1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是導(dǎo)致乙型肝炎及相關(guān)疾病的主要病因,由于現(xiàn)有臨床藥物的諸多缺陷,從天然提取物中篩選新型的抗HBV藥物,并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行研究是HBV研究的熱點(diǎn)之一。本論文是在前期研究結(jié)果綠茶提取物具有較強(qiáng)的抗乙肝病毒作用的基礎(chǔ)上,利用HBV穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系HepG2.2.15,對(duì)綠茶提取物的抗HBV作用及其機(jī)理進(jìn)行更深一步的研究和探索。
　　 實(shí)驗(yàn)采用MTT法分析了不同濃度梯度的綠茶提取物

2、單體表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、表兒茶素沒(méi)食子酸酯(epicatechin gallate,ECG)、表沒(méi)食子兒茶素(epigallocatechin,EGC)、表兒茶素(epicatechin,EC)、兒茶素(catechin,C)等幾種主要成分對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞的毒性,并在安全濃度范圍內(nèi)分析了這5種單體成分的抗HBV效果,ELISA結(jié)果顯示,EGCG、EGC、ECG

3、和EC對(duì)HBV的抗原表達(dá)都有較強(qiáng)抑制作用,其中EGCG抑制HBsAg和HBeAg效果最強(qiáng),作用9天的抑制效果均能高達(dá)99.9％以上,而EGC和ECG次之,其對(duì)HBsAg和HBeAg表達(dá)的抑制率達(dá)到95％以上,EC對(duì)HBeAg的抑制率接近50％,因此EGCG是我們得出的優(yōu)選成分。
　　 為進(jìn)一步研究EGCG抗HBV的分子作用機(jī)理,實(shí)驗(yàn)采用不同濃度的EGCG對(duì)調(diào)節(jié)HBV轉(zhuǎn)錄和復(fù)制起關(guān)鍵作用的肝富集轉(zhuǎn)錄因子:肝細(xì)胞核因子1(hepat

4、ocyte nuclear factor1,HNF1)、HNF3、HNF4、視黃醇X受體(retinoid X receptor,RXR)、過(guò)氧化物酶增殖激活受體(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)和法尼酯X受體(farnesoid X receptor,FXR)等的表達(dá)進(jìn)行半定量RT-PCR分析。結(jié)果表明,隨著EGCG作用濃度的增加,HNF1α和HNF4α的表達(dá)變化不明顯,

5、HNF3β和PPARα的表達(dá)有較弱的下調(diào)趨勢(shì),而EGCG能夠明顯下調(diào)RXRα和FXRα的表達(dá)量,隨著藥物濃度的增加,抑制作用逐漸增強(qiáng)。通過(guò)用L02細(xì)胞和HepG2細(xì)胞做對(duì)比分析,結(jié)果表明,不同濃度的EGCG對(duì)這兩種細(xì)胞中RXRα的表達(dá)沒(méi)有影響。在沒(méi)有EGCG作用時(shí),三種細(xì)胞中RXRα的表達(dá)量沒(méi)有明顯差異,而FXRα在L02、HepG2、HepG2.2.15三種細(xì)胞中的表達(dá)量依次升高,說(shuō)明HBV基因組的存在上調(diào)了FXRα的表達(dá)。因此,EG