凹葉厚樸細胞懸浮培養(yǎng)及其次生代謝產物含量研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、凹葉厚樸( Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var. biloba Rehd.et Wils)是我國特有的珍貴樹種。厚樸用途廣,但是資源稀缺。由于人為盲目砍伐,厚樸資源急劇減少,現(xiàn)已被列入國家三級珍稀瀕危保護植物。植物細胞培養(yǎng)被認為是解決資源危機的理想途徑。其特點是在完全人工控制的條件下進行,不受地區(qū)、季節(jié)、土壤及有害生物的影響,且生產周期較短,可通過選擇優(yōu)良培養(yǎng)體系和改善培養(yǎng)條件獲得超過傳統(tǒng)植物栽培

2、所得的代謝產物。本試驗通過對厚樸愈傷組織培養(yǎng)的條件進行優(yōu)化和建立厚樸細胞懸浮體系,并對其次生代謝產物的誘導合成進行研究,為進一步擴大培養(yǎng)生產厚樸藥用成分提供試驗基礎。主要研究結果如下:
  1.通過對基本培養(yǎng)基、外植體、激素濃度及組合進行篩選,找到了最適合厚樸愈傷組織誘導的條件。試驗過程中發(fā)現(xiàn)這三者均對愈傷組織的誘導有顯著的影響。B5、MS、1/2MS三種基本培養(yǎng)基中 B5誘導率最高;頂芽、莖、葉3種外植體均可誘導出愈傷組織,莖段

3、誘導率最高,其愈傷組織誘導率達91.67%,頂芽次之,葉片最低,綜合考慮分析得出,頂芽為最佳外植體;最佳誘導激素組合為3.0 mg· L-12,4-D+1.0 mg· L-16-BA,愈傷組織誘導在90%以上。
  2.將生長旺盛且長勢一致的愈傷組織進行繼代培養(yǎng),探討NAA與6-BA組合濃度對愈傷組織生長的影響。當繼代培養(yǎng)基為B5+2.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-16-BA時,愈傷組織增殖效果最好,增殖倍數(shù)達2.8

4、65倍。當NAA濃度大于3.0 mg·L-1時,會抑制愈傷組織的繼代培養(yǎng);當6-BA濃度為2.0 mg·L-1時,愈傷組織的平均增殖倍數(shù)僅為1.202倍,且生長狀態(tài)較差,顏色深暗,松軟。
  3.以頂芽愈傷組織建立了懸浮系,研究蔗糖濃度、搖床轉速、接種密度及裝液量對細胞生長的影響。研究結果表明,蔗糖濃度為30 g·L-1最適合厚樸細胞生長,最佳搖床轉速為120 r/min,當接種密度為1.0:20時,懸浮細胞增長量最高,最適裝液量

5、為30 mL;
  4.本試驗研究了激素濃度組合、pH值、2種前體物質和光質對細胞生長和總酚含量的影響,研究結果表明,最適合厚樸細胞生長及其次生代謝產物產生的激素組合是:NAA0.5 mg·L-1+2,4-D0.5 mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+KT1.5 mg·L-1;培養(yǎng)厚樸細胞及其次生代謝產物的最佳pH值是pH6.5;D,L,β-苯丙氨酸0.1 mg·L-1+L-苯丙氨酸0.5 mg·L-1的前體組合能夠大大促進

6、細胞的生長和次生代謝產物的積累;黃光最有利于懸浮細胞的生長,但細胞中總酚含量較低,藍光下的細胞干重增長率僅次于黃光試驗組,且總酚含量最高,是對照組的3.19倍,綜合分析得出藍光為培養(yǎng)厚樸懸浮細胞的最佳光質。在激素、pH、前體物質和光質這四個影響因子中,光質對厚樸細胞次生代謝的影響程度較其他三者大,前三者細胞最高總酚含量均在0.200%左右,而在光質試驗中,最高總酚含量能達到0.423%。
  5.細胞的生長曲線呈“S”型,細胞周期

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