1、背景:骨質(zhì)疏松癥是臨床常見的一種骨骼退行性疾病，它的發(fā)生是因為骨重建的動態(tài)平衡被打破。雌激素能夠通過復(fù)雜的分子機制影響成骨細(xì)胞的功能，促進骨改建。FGF/FGFR信號為成骨過程當(dāng)中的重要調(diào)節(jié)因子，對骨骼的發(fā)育、形成和修復(fù)過程具有重要的生理意義，成纖維細(xì)胞生長因子Ⅰ型受體(FGFR1)是出生后成骨細(xì)胞表達(dá)的主要FGFRs。P90核糖體S6蛋白激酶(RSK2)是位于Raf-MEK-ERK級聯(lián)信號通路下游的一類具有重要作用的效應(yīng)分子，可以通過

2、多種細(xì)胞內(nèi)蛋白的磷酸化過程調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂、分化和存活等。前期實驗中，應(yīng)用17-β雌二醇（濃度為10-8mol/L）作用于MC3T3-E1細(xì)胞株，培養(yǎng)5天后，通過全基因組基因芯片技術(shù)，發(fā)現(xiàn)FGFR1和RSK2的基因表達(dá)明顯增強，提示FGFR1和RSK2在成骨細(xì)胞對雌激素的反應(yīng)信號調(diào)控中可能起重要作用。因此，進一步研究雌激素作用下FGFR1與RSK2間的相互聯(lián)系及通訊對成骨細(xì)胞的影響和作用機制，可以揭示骨形成和改建的發(fā)生機理，同時也為牙槽骨

3、的改建塑形，骨質(zhì)疏松癥及相關(guān)骨疾病的治療提供重要靶點。
　　目的:本實驗擬采用特異性FGFR1受體抑制劑PD166866，對體外培養(yǎng)的MC3T3-E1細(xì)胞株施加雌激素，結(jié)合MTT、ALP、Westernblot和RT-PCR檢測，以研究雌激素作用下FGFR1對成骨細(xì)胞增殖分化的作用，通過檢測通路中RSK2因子的表達(dá)，確定雌激素是否通過FGFR1作用于RSK2影響成骨細(xì)胞的增殖分化，從而針對這個機制和過程制定有效的應(yīng)對策略，為相關(guān)骨

4、疾病的治療提供新思路。
　　方法:1.小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1細(xì)胞系體外培養(yǎng)。
　　2.實驗分為四組，即空白對照組，F(xiàn)GFR1抑制劑（5×10-8mol/L的PD166866）組，雌激素（10-8mol/L的17-β雌二醇）組，雌激素（10-8mol/L的17-β雌二醇）+FGFR1抑制劑（5×10-8mol/L的PD166866）組。
　　3.應(yīng)用MTT技術(shù)和ALP技術(shù)分別檢測四組細(xì)胞的增殖能力和分化活性。

5、>　　4.應(yīng)用免疫印跡技術(shù)(Western blot)分別檢測四組細(xì)胞的RSK2及其磷酸化水平和OCN的表達(dá)水平。
　　5.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對Runx2 mRNA的表達(dá)水平進行檢測。
　　6.采用SPSS17.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:1.MC3T3-E1細(xì)胞生長狀況良好。
　　2.細(xì)胞增殖情況(MTT):與空白對照組相比，雌激素組細(xì)胞增殖活性增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);加入FGFR1抑制

6、劑后，細(xì)胞增殖活性降低（P＜0.05）。
　　3.細(xì)胞分化情況（堿性磷酸酶ALP）:與空白對照組相比，雌激素可增加細(xì)胞堿性磷酸酶的表達(dá)（P＜0.05）;加入FGFR1抑制劑后，雌激素組和非雌激素組的堿性磷酸酶活性均增加（P＜0.05）。
　　4.Westernblot免疫印跡實驗檢測RSK2、p-RSK2及OCN蛋白表達(dá)水平:結(jié)果顯示四個組的RSK2表達(dá)水平?jīng)]有顯著性差異(P＞0.05);17-β雌二醇作用下RSK2的磷酸化

7、水平及OCN的表達(dá)明顯增加(P＜0.05);FGFR1抑制劑組的RSK2的磷酸化水平及OCN的表達(dá)也增加(P＜0.05);17-β雌二醇+FGFR1抑制劑聯(lián)合刺激組與僅加入FGFR1抑制劑或雌激素組相比，RSK2的磷酸化水平及OCN蛋白表達(dá)量上調(diào)，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.成骨分化相關(guān)基因Runx2的mRNA表達(dá)水平:結(jié)果顯示，17-β雌二醇作用下，Runx2的mRNA表達(dá)上調(diào)，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;加入FG

8、FR1抑制劑后，Runx2 mRNA表達(dá)水平也升高（P＜0.05）;17-β雌二醇+FGFR1抑制劑聯(lián)合刺激組與僅加入FGFR1抑制劑或雌激素組相比，Runx2mRNA表達(dá)增加，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:1.FGFR1參與了雌激素作用下成骨細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)。FGFR1信號可以促進成骨細(xì)胞的增殖，抑制分化。
　　2.抑制FGFR1可引起RSK2磷酸化水平增高，雌激素通過FGFR1與RSK2調(diào)控成骨作用的機制還有待