1、目的:miniSTR技術(shù)是當(dāng)今法醫(yī)物證學(xué)研究高度降解檢材的熱點(diǎn)，本課題旨在研究3個(gè)miniSTR基因座(DlOS1248，D14S1434和D22S1045)在中國成都漢族人群中的特征，構(gòu)建復(fù)合擴(kuò)增熒光標(biāo)記檢測系統(tǒng)及評(píng)估其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值。 方法:使用Coble的引物，在中國成都200個(gè)無關(guān)漢族個(gè)體中進(jìn)行3個(gè)miniSTR基因座PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物使用聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，銀染法顯色，以獲得群體基本數(shù)據(jù)。建立這3個(gè)miniSTR

2、基因座的復(fù)合擴(kuò)增體系，利用熒光復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增，ABI PRISM<'R>310基因分析儀對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測，GeneScan3.7及Geno Typer3.7軟件分析結(jié)果；并按照美國DNA分析方法技術(shù)工作組(Scientific Working Group on DNAAnalysis Methods，SWGDAM)的指導(dǎo)方案進(jìn)行法醫(yī)學(xué)應(yīng)用性研究，用不同的組織、不同的介質(zhì)、常見的動(dòng)物對(duì)復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)進(jìn)行測試，用實(shí)際案例進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)

3、果:獲得了3個(gè)miniSTR基因座的基因頻率、個(gè)人識(shí)別率、非父排除率等群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)，在D10S1248基因座觀察到了新的等位基因8，在D14S1434基因座發(fā)現(xiàn)了不同的重復(fù)序列；通過采用復(fù)合擴(kuò)增方法，建立了D10S1248、D14S1434和D22S1045熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系。法醫(yī)應(yīng)用性研究證明該體系與12種常見動(dòng)物和微生物無交叉反應(yīng)；可對(duì)2ng的微量DNA模板分型；對(duì)同一個(gè)體的不同組織檢測結(jié)果一致；能夠?qū)ΤＲ娊橘|(zhì)上的斑痕檢材正確分

4、型；對(duì)放置20年的陳舊血痕仍然可分型；應(yīng)用于案例檢測，結(jié)果與鑒定結(jié)論一致。 結(jié)論:3個(gè)miniSTR遺傳標(biāo)記(D10S1248，D14S1434和D22S1045)在中國人群中有較高的多態(tài)性及較高的個(gè)人識(shí)別率，在不同的人群中存在遺傳差異。建立了這3個(gè)miniSTR基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系miniplex，該體系可運(yùn)用于熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳激光自動(dòng)分析檢測平臺(tái)，具備法醫(yī)學(xué)實(shí)踐應(yīng)用的可行性，為分析DNA降解檢材提供了一個(gè)有效的途徑