1、目的:
　　構建編碼縫隙連接蛋白connexin30(Cx30)的致病基因GJB6及其3種突變體的慢病毒過表達載體，并分析其在人永生化角質形成細胞(HaCaT)中的表達。
　　資料與方法:
　　構建GJB6基因及其突變體(G11R、A88V、V37E)的過表達慢病毒載體，轉染入293T細胞，應用熒光倒置顯微鏡、Realtime定量PCR法(q-pcr)、WesternBlot等檢測其表達情況，并轉染HaCaT細胞，在熒

2、光倒置顯微鏡下觀察熒光表達及蛋白的初步定位。
　　結果:
　　成功構建了該基因野生型及突變體慢病毒表達載體，并將G11R和A88V突變體成功轉染HaCaT細胞。構建及轉染過程中發(fā)現(xiàn):野生型重組質粒轉染293T細胞后有強熒光顯示，WB檢測強陽性條帶;3種突變型重組質粒轉染293T細胞后，A88V突變型轉染細胞內觀察到較強熒光，G11R有弱熒光，而V37E突變型未觀察到熒光或較弱，但WB檢測均有弱陽性條帶，說明目的基因有表達但較

3、野生型低。將構建的G11R和A88V突變體慢病毒表達載體轉染Hacat細胞，可觀察到弱的熒光;V37E突變型未觀察到熒光或較弱，且有HaCaT細胞大量死亡現(xiàn)象。
　　結論:
　　野生型GJB6轉染HaCaT細胞后蛋白能夠定位于細胞膜，3種突變體中只有G11R和A88V突變體可定位于細胞膜但其編碼的Cx30表達量較少，初步推測不同GJB6突變體或不能定位于角質形成細胞膜或不能形成功能性的Cx30，影響了角質形成細胞正常的增殖和