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簡介：目的乙型肝炎病毒HBV是一種嗜肝DNA病毒，主要引起急、慢性肝炎、肝硬化和肝癌等。HBV的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏校正閱讀功能，故HBV的變異率較其他DNA病毒高十倍以上，其基因變異對慢性乙型肝炎慢乙肝患者病情發(fā)展、嚴重程度以及對抗病毒治療療效都有一定的影響。拉米夫定LAMIVUDINE是第一種用于治療乙肝的核苷類藥物，但長期用藥后易導致HBV的變異，從而出現(xiàn)病毒耐藥。HBV變異位點主要存在于HBV聚合酶C結(jié)構(gòu)域的YMDD酪氨酸蛋氨酸天門冬氨酸天門冬氨酸基因序列，最常見的突變位點是M204氨基酸置換，產(chǎn)生YMDD變異RTM204IVI，即YMDD變?yōu)閅VDD或YIDD。為探討YMDD變異株是在藥物作用下所致，還是變異株本來就與野生株共存，逐漸取代野生株成為優(yōu)勢毒株，本研究采用基因芯片技術對57例未經(jīng)抗病毒治療的慢性乙肝病毒感染者進行YMDD及其變異株的檢測，分析未經(jīng)拉米夫定治療的HBV病毒YMDD變異出現(xiàn)的情況，探討HBV病毒YMDD變異出現(xiàn)可能的機理，了解以YMDD自然變異的慢性HBV感染患者血清病毒載量和肝損害情況，以及與病毒基因型的關系。方法1收集住院或門診HBVDNA陽性，未經(jīng)拉米夫定治療的慢性HBV感染者血清標本57例，且均已做了基因型檢測，其中B基因型50例，C基因型6例，BC混合型1例；然后按臨床表現(xiàn)和其他檢查資料分為無癥狀攜帶者23例其中B基因型19例，C基因型3例，BC混合型1例，輕、中度慢性乙肝26例均為B基因型，重型肝炎、肝硬化6例其中B基因型4例，C基因型2例，肝癌2例其中B基因型1例，C基因型1例。2用基因芯片技術對上述57份血清進行YMDD及其變異株的檢測，分析未經(jīng)拉米夫定治療的HBV病毒YMDD變異出現(xiàn)的情況，了解以YMDD自然變異的慢性HBV感染患者血清病毒載量和肝損害情況，以及與病毒基因型的關系。首先將血清標本經(jīng)PCR擴增出YMDD序列，引物用生物素BIOTIN進行標記，并分別取各擴增產(chǎn)物進行凝膠電泳，電泳后條帶顯示均為陽性。將擴增產(chǎn)物變性，與基因芯片上特異性探針雜交、顯色后，判定HBV野生株YMDD、突變株YVDD、YIDD及其共生狀態(tài)和相對優(yōu)勢株。3對YMDD自然變異患者的上述臨床資料使用SPSS100軟件進行統(tǒng)計學處理，了解變異與臨床表現(xiàn)的關系，采用T檢驗及X2檢驗，以P005為無統(tǒng)計學差異，P005。YMDD野生株和變異株的HBVDNA水平分別為106464±1427拷貝毫升和107069±1280拷貝毫升T1686，P0098，P005，HBEAG陽性率分別為19286786％和23297931％X20964，P0326005，差異均無統(tǒng)計學意義。YMDD野生株和變異株的ALT水平分別為22104±46738UL和22609±32254ULT0048，P0962，P005，AST水平分別為22469±49548UL和15025±18155ULT0758，P0451005，ALB白蛋白水平分別為4080±502GL和4238±638GLT1037，P0304005，TBIL水平分別為2970±6331UMOLL和3778±6857UMOLLT0462，P0646005，二者間的肝功能損害無顯著性差異。YMDD自然變異發(fā)生率在無癥狀攜帶者、輕中度慢性乙肝、重型肝炎及肝硬化和肝癌等不同臨床類型慢性肝病中無顯著性差異X23309，P0346005。本實驗所收集病例的基因型比較單一，大部分均為B基因型8772％，且所檢測的突變株均為YVDD陽性，故可能提示B基因型更容易發(fā)生YVDD變異。結(jié)論本實驗采用基因芯片法對57例未經(jīng)拉米夫定治療的慢性HBV感染者進行YMDD及其變異株的檢測，該方法操作簡單，具有多位點的平行檢測特點，可同時檢測野生株和變異株的類型。YMDD變異株與野生株一樣自然存在。HBVYMDD自然變異發(fā)生率與性別、病毒復制水平、肝功能損害程度及臨床類型均無關，提示YMDD變異并不增加肝功能損害的嚴重程度。B基因型可能更容易發(fā)生YVDD變異，故在拉米夫定耐藥突變后，B基因型以WDD突變?yōu)橹鳌?

