1、目的：
　　基于“毒損腎絡”理論研究槲皮素（Quercetin，Qu）不同給藥時間對轉化生長因子β1(Transforming growth factor-β1，TGF-β1)誘導的腎小球足細胞轉分化（Epithelial Mesenchymal Transition，EMT）的抑制作用。
　　方法：
　　將體外原代培養(yǎng)的細胞用光鏡、電鏡及免疫組織化學染色法進行鑒定，確定為足細胞后，隨機分為對照組、模型組、Qu先干預組

2、、Qu同時干預組和Qu后干預組共5組。對照組常規(guī)培養(yǎng)；模型組用5ng/ml TGF-β1誘導48h；先干預組用50μmol/L Qu干預24h后，再用5ng/ml TGF-β1繼續(xù)誘導24h；同時干預組加入50μmol/L Qu和5ng/ml TGF-β1干預48h；后干預組先用5ng/ml TGF-β1干預24h，再用50μmol/L Qu干預24h。將上述各組細胞分別用Western blot、RT-PCR技術檢測足細胞裂孔膜蛋白（

3、Nephrin）、Wilms瘤抑癌因子-1（WT-1）和足細胞 EMT標志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌動蛋白（alpha smooth muscle Actin,α-SMA）的蛋白及mRNA表達量，選擇相關統(tǒng)計學軟件進行組間差異比較。
　　結果：
　　1．經(jīng)細胞形態(tài)學觀察（光鏡、電鏡）和免疫組化鑒定，確定所培養(yǎng)細胞為足細胞。正常足細胞形態(tài)不規(guī)則，呈分叉狀，有較多細而長的突起，典型者可見多條“樹枝樣”稠而密的突

4、起。經(jīng) TGF-β1誘導后，足細胞的胞體變大，突起縮短甚至消失。Qu不同時間干預組的足細胞形態(tài)均有所改善，表現(xiàn)為細胞突起較多，部分細胞可見“樹枝樣”足細胞典型結構，其中以Qu先干預組最為明顯。
　　2.蛋白表達量：與對照組相比較，模型組足細胞Nephrin、WT-1明顯降低（P均＜0.01），而Vimentin、α-SMA明顯升高（P均＜0.01）。與模型組相比，三種不同干預方法下，Nephrin蛋白表達量以后干預組最高（P＜0.

5、01）；WT-1蛋白表達量以同時干預組最高（P＜0.01）；Vimentin蛋白表達量以先干預組最低（P＜0.01）；α-SMA蛋白表達量以先干預組最低（P＜0.01）。
　　3.mRNA表達量：與對照組相比較，模型組足細胞Nephrin和WT-1的mRNA表達量明顯降低（P均＜0.01）；而Vimentin、α-SMA的mRNA表達量均明顯升高（P均＜0.01）。與模型組相比，三種不同干預方法下，Nephrin和WT-1的mRN

6、A表達量均以先干預組最高（P均＜0.01）；Vimentin和α-SMA的mRNA表達量均以先干預組最低（P均＜0.01）。
　　結論：
　　1．聯(lián)合運用酶消化法、差異過篩法和鼠尾膠原包被法是一種操作相對簡便、重復性較好的足細胞原代培養(yǎng)方法，WT-1、Nephrin可作為足細胞鑒定的標記蛋白。
　　2.TGF-β1能夠誘導足細胞形態(tài)學改變，促進足細胞EMT的發(fā)生發(fā)展。
　　3.Qu能夠抑制TGF-β1誘導的足細胞