月齡患兒。兒童腹瀉病病原的復雜性不容忽視，杯狀病毒作為兒童社區(qū)及院內(nèi)感染腹瀉病的病因應給予重視。四用于檢測糞便標本中A組輪狀病毒的兩種方法的比較1023份標本中有893份標本13天內(nèi)采集后用ELISA法檢測A組輪狀病毒，其中ELISA法檢出陽性標本454份，陽性率為508％，再行PAGE法檢測，陽性標本446份，陽性率為499％，二者陽性率相近，無顯著性差異。兩種方法檢測標本均陽性者為356份，均陰性者為349份，與PAGE法相比，ELISA法的準確率為789％，敏感度為798％，特異度為781％。PAGE法顯示RNA條帶的深淺在ELISA法陽性組與陰性組之間的構成比有統(tǒng)計學差異，ELISA法用于檢測輪狀病毒含量少的糞便標本不夠敏感，易出現(xiàn)假陰性反應，而且該法也可出現(xiàn)假陽性反應，對其診斷輪狀病毒的準確性有一定影響。ELISA法與PAGE法的不一致率在各年齡組比較無顯著差異，二者一致與否與年齡無關。ELISA法具有簡便、快速、敏感的優(yōu)點，尤其適用于臨床大量標本的檢測，PAGE法雖然較繁鎖，但病毒RNA有其特殊的十一條條帶，更加直觀準確，甚為可靠。I關鍵詞J輪狀病毒腹瀉病流行病學兒童上海地區(qū)中圖分類號R7251／5125

簡介：術后認知功能障礙POSTOPERATIVECOGNITIVEDYSFUNCTIONPOCD是一種常見的麻醉手術后短期或長期的中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥是一種可逆的具有波動性的急性精神障礙主要表現(xiàn)為記憶力、注意力、認知力、學習能力等改變可導致并發(fā)癥增多、住院時間延長、康復延遲等。目前POCD的發(fā)病機制尚不明確并且沒有有效的治療方案。鐵是機體中一種必需的重要元素在腦內(nèi)發(fā)揮了多種重要作用。然而鐵含量過多會導致自由基的生成和氧化應激反應最終導致神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。本研究擬探討鐵離子代謝紊亂及氧化應激反應是否參與了術后認知功能障礙發(fā)生與發(fā)展。第一部分手術創(chuàng)傷對大鼠術后認知功能的影響目的以脾切除術為中等手術創(chuàng)傷模型探討麻醉和手術創(chuàng)傷對大鼠認知功能的影響。方法SD大鼠被隨機分為對照組10只腹腔注射生理鹽水麻醉組30只腹腔注射異丙酚100MGKG和手術組30只大鼠在腹腔注射異丙酚100MGKG麻醉下接受脾切除術。用MRIS水迷宮評價其認知功能。大鼠在手術前5天接受訓練每天4次尋找固定的隱藏平臺。第6天接受脾切除術術后第13和7天用“空間探索實驗”評價其空間記憶能力并記錄穿臺次數(shù)和目標象限停留時間百分比。結果與對照組相比大鼠術后第1天和第3天穿臺次數(shù)和目標象限停留時間百分比明顯減少P第二部分手術創(chuàng)傷對大鼠外周及腦內(nèi)鐵含量的影響目的探討手術創(chuàng)傷對大鼠外周及腦內(nèi)鐵含量的影響。方法大鼠被隨機分為對照組10只腹腔注射生理鹽水麻醉組30只腹腔注射異丙酚100MGKG和手術組30只大鼠在腹腔注射異丙酚100MGKG麻醉下接受脾切除術。各組大鼠在接受完行為學測試后處死采集血樣檢測血清鐵和轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度并用原子吸收分光光度法測定大鼠皮層和海馬內(nèi)總鐵含量。用ELISA法檢測海馬內(nèi)炎癥因子IL6和IL1Β。結果伴隨著認知功能損傷大鼠術后第1和第3天血清鐵含量及轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度均呈現(xiàn)出下降的趨勢P第三部分手術創(chuàng)傷致大鼠中樞鐵代謝異常相關機制的研究目的研究手術創(chuàng)傷對對大鼠海馬內(nèi)主要的鐵代謝相關蛋白及氧化應激水平的影響。方法大鼠被隨機分為對照組10只腹腔注射生理鹽水麻醉組30只腹腔注射異丙酚100MGKG和手術組30只大鼠在腹腔注射異丙酚100MGKG麻醉下接受脾切除術。各組大鼠在接受完行為學測試后處死取腦組織。用WESTERNBLOT法和免疫組織螢光染色法在術后第13和7天檢測大鼠海馬內(nèi)鐵蛋白FN轉(zhuǎn)鐵蛋白受體1TFR1和鐵調(diào)節(jié)蛋白2IRP2的表達和分布。用WST法測定抵御氧自由基作為腦內(nèi)抗氧化應激的第一道防御屏障的SOD活力。并用TBA法檢測脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量。結果與對照組相比FN含量于術后第1和第3天明顯降低并于第7天恢復。TFR1和IRP2表達均升高從術后第1天一直持續(xù)至第3天并且在術后第一天升高至高峰P﹤001。與對照組相比手術組術后第1和第3天SOD活力顯著下降P﹤001。手術組于術后第1天海馬內(nèi)MDA含量升至高峰是對照組的16倍其升高趨勢一直持續(xù)到術后第3天P﹤005。在任何時間點麻醉組與對照組相比各項指標均無統(tǒng)計學差異。結論本研究通過脾切除術建立了大鼠短期認知損傷模型。在認知損傷大鼠腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)鐵離子沉積和鐵代謝相關蛋白的異常表達及相應的氧化應激水平的升高。由此推斷手術創(chuàng)傷而不是麻醉因素導致了術后認知功能受損。腦內(nèi)的鐵沉積和氧化應激可能參與了POCD的發(fā)病機制。

簡介：病毒性心肌炎的發(fā)病機制尚未闡明病毒的溶心肌細胞作用和細胞介導的細胞毒作用被認為是心肌損傷的重要機制細胞介導的細胞毒作用主要通過兩條途徑殺傷靶細胞一是通過穿孔素與顆粒酶的途徑二是通過FAS、FAS配體的作用誘導細胞凋亡顆粒酶B是顆粒酶家族主要成員是殺傷淋巴細胞的活化標志和主要效應分子它能夠裂解靶細胞DNA引發(fā)靶細胞凋亡該次研究中他們用原位雜交和免疫組化方法檢測了粒B在柯薩奇B3病毒性心肌炎小鼠心肌中的表達并觀察了顆粒酶B表達水平與心肌病變的相關性以探討顆粒酶B在病毒性心肌炎心肌損傷中的作用顆粒酶B在小鼠柯薩奇B3病毒性心肌炎心肌中在MRNA和蛋折質(zhì)水平均有表達其表達與心肌病變部位、面積有很好的相關性

簡介：點擊查看更多森林腦炎病毒的鑒定以及生物學性狀和核苷酸全序列測定的研究.pdf精彩內(nèi)容。