1、目的：應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠皮膚挫傷后皮膚和肌肉組織中兩種基因(ICAM-1和NF-κB)mRNA的時(shí)序性表達(dá)規(guī)律，探討這兩種基因mRNA表達(dá)在損傷時(shí)間推斷中的可行性，旨為法醫(yī)實(shí)踐中推斷早期皮膚損傷時(shí)間提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：選取健康成年SD大鼠48只，隨機(jī)分為對(duì)照組(6只)和實(shí)驗(yàn)組(42只)。均實(shí)施麻醉、褪毛后，實(shí)驗(yàn)組大鼠采用自由落體打擊法于右后肢股四頭肌部位造成皮膚挫傷模型，損傷后0.5h、1h、6h、

2、12h、18h、24h、30h七個(gè)時(shí)間點(diǎn)(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只)取挫傷處皮膚及肌肉組織各30mg，置于液氮中保存?zhèn)溆?；?duì)照組大鼠未打擊造傷，其余處理與實(shí)驗(yàn)組相同。以膜吸附技術(shù)為基礎(chǔ)的SV Total RNA提取皮膚和肌肉組織中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈，梯度濃度稀釋cDNA原液分別作每個(gè)基因與內(nèi)參基因(rpL32)相對(duì)定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線；SYBR Green Ⅰ嵌合熒光法實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)ICAM-1和NF-κB mRNA逆轉(zhuǎn)錄合

3、成第一條cDNA鏈的相對(duì)表達(dá)量，分別與損傷時(shí)間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： (1)紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)和Agilent 2100芯片生物分析儀檢測(cè)RNA純度、濃度及完整性較好，均可滿足下一步實(shí)驗(yàn)的要求。 (2)ICAM-1和NF-κB分別與內(nèi)參基因rpL32擴(kuò)增效率一致，說(shuō)明內(nèi)參基因選擇正確，引物設(shè)計(jì)特異性強(qiáng)、反應(yīng)性能良好。 (3)大鼠皮膚挫傷后ICAM-1 mRNA在皮膚組織中的表達(dá)0.5h達(dá)到峰值，24

4、h下降至正常對(duì)照組的7倍隨后繼續(xù)升高；在肌肉組織中于損傷后0.5h表達(dá)顯著增強(qiáng)(P＜0.001)，6h達(dá)到峰值，18h降至最低后再次升高。 (4)NF-κB mRNA在皮膚組織中于損傷后0.5h表達(dá)顯著增強(qiáng)(P＜0.05)，6h出現(xiàn)高峰，18h降至正常對(duì)照組以下，隨后略有回升；肌肉組織中損傷后0.5h表達(dá)顯著增強(qiáng)(P＜0.001)，1h達(dá)到峰值，此后逐漸降低并于18h出現(xiàn)第二次表達(dá)高峰。 結(jié)論：大鼠皮膚挫傷后皮膚和肌肉組