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文檔簡介
1、目的:對中藥EHW分離出的部位進行體外抗乙肝病毒(HBV)篩選,確定其抗HBV有效部位,并研究有效部位的體內保肝作用,為研究和開發(fā)新的抗乙肝藥物提供理論及實驗依據。
方法:1.實驗藥物的提?。翰捎孟到y(tǒng)溶劑提取法對中藥EHW進行提取分離;
2.體外抗HBV的作用:采用MIT法檢測中藥EHW提取物各部位對HBV基因轉染的HepG2.2.15細胞的半數毒性濃度(TC50)和最大無毒濃度(TC0);在最大無毒濃度(TC0)下
2、,采用直接加藥法和血清藥理學法收集不同藥物濃度和不同濃度含藥血清在第4d、第8d和第12d的細胞培養(yǎng)上清液,并采用ELISA法測定上清液HBsAg和HBeAg的滴度。
3.體內保肝作用:以誘導小鼠急性損傷方式進行中藥EHW有效提取物療效的評估,觀察中藥EHW有效提取物對小鼠ALT和AST含量的影響,并觀察肝組織的病理變化。
結果:1.本實驗采用系統(tǒng)溶劑提取法,分離得到總提物(A)、石油醚(B)、乙酸乙酯(C)、正丁醇
3、(D)、95%乙醇(E)、75%乙醇(F)六個部位;
2.體外抗HBV的作用:
?、僦兴嶦HW對HepG2.2.15有一定的細胞毒性,其中,C部位TC50為158.52μg/ml,TC0為71.99μg/ml,F部位TC50為70.61μg/ml,TC0為20.35μg/ml;
?、跓o毒濃度下和不同濃度含藥血清的C和F部位在HepG2.2.15細胞培養(yǎng)中可有效地抑制細胞HBsAg和HBeAg的分泌,抑制作用有明
4、顯的量效和時效反應關系,其中F部位的抑制作用比C部位強。
?、跿I均大于2,為高效低毒的抗HBV藥物;
3.體內保肝作用:
?、貴部位高劑量和中劑量能顯著降低CCl4急性肝損傷小鼠血清ALT、AST活力(P<0.05),低劑量組小鼠血清ALT、AST活力的影響無顯著性影響(P>0.05);
?、贔部位高、中、低劑量組能降低D-氨基半乳糖誘導小鼠急性肝損傷血清ALT活力(P<0.01),提取物F高、中劑量
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