1、背景與目的：非甾體類抗炎藥(NSAIDs)在臨床上廣泛用于骨關節(jié)損傷及骨性關節(jié)炎的抗炎及止痛治療。但發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的NSAIDs以及選擇性環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑對骨折愈合存在一定的負面效應。目前有關于選擇性COX-2抑制劑對于骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)的增殖及分化效應的直接影響及其具體作用機制仍不明確。本實驗目的是通過觀察不同濃度的塞來昔布對rBMSCs的增殖、成骨誘導分化及ALP mRNA、OCN mRNA表達等影響，并探討塞

2、來昔布影響rBMSCs成骨誘導分化的可能機制。
　　方法：采用大鼠全骨髓貼壁法分離并體外培養(yǎng)、擴增及鑒定獲得rBMSCs;通過細胞計數(shù)法獲知細胞倍增時間;使用不同濃度的塞來昔布(0、12.5、25、50、100umol/l)分別干預培養(yǎng)rBMSCs24以及48小時，MTS法檢測不同濃度的塞來昔布對rBMSCs增殖的影響;采用較高濃度的塞來昔布(100umol/l)加成骨誘導液（10-5M地塞米松、10mMβ-甘油磷酸、50ug/m

3、l抗壞血酸）誘導rBMSCs成骨分化，分別在誘導的第3天、7天以及14天進行ALP染色、茜素紅染色，并提取總RNA，應用Realtime PCR擴增ALP、OCN以及β-actin。
　　結果：根據(jù)茜素紅染色以及流式細胞表面抗原測定結果表明我們成功分離、獲得了rBMSCs;根據(jù)細胞計數(shù)結果，經(jīng)統(tǒng)計獲得細胞倍增時間約為26小時。藥物干預24小時以及48小時，細胞增殖抑制實驗表明100umol/L塞來昔布對rBMSCs增殖抑制明顯，具

4、有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);12.5、25以及50umol/L塞來昔布對rBMSCs增殖抑制無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。ALP染色結果表明成骨誘導3天對照組以及實驗組ALP表達活性均較微弱，染色均為陰性;誘導7天對照組ALP活性逐漸上升，染色為陽性，而實驗組染色始終為陰性;誘導14天對照組ALP活性進一步升高，染色為陽性，實驗組可見細胞大量脫落壞死，染色陰性。茜素紅染色結果表明:成骨誘導3天對照組以及實驗組染色均為陰性;誘導7天對照

5、組及實驗組染色仍為陰性;誘導至14天對照組可見明顯鈣結節(jié)形成，染色陽性，而此時實驗組細胞壞死明顯，未見鈣結節(jié)形成，染色呈陰性。熒光定量PCR結果表明:成骨誘導3天對照組以及實驗組ALP mRNA、OCN mRNA表達均較低;成骨誘導7天對照組ALP mRNA表達明顯升高并維持在較高水平，實驗組ALPmRNA表達升高趨勢較弱，對照組OCN mRNA表達與第3天相比基本無差異，實驗組OCN mRNA表達下降明顯;誘導14天對照組ALP mR

6、NA表達出現(xiàn)明顯下降，實驗組ALP mRNA表達與第7天相比無明顯差異，對照組OCN mRNA表達進一步達到較高水平，實驗組OCN mRNA表達與第7天相比基本無變化。
　　結論：本實驗發(fā)現(xiàn):
　　1.高濃度的塞來昔布(100umol/L)對rBMSCs增殖具有顯著抑制效應;較低濃度的塞來昔布(12.5、25以及50umol/l)對rBMSCs增殖抑制無統(tǒng)計學意義。
　　2.高濃度的塞來昔布(100umol/L)能夠抑