1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得畝喵要喬垮或其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名：刎鵲鴰簽字日期：弘，p年口鈿，，日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完叁了解分鍛灰獸有關(guān)保留、使用學

2、位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)旬訊衣矽以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文(保密的學位論文在解密后適用本授權(quán)書)學位論文作者簽名：立。)扦靜簽字日期：砂f2年D易月日學位論文作者畢業(yè)去向：工作單位：通訊地址：導師張繡確簽字日期：戶，二年口釤月／z日電話：郵編：黃連木LEAFY同源基因cDNA全長的克隆與

3、載體構(gòu)建l152bp的完整開放閱讀框，編碼383個氨基酸，該序列與其它植物已克隆的LFY基因序列高度同源。其核苷酸序列與同屬于漆樹科的卡亡果￡Fy基因的同源性高達94％，與龍眼、蓖麻、胡桃的同源性分別為84％、82％和78％；其編碼氨基酸序列的同源性與卡亡果、麻風樹、龍眼、蓖麻分別為95％、85％、84％和84％。推測PcBLFY基因可能為竹垌源基因。2通過對黃連木雄株、雌株的花蕾中分離到的PcBLFY基因序列進行比對發(fā)現(xiàn)，兩種不同性別

4、來源的PcBLFY基因在第52位、394位和l105位表現(xiàn)出單核苷酸的多態(tài)性，其中雄株在這三個位點的堿基分別為G，A，A和C，T，G，分別編碼Val，lle，Thr和Leu，Leu，Ala；雌株在該位點的堿基則為C，T，A，編碼Leu，Leu，Thr，雌雄間單核苷酸的改變導致在該位點的氨基酸的改變。3植物表達載體的構(gòu)建：選擇酶切位點BglII和凰匠II，將PcBLFy基因的編碼序列插入到植物表達載體pCAMBIAl3051中，通過PCR

5、鑒定及測序檢測，得到重組質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌工程菌AGLl中。4原核表達載體的構(gòu)建：將PcBLFY基因的編碼序列通過酶切位點NdeI和HindlII插入到原核表達載體pET28a中，成功構(gòu)建了該基因的原核表達載體，并通hIEcoliBL21(DE3)實現(xiàn)了PcBLFy基因在大腸桿菌表達系統(tǒng)中高效重組表達，同時利用Ni2柱親和層析法對重組蛋白進行了分離純化，得到較高純度的目標蛋白。本研究成功地從童期較長的黃連木植物中分離克隆到￡Fy全