簡介：背景人類白細胞抗原Ⅰ類分子HLAG在體外實驗中證實具有通過多種機制聯(lián)合作用致免疫耐受的特性，臨床上在器官移植術后患者病理標本或者血清中HLAG水平的升高與急性和慢性排斥的發(fā)生率的降低程度相關。國內(nèi)學者楊寧的研究表明，腺病毒HLAG1轉(zhuǎn)染SD至WISTAR大鼠受體存活時間明顯延長。我們擬用慢病毒HLAG轉(zhuǎn)染SD至WISTAR大鼠保證持久而穩(wěn)定的表達HLAG，測試作為干預因素對抗急性排斥的效果。既往的研究表明，靶細胞表達HLAG能夠通過與NK細胞上的抑制性受體的結(jié)合，抑制細胞毒性顆粒的靶向釋放，也能夠通過含HLAG的細胞膜片轉(zhuǎn)移到NK細胞，使得暫時獲得HLAG的NK細胞轉(zhuǎn)變?yōu)橐种菩约毎种破渌鸑K細胞對靶細胞的殺傷。方法我們首先建立HLAG慢病毒體系和SD至WISTAR大鼠腎移植排斥反應模型。腎移植模型的建立方法是腎動靜脈原位吻合，輸尿管膀胱吻合，另外一側(cè)腎臟切除。在腎動脈恢復血供前30分給予05ML含有107PFU的HLAG慢病毒。我們設計的陽性對照組術后常規(guī)使用FK506抗排斥，陰性對照組以空白病毒轉(zhuǎn)染。術后第7天檢測受體大鼠的血清BUN和CR值，取各組移植腎做病理組織學檢查，并測定HLAG的表達水平。為了弄清HLAG抑制NK細胞的殺傷作用在大鼠和人類間的作用方式和效應水平的差異，我們采用大鼠內(nèi)皮細胞和人類血管內(nèi)皮細胞為靶細胞，在未轉(zhuǎn)染HLAG慢病毒和轉(zhuǎn)染HLAG慢病毒后，以大鼠NK細胞和人類的NK細胞作為攻擊細胞，測定四種組合情況下，其殺傷率的差異。結(jié)果輸注HLAG慢病毒對于術后受體大鼠的生存期和改善腎功能的BUN與CR指標相對于空白病毒轉(zhuǎn)染的對照組沒有任何差別，但是明顯短于使用FK506的抗排斥的對照組?；贐ANFF標準的病理組織學檢查顯示，術后7天在實驗組和陰性對照組存在嚴重的排斥反應，而使用FK506抗排斥的陽性對照組只有輕度排斥反應。人NK細胞攻擊靶細胞人內(nèi)皮細胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLAG慢病毒，殺傷率從748±141％顯著降低至212±47％P＜005，而鼠NK細胞攻擊人內(nèi)皮細胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLAG慢病毒，殺傷率無明顯差別，從677±116％到658±109％P＞005。人NK細胞攻擊靶細胞大鼠內(nèi)皮細胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLAG慢病毒，殺傷率從853±163％降低至317±78％，而鼠NK細胞攻擊鼠內(nèi)皮細胞經(jīng)轉(zhuǎn)染HLAG慢病毒，殺傷率無明顯差別，從258±65％到260±59％。結(jié)論我們的實驗研究表明在SD至WISTAR大鼠腎移植模型中表達HLAG不能延長受體大鼠的生存期或者改善移植腎的功能。HLAG的有效發(fā)揮功能以攻擊細胞上有相應的特異性受體為前提，人的免疫細胞上表達有相應受體，而大鼠的免疫細胞上無相應特異性受體或者這種對應的受體有決定性的種屬差別。

簡介：EBV相關胃癌及鼻咽癌中病毒潛伏期基因啟動子甲基化狀態(tài)的研究中文摘要EB病毒EPSTEINBARRVIRUS，EBV是重要的DNAI中瘤病毒，屬人類皰疹病毒科丫皰疹病毒亞科成員，與人類多種惡性腫瘤密切相關。EBV相關胃癌EBVASSOCIATEDGASTRICCARCINOMA，EBVAGC及鼻咽癌組織中病毒基因表現(xiàn)為限制性表達，可能與病毒利用表觀遺傳機制，尤其是利用DNA甲基化來調(diào)控病毒基因啟動子的活性。研究表明，EBV相關腫瘤組織中病毒可借甲基化沉默部分基因，導致相關蛋白表達水平的降低，因而對宿主免疫系統(tǒng)的刺激也減弱，病毒借此來逃避宿主免疫攻擊，同時也提示針對病毒基因表觀改變的靶向去甲基化作用有可能成為治療EBVIJET性腫瘤的新方法。目的研究分析青島地區(qū)EBVAGC及鼻咽癌組織中EBV主要潛伏期編碼基因啟動子甲基化狀態(tài)。方法選擇32例EBVAGC及20例EBV陽性鼻咽癌NASOPHARYNGEALCARCINOMA，NPC作為研究對象，以EBV陽性細胞系RAJI，B958和AKATA作為對照，采用甲基化特異性PCRMETHYLATIONSPECIFICPCR，MSP及亞硫酸氫鹽基因組測序法BISULFITEGENOMICSEQUENCING，BGS檢測分析其EBV核抗原編碼基因啟動子CP，WP和QP以及EBV潛伏膜蛋白LMPL和LMP2A編碼基因啟動子的甲基化狀態(tài)。