1、目的：
　　為了研究黃芩素對人肺癌細胞A549耐順鉑株（A549/CDDP）的順鉑細胞毒性的影響并探討其可能的作用機制。
　　方法：
　　1. MTT法測定腫瘤細胞的增殖能力。
　　2.采用Annexin V/PI雙染法檢測A549/CDDP的細胞凋亡情況。
　　3. Transwell法檢測A549和A549/CDDP細胞侵襲、遷移能力的變化。
　　4.采用westen blot法測定各蛋白E-ca

2、dherin、Vimentin、p-Akt、Akt、p65、IκBα、c-IAP1, c-IAP2, survivin和Bcl-xL的表達水平。
　　5. siRNA沉默A549/CDDP細胞中p65的表達，降低NF-κB的活性。
　　6.采用腫瘤動物模型觀察黃芩素對順鉑細胞毒性的影響。
　　7.統(tǒng)計學：本實驗所有數據均使用SPSS16.0軟件進行q檢驗。
　　結果：
　　1.黃芩素通過誘導細胞凋亡增強順鉑

3、的細胞毒性作用
　　黃芩素濃度為200μM時對A549/CDDP細胞有抑制作用，選取100μM黃芩素與順鉑合用后測細胞存活率發(fā)現，黃芩素能夠明顯增強順鉑對A549/CDDP的細胞毒性。Annexin V/PI雙染法檢測后發(fā)現：黃芩素與順鉑合用后能夠明顯增加細胞的凋亡。
　　2.動物模型中，黃芩素可增強順鉑細胞毒性
　　腫瘤動物模型建立后，我們的結果發(fā)現，與單用順鉑或者黃芩素組相比較，黃芩素與順鉑聯(lián)合用藥能夠顯著降低裸鼠

4、體內腫瘤細胞的增長。
　　3. A549/CDDP細胞發(fā)生了EMT
　　結果顯示：與 A549細胞相比，A549/CDDP細胞形態(tài)發(fā)生了 EMT轉變， E-cadherin表達明顯降低，Vimentin表達顯著上升，A549/CDDP細胞的侵襲、遷移能力明顯提高。說明A549耐順鉑株發(fā)生了EMT。
　　4.黃芩素可逆轉A549/CDDP細胞的EMT
　　用黃芩素處理 A549/CDDP細胞后，我們的結果發(fā)現：黃芩

5、素可顯著降低A549/CDDP細胞的侵襲、遷移能力，并且能上調A549/CDDP細胞中E-cadherin的表達，降低Vimentin的蛋白表達水平，逆轉A549/CDDP細胞EMT。
　　5.黃芩素逆轉A549/CDDP細胞EMT與PI3K/Akt信號通路有關
　　實驗結果顯示：與A549細胞相比，A549/CDDP細胞中p-Akt的表達明顯增強，使用LY294002處理A549/CDDP后可抑制p-Akt的表達，阻斷PI

6、3K/Akt信號通路,且能上調E-cadherin的表達，降低Vimentin的表達，降低A549/CDDP細胞的侵襲、遷移能力，并增強順鉑的細胞毒性。而黃芩素隨著濃度的增加可逐漸降低p-Akt的表達水平，這些結果說明在A549/CDDP細胞中黃芩素可以抑制PI3K/Akt信號通路的活性，從而逆轉EMT，增強順鉑的細胞毒性作用。
　　6.黃芩素逆轉EMT、增強順鉑細胞毒性與抑制PI3K/Akt/NF-κB信號通路有關
　　實

7、驗結果證明：與A549細胞相比，A549/CDDP細胞中p65表達增高，IκBα的表達下降。siRNA沉默p65蛋白表達后發(fā)現，E-cadherin的表達增加而Vimentin表達降低，且細胞的侵襲、遷移能力降低，MTT法測得順鉑的細胞毒性增加，說明降低NF-κB活性可逆轉EMT。而western blot顯示黃芩素可降低p65的表達水平同時上調IκBα的表達水平，而LY294002阻斷信號通路后也可降低NF-κB的活性。因此我們得出黃

8、芩素抑制 EMT，增強順鉑的細胞毒性的能力可能是通過調控PI3K/Akt/NF-κB信號通路來實現的。
　　7.黃芩素能夠抑制NF-κB下游靶蛋白的活性
　　western blot檢測結果顯示：黃芩素能夠明顯降低NF-κB所調控的靶蛋白包括抗凋亡蛋白c-IAP1, c-IAP2, survivin和Bcl-xL的表達。
　　結論：黃芩素能夠在體內及體外增加A549/CDDP細胞對順鉑的敏感性，其機制可能是通過阻斷細胞