1、目的：
　　本研究擬檢測RUNX3在食管癌患者腫瘤組織及相應細胞系中的表達，并探討其與患者臨床病例參數(shù)的相關性，同時分析RUNX3和Akt1表達的變化對順鉑作用后的食管癌細胞生物學行為的影響，探究RUNX3逆轉食管癌細胞順鉑耐藥的相關機制，旨在為食管癌的臨床診斷以及靶向治療提供可靠依據(jù)。
　　方法：
　　(1)采集103例2009年1月～2012年1月期間就診于山東大學附屬醫(yī)院胸外科行食管鱗狀細胞癌(Ⅱa-Ⅲb期)切除

2、手術患者癌組織及相應癌旁正常組織，熒光定量PCR檢測RUNX3 mRNA表達，免疫組化法檢測RUNX3和Akt1蛋白的表達，分析RUNX3與患者化療耐藥和臨床病例資料的相關性，分析RUNX3與Akt1的相關性。
　　(2)構建攜帶有RUNX3全基因或siAkt1慢病毒載體，包裝出病毒后感染ESCC細胞系，熒光定量PCR和western blot檢測RUNX3的表達;CCK-8實驗檢測細胞增殖活性;流式細胞術檢測細胞凋亡和細胞周期;

3、Hoechst染色實驗檢測細胞凋亡率;western blot檢測Akt1、p-Akt1、Bcl-2、Bcl-xl、CyclinD1、P21、Bax蛋白的表達。
　　(3)將ESCC細胞中表達RUNX3及相應對照組細胞經(jīng)皮下注射裸鼠，隨后經(jīng)腹膜內注射順鉑，比較各組小鼠的腫瘤大小抑制腫瘤抑制率。
　　結果：
　　(1)一般資料分析結果表明，男性患者與女性患者相比，RUNX3的低表達率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);在小

4、于56歲的食管鱗狀細胞癌患者中，RUNX3的低表達率與大于56歲患者相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);在腫瘤浸潤程度為T1～T2期的患者當中，RUNX3呈低表達的患者比例明顯低于T3～T4期患者(P＜0.05);在臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者當中，RUNX3呈低表達的患者比例明顯低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P＜0.05);在有淋巴結轉移的患者當中，RUNX3呈低表達的患者比例明顯高于無淋巴結轉移的患者(P＜0.05)。在化療敏感的食管鱗狀細胞癌患

5、者癌組織中RUNX3 mRNA及相應蛋白的表達水平明顯高于化療不敏感者(P＜0.05)，在未接受輔助化療的患者其癌組織中RUNX3 mRNA及相應蛋白的表達水平明顯高于術前接受過輔助化療者(P＜0.05)。在RUNX3表達呈陽性的組織中，Akt1的表達量明顯降低(P＜0.05);在RUNX3表達為陰性的組織中，Akt1的表達量則明顯增高(P＜0.05); RUNX3和Akt1表達呈負相關（r=-0.296，p=0.0042＜0.01）。

6、
　　(2)順鉑耐藥的Eca109和TE-1細胞中RUNX3 mRNA和蛋白的表達水平明顯低于非耐藥Eca109和TE-1細胞(P＜0.01)。Eca-109 PR R3和Eca-109 PR R3細胞中RUNX3 mRNA和蛋白的表達水平均明顯高于Eca-109 PR vector和TE-1PR vector細胞(P＜0.01)。隨著順鉑濃度的增大，Eca-109 PR vector組和Eca-109 PR R3組、TE-1 P

7、R vector組和TE-1 PR R3組的細胞活性均逐漸降低，呈劑量依賴性，其中當順鉑濃度為100μg/mL時細胞活性最低;Eca-109 PR R3組和TE-1 PR R3組細胞各濃度時的活性明顯低于TE-1 PR vector組和TE-1 PR vector組(P＜0.05)。隨著順鉑作用時間的延長，Eca-109 PR vector組和Eca-109 PR R3組、TE-1 PR vector組和TE-1 PR R3組細胞的活性

8、均逐漸增高，呈時間依賴性，其中當順鉑作用后96 h時細胞活性最高;Eca-109 PR R3組各順鉑作用時間點的細胞活性明顯低于Eca-109 PR vector組(P＜0.05)。隨著順鉑作用時間的延長，Eca-109 PR R3組和TE-1 PR R3組組細胞的活性均逐漸增高，呈時間依賴性，其中當順鉑作用后96 h時細胞活性最高;Eca-109 PR R3組和TE-1 PR R3組各順鉑作用時間點的細胞活性明顯低于TE-1 PR v

9、ector組和TE-1 PR vector(P＜0.05)。Eca-109 PR R3組和TE-1PR R3組細胞的IC50濃度明顯低于Eca-109 PR vector組和TE-1 PR vector組(P＜0.05)。Eca-109 PR R3組和TE-1PR R3細胞凋亡數(shù)量明顯高于Eca-109 PR vector組和TE-1 PR vector組(P＜0.01)。Eca-109 PR R3組和TE-1 PR R3組細胞G1期細

10、胞數(shù)量明顯高于Eca-109 PR vector組和TE-1 PR vector組(P＜0.01)，G2/M期細胞數(shù)量明顯少于Eca-109 PR vector組和TE-1PRvector組(P＜0.05)。隨著順鉑濃度的增大，Eca-109 PR vector組和 Eca-109 PR siAkt1組、TE-1 PR vector組和TE-1 PR siAkt1組的細胞活性均逐漸降低，呈劑量依賴性，其中當順鉑濃度為100μg/mL時細

11、胞活性最低;Eca-109 PR siAkt1組和TE-1 PR siAkt1組各濃度的細胞活性明顯低于Eca-109 PR vector和TE-1 PRvector(P＜0.05)。Eca-109 PRsiAkt1組和TE-1 PR siAkt1組細胞的IC50濃度明顯低于Eca-109 PRvector組和TE-1 PR vector組(P＜0.05) Eca-109 PR siAkt1組和TE-1PR siAkt1組細胞凋亡數(shù)量明

12、顯高于Eca-109 PR vector組和TE-1PRvector組(P＜0.01)。Eca-109 PR siAkt1組和TE-1 PR siAkt1組細胞G1期細胞數(shù)量明顯高于Eca-109 PR vector組和TE-1 PR vector組(P＜0.01)，G2/M期細胞數(shù)量明顯少于Eca-109 PR vector組和TE-1 PRvector組(P＜0.05)。Eca-109 PR R3和Eca-109 PR siAkt1

13、組細胞中Akt1、Bcl-2、Bcl-xl、CyclinD1蛋白的表達水平明顯低于Eca-109 PR vector和TE-1 PR vector組(P＜0.05);而Eca-109 PR R3和Eca-109 PR siAkt1組細胞中RUNX3、P21、Bax蛋白的表達水平則明顯高于Eca-109 PR vector和TE-1 PR vector組(P＜0.05)。
　　(3)Eca-109 PR vector組和Eca-10

14、9 PR R3組裸鼠均成瘤，成瘤率為100％。在治療期間各組裸鼠腫痛體積均隨著時間推移不斷增大，但Eea-109 PRR3組裸鼠在第18天后各測量時間點的腫瘤體積均明顯小于Eca-109 PRvector組(P＜0.05)。隨著時間推移，各組裸鼠腫瘤體積抑制率均逐漸增高，但Eca-109 PR R3組裸鼠在各測量時間點的腫瘤體積抑制率均明顯大于Eca-109 PR vector組(P＜0.05)。
　　結論：
　　RUNX3