結(jié)果①EBV陽性細胞系中EBV編碼基因啟動子甲基化狀態(tài)表現(xiàn)為B958細胞系CP未發(fā)生甲基化，RAJI細胞系CP呈高甲基化，但在AKATA細胞系同時檢測到甲基化和未甲基化的CP。RAJI和AKATA細胞系WP呈高甲基化，但在B958細胞系中則表現(xiàn)為部分未甲基。3種細胞系中均未檢測到QP、LMPLP和LMP2AP的甲基化。②EBVAGC及鼻咽癌腫瘤標本中EBV核抗原編碼基因啟動子的甲基化狀態(tài)與腫瘤細胞的潛伏感染類型基本一致CP和WP呈高甲基化狀態(tài)，而QP未發(fā)生甲基化。EBVAGC和EBV陽性鼻咽癌組織中LMPL和LMP2A編碼基因啟動子甲基化狀態(tài)有差別，二者在EBVAGC組織中的甲基化程度明顯高于EBV陽性鼻咽癌LMPLZ2191462，P00001；LMP2AP妒110139，P00009。結(jié)論EBV相關胃癌和EBV陽性鼻咽癌組織中病毒潛伏期基因啟動子的甲基化狀態(tài)不同，甲基化是調(diào)控EBV潛伏期基因啟動子活動的重要機制之一。碩士研究生張霞病原生物學指導導師羅兵教授關鍵詞EB病毒；胃癌；鼻咽癌；甲基化；潛伏期基因；啟動子PATTERNSOFLMPLPANDLMP2APWEREDIFFERENTTHEMETHYLATIONRATESOFLMPLPANDLMP2APINEBVAGCWERESIGNIFICANTLYHIGHERTHANTHOSEINNPCLMPL礦191462，P00001；LMP2A110139，P00009CONCLUSIONTHEMETHYLATIONSTATUSOFEBVLATENTGENEPROMOTERSINEBVAGCANDNPCISDIRERENT，METHYLATIONISONEOFIMPONANTMECHANISMSINREGLLLARINGTHEACTIVITYOFEBVLATENTGENEPROMOTERSPOSTGRADUATESTUDENTZHANGXIAPATHOGENICBIOLOGYDIRECTEDBYPROF“LUOBINGKEYWORDSEBV；GASTRICCARCINOMA；NASOPHARYNGEACARCINOMA；METHYLATION；PROMOTER；LATENTGENE

簡介：編號碩士學位論文碩士學位論文題目ACOGNITIVECONTEXTBASEDINTERPRETATIONOFVERBALHUMINFRIENDS認知語境視閾下老友記中言語幽默的理解培養(yǎng)單位外國語學院專業(yè)名稱外國語言學及應用語言學指導教師孫若紅研究生宋草葉完成時間2015年6月5日沈陽師范大學研究生處制類別全日制研究生√教育碩士同等學力學位論文獨創(chuàng)性聲明本人所呈交的學位論文是在導師的指導下取得的研究成果。據(jù)我所知，除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含其他個人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中作了明確說明并表示了謝意。作者簽名日期學位論文使用授權(quán)聲明本人授權(quán)沈陽師范大學研究生處，將本人碩士學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索；有權(quán)保留學位論文并向國家主管部門或其指定機構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版，允許論文被查閱和借閱；有權(quán)可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。保密的學位論文在解密后適用本規(guī)定。作者簽名日期

簡介：華中科技大學博士學位論文發(fā)展性閱讀障礙兒童認知特征與脂肪酸代謝的研究姓名盧珊申請學位級別博士專業(yè)兒少衛(wèi)生與婦幼保健學指導教師吳漢榮20070518華中科技大學博士學位論文華中科技大學博士學位論文3第一部分發(fā)展性閱讀障礙兒童閱讀特點目的目的研究漢語發(fā)展性閱讀障礙兒童的讀寫能力特點及其分型，以期為閱讀障礙兒童的預防和矯治提供理論依據(jù)。方法方法采用簡單隨機整群抽樣的方法，抽取武漢市城區(qū)三所小學三～五年級學生820名，根據(jù)ICD10診斷標準，采取了分層檢測的策略篩查出閱讀障礙兒童55名。按12配比選取年齡、性別、家庭經(jīng)濟狀況相似的正常兒童110名進行配對研究，采用兒童中文閱讀能力檢查表（DCCC）對漢語發(fā)展性閱讀障礙兒童和正常兒童的閱讀特點及其分型進行分析評估。結(jié)果結(jié)果檢出閱讀障礙兒童55名，漢語發(fā)展性閱讀障礙的篩出率為67，男女比例為361；閱讀障礙組兒童DCCC各項得分均高于正常對照組兒童上（P均005）。結(jié)論結(jié)論漢語閱讀障礙兒童并不少見，這些兒童是學校中的特殊群體，應該引起醫(yī)學、心理、教育學界的充分重視；漢語發(fā)展性閱讀障礙兒童在閱讀中的各個環(huán)節(jié)如視知覺、聽知覺、意義理解、注意力等均受損害，但以聽知覺損害為主，提示漢語閱讀障礙可能與西方拼音文字的閱讀障礙一樣表現(xiàn)為語音加工缺陷；漢語閱讀障礙兒童閱讀能力的異質(zhì)性不同于正常兒童；漢語閱讀障礙在某種程度上是一種發(fā)展性缺陷。

