1、目的:本研究在體外建立大鼠腎小管上皮細胞轉分化(Epithelial-myofibroblasttransdifferentiation)模型，通過檢測細胞骨架蛋白β-actin，上皮細胞黏附分子E-cad，纖維化標志α-SMA、ILK、FN、Col-Ⅰ等蛋白及基因的表達，探討溫莪術對EMT的干預作用及可能的作用機制。
　　 方法:通過MTT法選取合適的溫莪術含藥血清給藥濃度后，將體外培養(yǎng)的正常大鼠腎小管上皮細胞(NRK-52E

2、)隨機分為6組:正常對照組、TGF-β1誘導模型組、溫莪術低濃度組、溫莪術中濃度組、溫莪術高濃度組、鹽酸貝那普利組，其中溫莪術及鹽酸貝那普利均以體外制作的含藥血清方式給藥。除正常對照組外，各組轉化生長因子-β1(Transforming growth factor-β1，TGF-β1)以10ng/mL的濃度誘導24 h后，溫莪術組及鹽酸貝那普利組再加入藥物作用48 h。運用倒置顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)學的改變，細胞免疫熒光法檢測各組細胞漿

3、內(nèi)骨架成分β-肌動蛋白(β-actin)，纖維化標志物α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscle actin，α-SMA)的分布;用實時熒光定量PCR法檢測上皮細胞黏附分子E鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad) mRNA、及細胞內(nèi)α-SMA、整合素連接激酶(Integrin-linked kinase，ILK)、纖維黏連蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)、Ⅰ型膠原蛋白(CollagenⅠ，Col-Ⅰ)的mRNA的表達;用

4、ELISA法檢測各組細胞上清液中FN及Col-Ⅰ蛋白的分泌量。
　　 結果:
　　 (1) MTT法選取的合適藥物濃度:10％、20％、30％溫莪術含藥血清組吸光度值較模型組出現(xiàn)升高的趨勢(P＜0.05)，但是較之20％溫莪術含藥血清組，30％溫莪術含藥血清組吸光值有所下降，故選用20％溫莪術含藥血清做為高劑量組，10％溫莪術含藥血清做為中劑量組，5％溫莪術含藥血清做為低劑量組。
　　 (2)細胞形態(tài)學改變:正常

5、組細胞形態(tài)為鋪路石樣，為典型的上皮細胞樣形態(tài)，而模型組細胞出現(xiàn)肥大拉長，呈梭形，溫莪術各濃度組細胞形態(tài)較模型組改善，成纖維細胞樣改變的數(shù)量減少。
　　 (3)溫莪術對細胞骨架蛋白β-actin的影響:與正常組細胞比較，模型組細胞可見束狀纖維樣結構呈放射狀排列，相互交叉成網(wǎng)狀，溫莪術給藥組細胞可見明顯減少，β-actin表達量降低(P＜0.05)，溫莪術中濃度組與鹽酸洛汀新組作用相似。
　　 (4)溫莪術對α-SMA蛋白及

6、mRNA表達的影響:正常組細胞幾乎沒有α-SMA蛋白及mRNA的表達，而模型組α-SMA的表達明顯升高(P＜0.05)，胞漿內(nèi)可見大量熒光染色陽性，α-SMAm RNA表達增多;和模型組比較，溫莪術組細胞可見α-SMA蛋白及mRNA表達顯著減少(P＜0.05)，溫莪術中濃度組與鹽酸洛汀新組相似，溫莪術組與鹽酸洛汀新組作用相似。
　　 (5)溫莪術對E-cadherin mRNA表達的影響:與正常對照組比較，模型組細胞E-cadh

7、erin mRNA的表達量顯著減少(P＜0.05)，而溫莪術給藥組E-cadherinmRNA的表達則較模型組增多(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學意義，溫莪術高濃度組與鹽酸洛汀新組作用相似。
　　 (6)溫莪術對ILK mRNA表達的影響:與正常對照組比較，模型組細胞ILKmRNA的表達量顯著減少(P＜0.05)，而溫莪術給藥組ILK mRNA的表達則較模型組增多(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學意義，溫莪術高濃度組與鹽酸洛汀新組作用相似

8、。
　　 (7)溫莪術對細胞外FN蛋白分泌及細胞內(nèi)FN mRNA表達的影響:與正常對照組比較，模型組細胞FN蛋白分泌及FN mRNA表達顯著減少(P＜0.05)，而溫莪術給藥組FN蛋白分泌及FN mRNA表達則較模型組增多(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學意義，溫莪術組與鹽酸洛汀新組作用相似。
　　 (8)溫莪術對細胞外Col-Ⅰ蛋白分泌及細胞內(nèi)Col-Ⅰ mRNA表達的影響:與正常對照組比較，模型組細胞Col-Ⅰ蛋白分泌及C

9、ol-Ⅰ mRNA表達顯著減少(P＜0.05)，而溫莪術給藥組Col-Ⅰ蛋白分泌及Col-ⅠmRNA表達則較模型組增多(P＜0.05)，溫莪術高濃度組與鹽酸洛汀新組作用相似。
　　 結論:
　　 1、10ng/mL TGF-β1成功建立體外大鼠腎小管上皮細胞轉分化細胞模型;
　　 2、在腎小管上皮細胞轉分化的模型中，細胞骨架結構β-actin分布改變，胞漿中可見束狀纖維樣結構呈放射狀排列，上皮細胞標志E-cadh

10、erin的表達下降，纖維化相關蛋白α-SMA、ILK表達上升，細胞外基質(zhì)FN、Col-Ⅰ分泌增多，NRK-52E發(fā)生成纖維樣改變。
　　 3、溫莪術可在一定程度內(nèi)抑制腎小管上皮細胞轉分化的發(fā)生，較之模型組細胞，溫莪術給藥組細胞骨架結構β-actin在胞漿中的束狀纖維樣結構減少，上皮細胞標志E-cadherin的表達增多，纖維化相關蛋白α-SMA、ILK表達下降，細胞外基質(zhì)FN、Col-Ⅰ分泌減少，這也可能是溫莪術發(fā)揮作用的主要機