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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng),觀察其形態(tài)特征及鑒定表面標(biāo)志物。
2.對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化和成骨分化進(jìn)行研究。
3.觀察不同濃度PTH1-34對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響,探討其可能機(jī)制。
方法:
1.采用貼壁法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),觀察其形態(tài)、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面標(biāo)志物及細(xì)胞周期。
2.誘導(dǎo)BMSCs定向分化為
2、脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞,并通過組織染色法鑒定分化后的細(xì)胞。
3.以第三代BMSCs為體外試驗(yàn)?zāi)P?,不同濃度甲狀旁腺激素(PTH1-34)(0、10-10、10-9、10-8mol/L)分別作用于加入成脂誘導(dǎo)液的BMSCs,14天后采用ELISA法測(cè)定LPL活性,采用RT-PCR法測(cè)定ALP和PPARγ-2 mRNA表達(dá)水平,觀察不同濃度PTH1-34對(duì)BMSCs成脂分化的影響。
4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.
3、0軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料的表示用X?S,采用方差分析和LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行各組間比較,P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:
1.BMSCs貼壁生長(zhǎng),均一長(zhǎng)梭形,生長(zhǎng)曲線為“S”型。細(xì)胞周期測(cè)定大部分處于G1/G0期。P3代BMSCs陽(yáng)性表達(dá)CD44、CD29,陰性表達(dá)CD45。
2.成脂誘導(dǎo)液誘導(dǎo)BMSCs分化21天后,油紅O染色可見胞內(nèi)脂滴出現(xiàn),成骨誘導(dǎo)28天后,茜素紅染色可見鈣結(jié)節(jié)。
3.不
4、同濃度PTH1-34(10-10、10-9、10-8、mol/L)分別作用于BMSCs后,與未加入PTH1-34的對(duì)照組比較,LPL、PPARγ-2的表達(dá)量下降,ALP活性明顯增加,并呈劑量依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:
1.BMSCs形態(tài)為均一長(zhǎng)梭形;穩(wěn)定表達(dá)CD44、CD29,不表達(dá)CD45;BMSCs具有向脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化的潛能。
2.PTH1-34抑制BMSCs成脂分化,促
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