簡介：禽流感病毒對禽類及人類造成嚴重的威脅，由于其變異性和耐藥性，目前尚無特效治療藥物，因此，急需研究和開發(fā)新型的抗禽流感藥物。從天然藥物中尋找高效低毒的先導化合物是研究與開發(fā)新的抗禽流感藥物的有效途徑。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)構(gòu)棘根具有較好的抗H5N1病毒活性，其活性部位為氯仿和正丁醇部位。本課題主要在活性追蹤的指導下，采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、制備液相色譜、薄層制備和重結(jié)晶等方法對活性部位進行了化學成分的研究。總共分離得到了36個單體化合物，根據(jù)化合物的理化性質(zhì)及對其波譜數(shù)據(jù)的分析鑒定了其中33個化合物，分別為1，3，6三羥基7甲氧基呫噸酮GJ1，1，3，6，7四羥基8異戊烯基呫噸酮GJ2，1，3，5三羥基43羥基3甲基丁基呫噸酮GJ3，1，3，6三羥基4異戊烯基呫噸酮GJ4，1，3，6，7四羥基呫噸酮GJ5，1，3，5，6四羥基呫噸酮GJ6，1，3，6三羥基5甲氧基呫噸酮GJ7，二氫山柰酚GJ8，柚皮素GJ9，山柰酚GJ10，槲皮素GJ11，花旗松素GJ12，6對羥基芐基二氫槲皮素GJ13，8對羥基芐基槲皮素GJ14，二氫桑色素（GJ15），山柰酚7OΒD吡喃葡萄糖苷GJ16，草大戟素GJ17，白藜蘆醇GJ18，氧化白藜蘆醇GJ19，大戟烷7，24二烯3乙酸酯GJ20，大戟烷7，24二烯3醇GJ21，右旋丁香樹脂GJ22，傘形花內(nèi)酯GJ23，對羥基芐基乙基醚GJ24，2，4二羥基苯甲醛GJ25，對羥基苯甲醛GJ26，香草醛GJ27，1，3，5三甲氧基苯GJ28，2，4二羥基苯甲酸乙酯GJ29，Β谷甾醇GJ30，6對羥基芐基山柰酚GJ31，6對羥基芐基槲皮素GJ32，6S，12S，13S1METHOXYCYANOMACLURINGJ33。其中GJ31、GJ32、GJ33為新化合物，GJ1～GJ2、GJ14、GJ23、GJ25～GJ29從該屬植物中首次分離得到，GJ3、GJ13、GJ17從該植物中首次分離得到。單體化合物抗H5N1病毒活性篩選結(jié)果顯示，GJ10和GJ25具有較好的抗H5N1病毒活性，其半數(shù)有效濃度分別為375ΜGML和150ΜGML。

簡介：目的雌激素通過雌激素受體ESTROGENRECEPT，ER介導參與骨代謝過程。自從雌激素受體ΒESTROGENRECEPTBETA，ERΒ被發(fā)現(xiàn)后，人們對雌激素的作用方式產(chǎn)生了全新的認識，這一發(fā)現(xiàn)為研究雌激素受體在骨代謝中作用機制開辟了新的途徑。此外，由成骨細胞與破骨細胞執(zhí)行的骨形成與骨吸收貫穿于骨代謝的全過程。而表達于成骨細胞表面的OPGRANKL系統(tǒng)在闡明骨代謝發(fā)生機制方面具有重要意義，特別是OPGRANKL比率的改變可以影響骨吸收和骨形成，從而影響骨代謝。本研究的主要目標包括①構(gòu)建針對人ERΒ基因逆轉(zhuǎn)錄病毒介導的RNA干擾RNAI表達載體PRNATH14RETROSHRNA并包裝成逆轉(zhuǎn)錄病毒。②將其轉(zhuǎn)染人成骨樣細胞株MG63，觀察其對人成骨樣MG63細胞中ERΒ基因表達的影響。③構(gòu)建人成骨樣細胞ERΒ基因敲低細胞模型并觀察在雌激素干預下ERΒ表達受抑后對人成骨樣MG63細胞株的OPGRANKL比值的影響。為探討ERΒ基因如何調(diào)節(jié)骨代謝提供新的理論基礎。方法①根據(jù)GENEBANK數(shù)據(jù)庫提供的ERΒ基因核苷酸序列，選擇設計3條針對人ERΒ干擾靶序列，再轉(zhuǎn)化為能表達其小發(fā)央結(jié)構(gòu)RNASMALLHAIRPINRNAS，SHRNA的DNA序列，并與PRNATH14RETRO質(zhì)粒定向連接，構(gòu)建真核表達載體PRNATH14RETROERΒSHRNA，經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切和DNA測序進行鑒定。