1、研究目的:
　　 近期國內外研究顯示，抗磷脂綜合征(antiphospholipidsyndrome，APS)血栓形成的病理機制與血清中高滴度的抗磷脂抗體密切相關，尤其是針對β2GPI的抗體，但是有關其血栓形成的機制仍未闡明。本課題組前期研究揭示，在anti-β2GPI/β2GPI復合物刺激人單核細胞株THP-1表達組織因子(tissuefactor，TF)的過程中，跨膜蛋白Toll樣受體4(Toll-likereceptor4

2、，TLR4)及其信號轉導分子能夠被誘導表達并參與細胞的激活作用，并且部分依賴膜聯(lián)蛋白Ⅱ(AnnexinA2，ANX2)，成為抗磷脂綜合征(antiphospholipidsyndrome，APS)血栓形成的機制之一。本論文重點探討TLR4引發(fā)的信號通路中關鍵分子——核因子κB(nuclearfactorkappaB，NF-κB)和激活蛋白-1(activatorprotein，AP-1)在此過程中的作用及可能的調節(jié)機制。
　　

3、研究方法:
　　 (1)利用實時定量PCR(Real-timequantitativePCR，RT-qPCR)檢測anti-β2GPI/β2GPI復合物誘導THP-1細胞或人外周血單核細胞TFmRNA的表達，采用試劑盒檢測TF活性。
　　 (2)Westernblotting檢測anti-β2GPI/β2GPI復合物刺激THP-1細胞或人外周血單核細胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1表達及其磷酸化情況，并檢測ant

4、i-β2GPI/β2GPI刺激的時效性和特異性。
　　 (3)采用PDTC（NF-κB抑制劑）和姜黃素（AP-1抑制劑）預處理THP-1細胞，觀察其對anti-β2GPI/β2GPI復合物誘導THP-1細胞表達TF的干預作用。
　　 (4)采用MAPKs抑制劑SB203580(p38抑制劑)、U0126(ERK1/2抑制劑)、SP600125(JNK1/2抑制劑)預處理THP-1細胞，觀察其對anti-β2GPI/β2G

5、PI復合物誘導THP-1細胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1磷酸化的干預作用。
　　 (5)采用TLR4特異性抑制劑TAk-242預處理THP-1細胞，觀察其對anti-β2GPI/β2GPI復合物誘導THP-1細胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1磷酸化的干預作用。
　　 研究結果:
　　 (1)Anti-β2GPI/β2GPI復合物（100μg/mL）能顯著增加THP-1細胞及人外周血單核細胞TFm

6、RNA水平及TF活性，與對照組比較差異顯著(p＜0.05)。
　　 (2)Anti-β2GPI/β2GPI復合物（100μg/mL）能顯著增加THP-1細胞或人外周血單核細胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1磷酸化水平，并顯示時間效應，分別于刺激90min和60min時磷酸化最強。
　　 (3)PDTC(20μM)和姜黃素(25μM)分別單獨預處理THP-1細胞，均能明顯抑制anti-β2GPI/β2GPI對TF表達

7、的刺激效應。而兩者聯(lián)合使用時沒有疊加效應。
　　 (4)MAPKs抑制劑[SB203580(10μM)、U0126(5μM)、SP600125(90nM)]分別單獨或者兩兩聯(lián)合預處理THP-1細胞，單獨使用時均未能顯著抑制anti-β2GPI/β2GPI或LPS對NF-κBp65和c-Jun/AP-1的磷酸化;而任意兩種抑制劑組合[SB203580/U0126、SB203580/SP600125、U0126/SP600125]均

8、能顯著抑制anti-β2GPI/β2GPI或LPS對NF-κBp65的磷酸化，但只有SB203580/SP600125和U0126/SP600125兩組能顯著抑制c-Jun/AP-1的磷酸化。
　　 (5)TLR4抑制劑TAK-242(5μM)未能抑制anti-ββ2GPI/β2GPI對THP-1細胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1磷酸化的刺激效應，但是能明顯降低LPS對THP-1細胞NF-κBp65和c-Jun/AP-1

9、的磷酸化。
　　 結論:
　　 (1)Anti-β2GPI/β2GPI刺激單核細胞株THP-1或人外周血單核細胞后，細胞內的核轉錄因子NF-κB和AP-1被誘導發(fā)生磷酸化，最終促進細胞表達TF，可能是APS血栓形成的重要分子機制之一。
　　 (2)在anti-β2GPI/β2GPI誘導THP-1細胞或人外周血單核細胞表達TF所涉及的信號轉導通路中，NF-κB和AP-1作為關鍵分子而發(fā)揮作用，TLR4及MAPKs為