1、柑橘是人們日常生活中一類重要的水果。但是在其生長期內常常受到螨類的危害。乙螨唑是一種新型的二苯基噁唑啉類手性殺螨劑，被廣泛應用于柑橘螨的卵、幼蟲、成蟲的防治。在實際生產過程中，農藥被施用于田間后，部分殘留于植株表面、果實等部位，部分則進入到土壤或沉積物等生態(tài)環(huán)境中。由于農藥的理化性質及外界環(huán)境的差異，使得不同農藥在植株體內或者生態(tài)環(huán)境中的行為呈現出顯著性差異。殘留在植株體內或者果實中的農藥，經過人體進食后對人體健康產生一定風險。而殘留于

2、土壤等生態(tài)環(huán)境中的農藥則可能對生態(tài)環(huán)境中的非靶標生物產生毒害作用。目前，對于該新型農藥的研究僅僅限于田間降解及對于靶標生物螨類的毒性。因此，本論文針對目前乙螨唑相關信息的缺乏現狀，從對映體水平上研究了乙螨唑在柑橘果實中的降解代謝及其對細胞的毒性和氧化損傷效應。在此基礎上，還研究了乙螨唑對于非靶標生物的毒性作用模式，論文以蚯蚓為模式生物，利用NMR檢測分析技術對不同濃度乙螨唑處理后，蚯蚓體內內源性物質的變化進行了監(jiān)測，明確了相關生物標志物

3、及所影響的代謝路徑。此外，本研究還采用UPLC-QTOF/MS全掃描模式對乙螨唑在柑橘、土壤及蚯蚓體內的代謝產物進行了鑒定，明確了幾種主要代謝產物在三種基質中的相對含量變化情況。最后，通過乙螨唑在柑橘上的最終殘留量及毒理學數據，評估了柑橘果實中乙螨唑殘留對于人體的潛在風險性。
　　本研究主要內容包括：⑴在不同的采樣間隔下，研究了R-乙螨唑和S-乙螨唑在柑橘和土壤中的降解規(guī)律。結果表明，乙螨唑對映體在柑橘和土壤中的降解均存在選擇性。

4、在柑橘基質中，S-乙螨唑總是優(yōu)先于R-乙螨唑降解，造成柑橘基質中R-乙螨唑的富集。在土壤基質中，S-乙螨唑降解速率仍然比R-乙螨唑更快，造成R-乙螨唑在土壤基質中富集。在兩種基質中，對映體的比值（EF）值大于0.5，進一步印證了R-對映體在柑橘和土壤中的持久性。從半衰期來看，R-和 S-乙螨唑在柑橘中的半衰期分別為19.2和10.8 d，在土壤中的半衰期分別為10.2和6.18 d。與其他文獻報道相比，半衰期存在一定差異，造成這種現象的

5、原因與柑橘果實大小差異、自然環(huán)境差異等均有關系。⑵將制備的R-乙螨唑和S-乙螨唑純單體用細胞培養(yǎng)液稀釋成0.01，0.05，0.1，0.5和1.0 mM染毒液。研究24 h染毒后，乙螨唑對映體對于MCF-7癌細胞的細胞活性及氧化損傷的影響。從細胞活性MTT實驗和LDH釋放量結果看出，隨著染毒濃度的增加，經過R-，Rac-及S-乙螨唑處理后的細胞活性均開始下降。在低濃度下，三種形式的乙螨唑處理后，對細胞活性的影響無顯著性差異。但是當濃度逐

6、漸增加時，R-乙螨唑表現出最大的細胞活性抑制率，其次是 Rac-乙螨唑，細胞活性下降最低的為S-乙螨唑；乙螨唑對于細胞的氧化損傷采用ROS含量，CAT和SOD酶活性等指標來評價。結果顯示，和細胞毒性類似，R-乙螨唑誘導的細胞氧化損傷比其對映異構體更高，說明R-乙螨唑對MCF-7細胞的毒性比S-乙螨唑高。⑶將個體均一的蚯蚓暴露于乙螨唑濃度為10,50和100 mg/kg的土壤中后，在暴露的第2 d和第14 d采集蚯蚓樣品，用于NMR檢測分

7、析。從PCA和OPLS-DA分析圖上可以看出，乙螨唑處理組和對照組之間或者不同濃度處理組之間分離效果良好，呈現出明顯的組內聚類現象。通過方差分析（ANOVA）和變量中重要的化合物（VIP）分析，14種蚯蚓內源物包括氨基酸、糖類、生物小分子物質，在乙螨唑處理后，相對含量發(fā)生了顯著性的變化。三甲胺-N-氧化物被認為是乙螨唑處理后的特征性變化物質。通過KEGG數據庫查詢，明確了這些生物標志物相關的體內代謝路徑，即為乙螨唑影響的蚯蚓體內的特征性

8、代謝路徑。⑷用一定量的乙螨唑處理柑橘、土壤和蚯蚓樣品后，在不同的時間間隔采集3種基質樣品。用UPLC-QTOF/MS全掃描模式監(jiān)測乙螨唑在3種基質中的代謝物。乙螨唑暴露第14 d時，在柑橘基質中檢測到4種代謝產物，在土壤基質中檢測到11種代謝產物，在蚯蚓基質中檢測到8種代謝產物。針對幾種主要的、毒性可能較大的代謝產物的變化規(guī)律進行了監(jiān)測。結果表明，大部分的代謝產物隨著暴露時間的增加逐漸下降，而代謝產物M1和M3隨著暴露時間的增加呈現出增

9、加的趨勢，顯示出一定的持久性，應當引起重視。⑸以不同施藥濃度、不同施藥間隔期、不同的施藥次數將乙螨唑制劑噴施于柑橘果實上，設置空白對照組，每個處理重復3次。樣品經過UPLC-MS/MS定量分析后，得到不同的施藥模式下，乙螨唑在柑橘果實中的最大殘留量和平均殘留量。通過相關公式計算得到乙螨唑對于人體的急性風險值和慢性風險值。本研究中，由于乙螨唑的急性劑量參考值（ARfD）值未給出，所以不能計算乙螨唑對于人體的急性風險。不同的施藥劑量、時間間