將PRNATH14RETROERΒSHRNA經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至293細胞包裝成逆轉(zhuǎn)錄病毒。②對體外培養(yǎng)的MG63細胞進行形態(tài)學觀察及苔盤蘭瑞氏染色。將包裝好的逆轉(zhuǎn)錄病毒，以空白及非特異性SHRNASHRNANC作為對照，感染人成骨樣MG63細胞株，用流式細胞儀檢測感染效率，然后各組于轉(zhuǎn)染48H后收集細胞分別抽提RNA及蛋白，半定量RTPCR法檢測細胞中ERΒMRNA表達水平的改變，WESTERNBLOT法檢測ERΒ蛋白表達的變化，從而篩選最有效的干擾序列。⑨將含有最有效干擾序列及非特異性SHRNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒分別感染人成骨樣MG63細胞株后，篩選穩(wěn)定克隆并擴大培養(yǎng)，以空白及非特異性SHRNA作為對照，半定量RTPCR法及WESTERNBLOT法檢測穩(wěn)定抑制ERΒ的效率；MTT法測定RNAI干擾ERΒ后對人成骨樣MG63細胞增殖的影響；然后分別向三組細胞即MG63細胞、ERPSHRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的MG63細胞、陰性對照SHRNANC逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的MG63細胞加入108MOLL的17Β雌二醇E2干預，48H后收集細胞，分別抽提RNA及蛋白。應用半定量RTPCR法、WESTERNBLOT法檢測人成骨樣細胞株MG63的OPG、RANKLMRNA和蛋白表達情況。用SPSS130統(tǒng)計學軟件進行分析，計量資料統(tǒng)計結(jié)果以均數(shù)±標準差表示，經(jīng)方差齊性檢驗，組間進行單因素方差分析ONEWAYANOVA后，再用LSD法進行多個樣本均數(shù)間的顯著性檢驗，檢驗水準Α005。P值結(jié)果①針對人ERΒ分別構(gòu)建了3種SHRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PRNATH14RETROERΒSHRBA1，PRNATH14RETROERΒSHRNA2，PRNATH14RETROERΒSHRNA3。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定分析證實目的序列己插入到預計位點，符合設計要求，測序鑒定表明重組質(zhì)粒中含有針對ERΒ基因的目的序列，表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。并經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至293細胞后成功包裝成逆轉(zhuǎn)錄病毒。②感染結(jié)果顯示，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體能高效、穩(wěn)定的感染人成骨樣MG63細胞株，感染效率為70％左右。瞬轉(zhuǎn)的結(jié)果表明3種SHRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒載體對人成骨樣MG63細胞株的ERΒMRNA抑制率分別為4477±541％、6121±447％、8011±172％，蛋白抑制率分別為44844±096％、6252±102％、8118±073％均P結(jié)論①應用PRNATH14RETRO載體成功構(gòu)建了3種PRNATH14RETROERΒSHRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒載體并包裝成PRNATH14RETROERΒSHRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒。②包裝后的3種ERΒSHRNA逆轉(zhuǎn)錄病毒均能高效、穩(wěn)定的感染人成骨樣MG63細胞，并顯著抑制ERΒ的表達。其中以ERΒSHRNA3為最佳的干擾序列。③成功建立了人成骨樣細胞雌激素受體Β亞型基因敲低細胞模型。并發(fā)現(xiàn)在雌激素干預下通過利用RNAI沉默ERΒ基因后可上調(diào)人成骨樣MG63細胞OPGMRNA和蛋白表達、下調(diào)RANKLMRNA和蛋白表達，上調(diào)OPGRANKL表達，從而提示ERΒ可能通過調(diào)節(jié)OPGRANKL在骨代謝中發(fā)揮作用。

