1、目的:
　　探討miR-30c在調控細胞分化中的作用及對脊椎動物早期胚胎發(fā)育的影響。
　　方法:
　　1、生物信息學分析:1）從miRBase數(shù)據(jù)庫(http://www.mirbase.org/)中獲取各物種miR-30家族成員的核苷酸序列，并用軟件Clustal W進行多序列比對。2）以miR-30家族成員各自原始轉錄本(pri-miR-30)核苷酸序列為基礎的種系樹由軟件MEGA5中鄰接法(neighbor-jo

2、iningmethod)計算建立。
　　2、TaqMan PCR技術和胚胎整體原位雜交技術:斑馬魚基因組DNA抽提，PCR和探針質粒構建，地高辛標記反義RNA探針準備，胚胎整體原位雜交，基于TaqMan PCR技術的miRNA表達分析。
　　3、顯微注射miR-30c-duplex、顯微注射嗎啡啉（morpholino）環(huán)標記的反義寡核苷酸:分別將morpholino（嗎啡啉修飾反義寡核苷酸鏈morpholino,dre-m

3、iR-30c-MO）、duplex(miR-30c-duplex)和mRNA(體外轉錄合成的egfp-cxcr4a-3'UTR mRNA、egfp-cxcr4a-3'UTR(miR-30cmut)mRNA)經(jīng)顯微注射進入胚胎細胞并設對照組。
　　4、進行miRNA靶基因預測分析并和全胚胎miRNA靶基因報道系統(tǒng)比對。
　　結果:
　　1、miR-30c母源性低表達，原腸后期至體節(jié)中期呈廣泛表達且中內胚層表達豐富，受精后

4、24小時特異性表達于胚胎原腎管。
　　2、過表達miR-30c斑馬魚胚胎表現(xiàn)為中內胚層細胞向胚胎中線遷移能力下降，最終呈現(xiàn)雙心畸形和內臟畸形。
　　3、特異性抑制miR-30c的成熟，可增強斑馬魚胚胎中內胚層細胞向中線遷移的能力。
　　4、細胞遷移相關因子cxcr4a是miR-30c的潛在靶基因之一。
　　結論:
　　1、初步探討miR-30c在胚胎發(fā)生早期的時空表達模式。
　　2、miR-30c是中