1、帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）是一種多發(fā)于中老年的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，以運動不能、肌僵直、靜止性震顫及姿勢反射障礙為特征性表現(xiàn)，其病理學特征是中腦黑質致密帶多巴胺（dopamine，DA）能神經(jīng)元脫失。研究顯示遺傳因素、環(huán)境因素和氧化應激等可能參與PD的發(fā)病，但其發(fā)病機制并不明確。腦內高鐵導致黑質－紋狀體系統(tǒng)DA能神經(jīng)元功能的損傷已成為越來越受到神經(jīng)科學家關注的熱點問題。目前PD鐵沉積的研究主要集中在DA能

2、神經(jīng)元，實際上腦內多種膠質細胞在鐵穩(wěn)態(tài)調節(jié)中也發(fā)揮重要作用。星形膠質細胞對鐵有極高的耐受能力，鐵負載時，神經(jīng)元和小膠質細胞死亡，而星形膠質細胞卻在同樣的情況下增生。星形膠質細胞參與血腦屏障的形成，在腦內鐵穩(wěn)態(tài)的調節(jié)發(fā)揮重要的作用。星形膠質細胞在生理情況下并不含大量的鐵或鐵蛋白，因此血腦屏障鐵的轉運過程與小腸相似。在小腸中，鐵首先被小腸細胞管腔膜上的二價金屬離子轉運蛋白1（divalent metal transporter1，DMT1）

3、轉入細胞，進入細胞后可以儲存到鐵蛋白中也可以通過基側膜上的鐵轉出蛋白Ferroportin1(FPN1）轉出細胞。本室前期研究表明：6-OHDA作用下，星形膠質細胞DMT1和FPN1的表達均增加，鐵轉運能力增強，防止了自身鐵的沉積。但機制尚不清楚。缺氧誘導因子（hypoxia-inducible factors，HIFs）是鐵穩(wěn)態(tài)的重要因子。HIFs由α亞基和β亞基組成具有轉錄活性的異源二聚體。其中α亞基是HIFs的調節(jié)亞基，而β亞基則

4、持續(xù)性表達。因此，對HIFs的研究主要集中在HIF-α。HIF-2α可與DMT1和FPN1的啟動子區(qū)的hypoxia-responsive elements（HREs）結合增加DMT1和FPN1的表達。那么6-OHDA引起的星形膠質細胞的DMT1和FPN1的表達上調是否由HIF-1α或HIF-2α引起？
　　本研究主要內容包括：⑴10μmol/L6-OHDA處理原代培養(yǎng)的星形膠質細胞24 h，HIF-1α的蛋白表達上調，差異有統(tǒng)計

5、學意義（P<0.01)。HIF-2α的蛋白表達上調，差異有統(tǒng)計學意義。⑵10μmol/L6-OHDA處理SH-SY5Y細胞24h，HIF-1α蛋白表達無明顯變化（P>0.05)。HIF-2α蛋白表達無明顯變化。⑶10μmol/L HIF-1α抑制劑Bay87-2243預處理原代星形膠質細胞48h后，加入10μmol/L6-OHDA共同作用細胞24 h，Bay87-2243組與正常對照組相比，HIF-1α的蛋白表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（

6、P<0.05)。6-OHDA和Bay87-2243共孵育組與6-OHDA組相比，HIF-1α的蛋白表達降低，差異有統(tǒng)計學意義。⑷10μmol/L Bay87-2243預處理原代星形膠質細胞48h后，加入10μmol/L6-OHDA共同作用細胞24h，Bay87-2243組與正常對照組相比，DMT1的蛋白表達無明顯變化（P>0.05)。6-OHDA和Bay87-2243共孵育組與6-OHDA組相比，DMT1的蛋白表達無明顯變化（P>0.0

7、5)。6-OHDA組與正常對照組相比，DMT1的表達明顯上調，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01)。6-OHDA和Bay87-2243共孵育組與正常對照組相比，DMT1的表達上調，差異有統(tǒng)計學意義。⑸10μmol/L Bay87-2243預處理原代星形膠質細胞48h后，加入10μmol/L6-OHDA共同作用細胞24h，Bay87-2243組與正常對照組相比，F(xiàn)PN1的蛋白表達無明顯變化（P>0.05)。6-OHDA和Bay87-2243共

8、孵育組與6-OHDA組相比，F(xiàn)PN1的蛋白表達無明顯變化（P>0.05)。6-OHDA組與正常對照組相比，F(xiàn)PN1的表達上調，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。6-OHDA和Bay87-2243共孵育組與正常對照組相比，F(xiàn)PN1的表達上調，差異有統(tǒng)計學意義。⑹10μmol/L HIF-2α抑制劑HIF-2αinhibitor預處理原代星形膠質細胞24h后，加入10μmol/L6-OHDA共同作用細胞24h。HIF-2αinhibitor

9、組與正常對照組相比，HIF-2α的蛋白表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。6-OHDA和HIF-2αinhibitor共孵育組與6-OHDA組相比，HIF-2α的表達明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義。⑺10μmol/L HIF-2αinhibitor預處理原代星形膠質細胞24h后，加入10μmol/L6-OHDA共同作用細胞24h。HIF-2αinhibitor組與正常對照組相比，DMT1的蛋白表達明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.

10、01)。6-OHDA和HIF-2αinhibitor共孵育組與6-OHDA組相比，DMT1的表達降低，差異有統(tǒng)計學意義。⑻10μmol/L HIF-2αinhibitor預處理原代星形膠質細胞24h后，加入10μmol/L6-OHDA共同作用細胞24h，HIF-2αinhibitor組與正常對照組相比，F(xiàn)PN1的蛋白表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)。6-OHDA和HIF-2αinhibitor共孵育組與6-OHDA組相比，F(xiàn)P