簡介：研究目的評價電針調(diào)理髓海法對腦卒中后認知障礙的療效研究方法該課題采用同期對照試驗研究設計方案病例來源為該院針灸科、綜合科和老年科病人將符合診斷標準及納入標準同時又不符合排除標準的輕中重不同分級的認知障礙患者入選該課題中根據(jù)實際情況在尊重患者及其家屬意愿的基礎上將入選病例分入電針組或藥物組調(diào)理髓海電針療法治療組為觀察組口服瑙復樂藥物療法治療組為平行對照組治療一月后觀察電針組和藥物組認知功能的前后變化及視覺選擇反應時和光信號的視覺記憶正確率的前后變化并作半年后認知功能的隨訪結(jié)論1電針調(diào)理髓海法治療腦卒中后認知障礙有效2在改善注意力和定向力方面電針比藥物的優(yōu)勢大在今后的工作中可以擴大樣本量進一步研究

簡介：目的研究MIR155在HBV慢性感染的細胞模型中對免疫應答的調(diào)節(jié)及其抗HBV作用。方法1提取人肝癌細胞株總DNA作為模板，通過PCR擴增MIR155前體序列，酶切后退火連接到PMRMCHERRY質(zhì)粒，構(gòu)建PMIR155真核表達載體，然后進行菌落PCR、質(zhì)粒雙酶切和DNA測序鑒定。2利用脂質(zhì)體法將PMIR155真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HEPG2215細胞，同時設空載組（PMRMCHERRY質(zhì)粒）、轉(zhuǎn)染試劑組、空白組和對照組（HEPG2細胞）。轉(zhuǎn)染后24H熒光顯微鏡下觀察細胞內(nèi)紅色熒光蛋白的表達情況，熒光實時定量PCR檢測各組細胞內(nèi)MIR155表達量。3重組質(zhì)粒PMIR155經(jīng)去內(nèi)毒素提取后，轉(zhuǎn)染到人肝癌細胞株。收集轉(zhuǎn)染后各組細胞及細胞培養(yǎng)上清液，應用RTPCR檢測各組SOCS1MRNA的變化，WESTERNBLOT檢測各組SOCS1蛋白的變化，ELISA檢測各組細胞的IFNΓ及IL2的分泌量變化。4重組質(zhì)粒PMIR155轉(zhuǎn)染到HEPG2215細胞，同時設空載組PMRMCHERRY質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染試劑組、空白組。轉(zhuǎn)染后24H、48H、72H，應用熒光實時定量PCR檢測各組細胞內(nèi)MIR155表達量，化學發(fā)光法定量檢測細胞培養(yǎng)上清液HBSAG和HBEAG變化，熒光實時定量PCR定量檢測HBVDNA拷貝數(shù)的變化。結(jié)果1通過菌落PCR、質(zhì)粒雙酶切及DNA測序鑒定，證實MIR155前體序列成功插入PMRMCHERRY真核表達載體，PMIR155真核表達載體構(gòu)建成功。2轉(zhuǎn)染后24H、48H、72H各組細胞進行熒光觀察，載體中紅色熒光蛋白有較好的表達，轉(zhuǎn)染效率達到50％以上。熒光實時定量PCR結(jié)果表明，以空白組為基準，重組載體組細胞內(nèi)所表達的MIR155明顯增加，具有顯著意義P＜005。3RTPCR結(jié)果示重組載體組SOCS1MRNA的表達量063±009顯著低于空白組P＜005WESTERNBLOT結(jié)果示重組載體組內(nèi)SOCS1蛋白表達量037±007顯著低于空白組P＜005ELISA結(jié)果示以空白組為基準，重組載體組與對照組所分泌的IFNΓ、IL2水平均顯著高于空白組P＜005，而空載組及轉(zhuǎn)染試劑組與空白組相似。4化學發(fā)光法結(jié)果示以空白組為基準，轉(zhuǎn)染后重組載體組細胞所分泌HBSAG、HBEAG明顯減少，而空載組及轉(zhuǎn)染試劑組與空白組相似。轉(zhuǎn)染后48H重組載體細胞內(nèi)MIR155對HBSAG和HBEAG抑制最為明顯，抑制率分別為8396±152％和7960±871％。熒光實時定量PCR檢測結(jié)果示轉(zhuǎn)染后24H、48H、72H，以空白組為基準，重組載體組中HBVDNA拷貝數(shù)明顯減少，而空載組及轉(zhuǎn)染試劑組未見明顯差異。其中重組載體組內(nèi)MIR155對HBVDNA的抑制率分別為5187±036％、4367±151％和6821±602％。相關性分析發(fā)現(xiàn)MIR155與HBSAG、HBEAG和HBVDNA表達復制呈負相關R＜0。結(jié)論在HBV慢性感染的細胞模型HEPG2215中，過表達的MIR155可通過增強抗病毒免疫效應抑制HBV的復制及表達。

