粟酒裂殖酵母DJ-1同源蛋白功能研究及PPR蛋白缺失引起的細胞絮凝與凋亡的機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文由兩部分工作組成,第一部分是對粟酒裂殖酵母DJ-1同源蛋白的功能進行的研究,第二部分是對PPR蛋白(pentatrieopeptide repeat proteins)的缺失引起的細胞絮凝與細胞凋亡的機制進行的研究。
  帕金森病相關蛋白DJ-1參與了細胞中眾多不同的加工過程,包括羰基化合物的脫毒反應,細胞自噬以及氧化應激等。DJ-1同源蛋白在生物界的分布非常的廣泛,它的眾多參與各種不同應激反應的同源蛋白共同組成了一個蛋白超家

2、族。粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)含有六個DJ-1同源蛋白,我們將其分別命名為Hsp3101-Hsp3105和Sdj1。在本研究的前半部分工作中,我們對S.pombe的DJ-1同源蛋白的功能及其在穩(wěn)定期受到的調控進行研究。本部分所開展的工作和研究結果有:
  (1)通過檢測高表達酵母J-1同源基因對野生型S.pombe以及ΔSpglo1的α-羰基化合物抗逆性影響,我們發(fā)現(xiàn)S.pombe的Hsp3

3、101,Hsp3102以及Sdj1,S.cerevisiae的HSP31具有乙二醛酶Ⅲ的活性,高表達時能夠增強野生型S.pombe以及ΔSpglo1應對丙酮醛和乙二醛的能力。
  (2)通過Western blot技術,我們檢測了hsp3101-hsp3105缺陷菌以及sdj1缺陷菌中CFP-Atg8的加工情況,同時利用熒光顯微鏡觀察了缺陷菌中GFP-Atg8在自噬體組裝位點(PAS)處的定位情況,我們發(fā)現(xiàn)S.pombe的Hsp3

4、102,Hsp3104,Hsp3105和Sdj1蛋白與細胞的自噬反應有關聯(lián),并且S.pombe所有的DJ-1同源蛋白都參與了Atg8蛋白在自噬體組裝位點PAS處的正常定位。
  (3)以sty1缺陷菌和atf1缺陷菌為載體,通過Western blot技術檢測S.pombe的DJ-1同源蛋白在穩(wěn)定期的豐度,發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定期表達的S.pombe DJ-1同源蛋白在sty1缺陷菌和atf1缺陷菌的含量受到了明顯的影響,說明S.pombe的D

5、J-1同源蛋白在穩(wěn)定期的表達受到了Sty1和Atf1的調控。
  PPR蛋白是最近發(fā)現(xiàn)的一類廣泛存在于真核生物界,調控線粒體和葉綠體基因表達的RNA結合蛋白。主要功能是參與細胞器RNA的剪接、編輯、切割、穩(wěn)定或者是調控其翻譯。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)敲除了S.pombe的ppr基因會導致缺陷菌出現(xiàn)細胞絮凝和細胞凋亡現(xiàn)象。通過qRT-PCR檢測缺陷菌的絮凝因子以及細胞壁重構酶結構基因的表達情況,發(fā)現(xiàn)ppr3,ppr4,ppr6,ppr1

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