1、本文分析了缺氧對胎羊肝細胞發(fā)育及其RAS機制的影響。本研究分為兩個部分。
　　 第一部分：缺氧對胎羊肝細胞發(fā)育的影響。
　　 目的：研究缺氧對胎羊肝細胞發(fā)育的影響。
　　 方法：采用臍靜脈膠原酶灌注法和Percoll密度梯度離心法分離胎羊肝細胞并原代培養(yǎng),建立肝細胞缺氧損傷模型,即為缺氧組,以原代正常培養(yǎng)的肝細胞為對照組,電鏡下觀察細胞超微結構的改變,用全自動生化分析儀檢測細胞培養(yǎng)液中總蛋白(Total prot

2、ein,TP)、白蛋白(Albumin,ALB)、肌酐(Creatinine,CREA)、尿素氮(Urea nitrogen,BUN)、天冬氨酸轉氨酶(Aspartate transferase,AST)、丙氨酸轉氨酶(Alanine transaminase,ALT)、乳酸脫氫酶(Lactic acid dehydrogenase,LDH)的濃度,用流式細胞儀檢測肝細胞的細胞周期及凋亡的變化。
　　 結果：肝細胞缺氧后電鏡下可

3、見胞質內空泡狀改變,內質網擴張,線粒體腫脹變形,線粒體嵴腫脹斷裂,細胞內可見退行性變；細胞培養(yǎng)上清液中TP、ALB濃度降低(p<0.05),AST、LDH濃度顯著升高(p<0.01),處于S期的細胞比例降低(p<0.05),凋亡細胞比例升高,與對照組比較差異顯著(p<0.05),但CREA、BUN及ALT濃度與對照組比較無明顯改變。
　　 結論：缺氧可導致胎羊肝細胞超微結構發(fā)生一定程度的改變；肝細胞功能顯著降低:肝細胞增殖減少而

4、凋亡增多。
　　 第二部分：缺氧對胎羊肝細胞RAS機制的影響。
　　 目的：研究缺氧對胎羊肝細胞RAS機制的影響。
　　 方法：取正常培養(yǎng)3天(d)的肝細胞,隨機分為六組,分別給予以下處理：⑴正常對照組；⑵對照+AngⅡ(血管緊張素Ⅱ)組；⑶缺氧組；⑷缺氧+AngⅡ組；⑸Losartan+AngⅡ組；⑹PD123319+AngⅡ組；(所加藥物終濃度均為10-6mol/L)。用流式細胞儀檢測肝細胞的細胞周期變化。取

5、正常培養(yǎng)3d的肝細胞,隨機分為四組：①正常對照組；②對照+AⅡ(10-6mol/L)組；③缺氧組；④缺氧+AⅡ(10-6mol/L)組。用流式細胞儀檢測肝細胞凋亡比例,用Western blot檢測肝細胞AT1R及AT2R蛋白的表達。
　　 結果：與正常對照組相比,處于S期的肝細胞比例在缺氧組、對照+AngⅡ組及缺氧+AngⅡ組均明顯下降(p<0.05,p<0.01,p<0.01),而凋亡比例均明顯上升(p<0.05)；缺氧+A

6、ngⅡ組處于S期的肝細胞比例較之缺氧組明顯下降(p<0.05)但與對照+AngⅡ組之間無顯著差異(p>0.05),而其凋亡比例與缺氧組無明顯差異(p>0.05),但較之對照+AngⅡ組明顯上升(p<0.05)；與正常對照組相比,處于S期的肝細胞比例在對照+AngⅡ及Losartan+AngⅡ組均明顯下降(p<0.01),在PD123319+AngⅡ組無顯著差異(p>0.05),與對照+AngⅡ組相比,處于S期的肝細胞比例在Losarta

7、n+AngⅡ組不明顯差異(p>0.05)而在PD123319+AngⅡ組明顯上升(p<0.05)；AT1R蛋白表達在缺氧組及對照+AngⅡ組肝細胞中較之正常組均無顯著改變(p>0.05),而AT2R蛋白在缺氧組肝細胞中較之正常組顯著上調(p<0.05),對照+AngⅡ組肝細胞中較之正常組無明顯改變(p>0.05)。
　　 結論：缺氧和AngⅡ刺激均可使胎羊肝細胞增殖減少而凋亡增多,且與肝細胞AT1受體無關而主要通過與AT2受體結