簡介：病毒性肝炎是我國的常見、多發(fā)病，其中乙型肝炎病毒HBV慢性感染是導致肝細胞癌的主要危險因子之一。乙型肝炎病毒變異性高，其基因組包括四個開放閱讀框C、P、S、X，其中HBX編碼的蛋白是一種多功能性蛋白，為病毒基因組轉(zhuǎn)錄所必需，在乙型肝炎病毒的復制、細胞生長、DNA修復及凋亡過程中起重要作用。因此，對HBX進行深入研究具有極其重要的理論和臨床意義。細胞毒性T淋巴細胞是細胞免疫應答的核心成分，通過受體與帶有CTL表位即抗原肽的MHCI類分子互相作用，溶解、殺傷靶細胞。抗原肽是抗原中能被免疫細胞特異性識別的線性片段或空間構(gòu)象性結(jié)構(gòu)，是引起免疫應答和免疫反應的基本單位，在機體免疫中發(fā)揮關鍵的作用，抗原表位的選擇也是能否獲得特異性抗體的關鍵。由于HBX表位可以被不同的MHCI類分子所識別、遞呈，在這些MHCI類分子中，中國人群中HLAA2陽性的人群高達50％，因此對HLAA0201限制性的CTL表位進行研究具有更大的現(xiàn)實意義。迄今為止，HBV被分為八個不同的基因型AH，以及眾多的血清型。我們選擇了中國人群中最常見B基因型中的ADW血清型和C基因型中的ADR血清型的基因序列作為研究對象，分別通過三個提供表位預測服務的網(wǎng)絡站點，以及超基序、延展基序和量化基序等方案預測獲得4條九肽作為候選表位HBXVLCLRPVGA、HBX2CLFKDWEEL、HBX3VLHKRTLGL、HBX4HLSLRGLPV。由于預測結(jié)合并不等于實際結(jié)合，并且實際結(jié)合也并不意味著真正具有免疫原性，所以有必要通過體內(nèi)、體外實驗對預測表位的結(jié)合能力、免疫原性進行進一步的免疫學鑒定。為此，我們根據(jù)文獻分別選擇了陽性肽HBCFLPSDFFPSI以及陰性肽HBC，HLAA2402EYLVSFGVW作為陽性、陰性參照。T2細胞作為一種免疫學研究的工具，其表面空載的HLAA0201分子表達極不穩(wěn)定，而外源性抗原肽的結(jié)合能夠提高HLAA0201分子的穩(wěn)定性，因此我們通過T2細胞結(jié)合實驗和結(jié)合穩(wěn)定性實驗檢測各候選表位與HLAA0201分子結(jié)合的親和力、穩(wěn)定性，四條候選表位中HBX2的親和力和穩(wěn)定性最高。為了進一步檢測各候選表位在體內(nèi)環(huán)境中的免疫原性，我們以HLAA21K轉(zhuǎn)基因鼠為模型，模擬體內(nèi)環(huán)境，對四條候選表位刺激脾細胞釋放IFNΓ的能力和誘導的肽特異性CTL的細胞殺傷能力進行了檢測，四條候選表位中HBX2同樣表現(xiàn)出較高的刺激脾細胞釋放IFNΓ和誘導的肽特異性CTL的細胞殺傷的能力。之后我們分離了HLAA0201陽性慢性活動期乙肝病人外周血中的單個核細胞，通過檢測HBX2和各對照肽體外刺激單個核細胞分泌IFNΓ的能力和誘導的肽特異性CTL的細胞殺傷能力，對HBX2的免疫原性作進一步的鑒定。根據(jù)體內(nèi)、體外鑒定的結(jié)果，我們利用HBX2構(gòu)建了可溶性的肽四聚體，為將該表位進一步應用于臨床診斷和治療鋪平了道路。綜上所述，HBX2CLFKDWEEL是一個潛在的HBX來源的HLAA0201限制性CTL表位，具備應用于臨床診斷、治療的可能性。我們的研究為進一步深入探討HBX在乙肝和乙肝導致的肝細胞癌中的作用以及慢性乙肝、肝細胞癌的診斷、治療研究打下了良好的基礎。

簡介：知母是百合科知母屬植物知母ANEMARRHENAASPHODELOIDESBGE的干燥根莖，廣泛分布于我國黃河以北地區(qū)。知母味苦甘，性寒，入肺、胃、腎經(jīng)，是我國的一種傳統(tǒng)中藥，具有清熱除煩、瀉肺滋腎的功效，主要治療煩熱消渴、熱性病高燒、肺熱咳嗽、結(jié)核病發(fā)熱、糖尿病、大便干燥等癥。近年，知母與其它中草藥配伍，在臨床上用于病毒性疾病的治療，但對其抗病毒活性成分的研究尚未見報道。本論文以抗病毒活性為導向，對知母中抗病毒活性部位中化學成分進行了較系統(tǒng)地研究。本研究選擇細胞病變法CYTOPATHICEFFECT，CPE以抗呼吸道病毒流感病毒、單純皰疹病毒為指標，采用活性追蹤的方法，對知母水提物進行了抗病毒活性篩選，發(fā)現(xiàn)其乙酸乙酯部位具有顯著的抗病毒活性；并采用現(xiàn)代提取、分離、純化技術制備薄層、反相C18硅膠柱、反相C8硅膠柱、凝膠柱層析、高效液相色譜等，從乙酸乙酯活性部位中共分離得到16個單體化合物116；利用理化性質(zhì)和光譜學方法UV、MS、IR、1DNMR及2DNMR，對所有16個化合物的化學結(jié)構(gòu)進行了闡明?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)分別是知母雙環(huán)烯酮1、金色酰胺醇酯2、金色酰胺醇3、香豆?；野?、N反式阿魏?；野?、N順式阿魏?；野?、環(huán)酪亮二肽7、煙酸8、順扁柏樹脂酚9、甲基順扁柏樹脂酚10、芒果苷11、26，10，10四甲基1氧雜螺環(huán)453，6二烯8酮12、對羥基亞芐基丙酮13、2羥苯基2丁烯酸14、對羥基苯甲酸15、香草酸16。上述化合物中，化合物1為新化合物，化合物2～8為首次在知母中發(fā)現(xiàn)，化合物2～7是首次從百合科植物中分離得到；另外，除化合物9、10、11外，其它化合物均為首次從該植物中分離得到。本論文從知母的抗病毒活性部位乙酸乙酯提取物中共分離得到16個化合物，其中一個為新化合物。化合物的結(jié)構(gòu)類型包括，7個生物堿類化合物，2個木脂素類化合物，2個烯酮類化合物，1個口山酮類化合物和4個酚類化合物，這些單體化合物的抗病毒活性評價正在進行中。上述研究為進一步闡明知母的抗病毒活性成分奠定了基礎。

簡介：點擊查看更多FGF21腺病毒載體構(gòu)建及其對db-db小鼠糖代謝調(diào)節(jié)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：病毒性心肌炎VIRALMYOCARDITISVMC是一種由病毒感染所致的以心肌炎性病變?yōu)橹鞯募膊∈桥R床常見的心系疾病之一。易發(fā)于青少年近年逐步引起國內(nèi)外重視。目的本課題根據(jù)中醫(yī)基本理論結(jié)合臨床研究觀察益氣祛瘀解毒法治療VMC急性期的臨床療效。方法選60例符合病例納入標準的VMC急性期的患者隨機分為兩組試驗組30例對照組30例試驗組用中藥益氣祛瘀解毒法治療對照組用常規(guī)西藥治療觀察兩組治療前后癥狀、體征、心電圖、血清心肌酶左心室功能變化。結(jié)果試驗組總有效率97％對照組總有效率60兩組差異有顯著性意義。在中醫(yī)證候療效和改善病人臨床癥狀方面試驗組優(yōu)于對照組P＜O05在改善異常心電圖的作用方面亦優(yōu)于對照組P＜O05。同時試驗組對患者的血清心肌酶、左心室功能方面亦有明顯的改善作用P＜005。結(jié)論益氣祛瘀解毒法治療病毒性心肌炎急性期臨床癥狀改善明顯是治療VMC的有效方法。

簡介：中圖分類號大連醫(yī)科大學碩士學位論文密級輕度認知障礙和阿爾茨海默病患者血液中視錐樣蛋白一1濃度的研究THECONCENTRATIONOFVISININLIKEPROTEIN1INTHEBLOODINPATIENTSOFMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTANDALZHEIMERDISEASE計學位論文30頁表插格5個圖1幅指導教師劉萍教授陳婭萍申請學位級別碩士學位學科專業(yè)神經(jīng)病學培養(yǎng)單位大連醫(yī)科大學及完成時間二O一五年四月大連市第三人民醫(yī)院答辯委員會主席大連醫(yī)科大學碩士學位論文關于學位論文使用授權(quán)的說明本學位論文作者完全了解學校有關保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)大連醫(yī)科大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。本學位論文屬于請在以下相應方框內(nèi)打“4”1保密口，在一年解密后適用本授權(quán)書。2不保密口。作者簽名導師簽名日期年月日日期年月日

簡介：徐州醫(yī)學院碩士學位論文攜帶KI67基因小發(fā)夾RNA的條件增殖型腺病毒治療膀胱癌荷瘤鼠的實驗研究姓名梅冬冬申請學位級別碩士專業(yè)內(nèi)科學（腎?。┲笇Ы處熞艺\20070401徐州醫(yī)學院碩士學位論文論文獨創(chuàng)性聲明本論文絲莖叢絲因避幽魚主繹籃墮翌籃盞丕壟壟絲壁蕉查壘魚磐罕受’在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。論文中除了特別加以標注和致謝的地方外，不包含其他人或機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究的啟發(fā)和所做的貢獻均已在論文中作了明確的聲明并表示了謝意。作者簽名塑塞璺論文使用授權(quán)聲明本人完全了解徐州醫(yī)學院有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權(quán)保留送交論文的復印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱；學?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其它復制手段保存論文。保密的論文在解密后遵守此規(guī)定。作者簽名墊童曼導師簽名52