1、目的:在前期抗菌肽研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合納米脂質(zhì)體技術(shù)，用抗菌肽Ts修飾脂質(zhì)體表面制備具有靶向抗耐藥菌作用的左氧氟沙星脂質(zhì)體，優(yōu)化其制備工藝和處方，并考察其體外抗菌活性。
　　方法:1、選擇紫外分光光度法測(cè)定左氧氟沙星的含量，確定檢測(cè)波長(zhǎng)，并進(jìn)行方法學(xué)考察，采用透析法對(duì)靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體的包封率進(jìn)行測(cè)定，考察其回收率;2、以包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，分別采用了pH梯度法和硫酸銨梯度法制備左氧氟沙星脂質(zhì)體，篩選脂質(zhì)體制備方法;以單因素優(yōu)化法選

2、擇最佳的制備工藝，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)左氧氟沙星脂質(zhì)體制備處方進(jìn)行優(yōu)化;其后用具有靶向作用的Ts修飾脂質(zhì)體，制備靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體;并對(duì)最優(yōu)條件下制備的靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體進(jìn)行理化性質(zhì)和初步穩(wěn)定性的考察;3、通過(guò)激光共聚焦顯微鏡觀察香豆素標(biāo)記的靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體對(duì)標(biāo)準(zhǔn)肺炎克雷伯菌株的靶向性;測(cè)定游離左氧氟沙星、左氧氟沙星與Ts聯(lián)合、非靶向及靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體對(duì)耐藥菌株的MIC，并分析協(xié)同效應(yīng);通過(guò)檢測(cè)對(duì)肺炎克雷伯標(biāo)準(zhǔn)菌株的時(shí)間殺菌活

3、性，藥物攝取實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體的體外抗菌活性;通過(guò)結(jié)晶紫染色和掃描電鏡觀察靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體對(duì)生物膜形成的影響。
　　結(jié)果:紫外分光光度法測(cè)定脂質(zhì)體中左氧氟沙星的含量，290 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，輔料無(wú)干擾，方法簡(jiǎn)便、靈敏，專屬性高;選用透析法測(cè)定脂質(zhì)體的包封率，簡(jiǎn)便易行，可以將脂質(zhì)體與游離藥物有效的分離，回收率高。硫酸銨梯度法制備左氧氟沙星脂質(zhì)體優(yōu)于pH梯度法;硫酸銨梯度法最佳制備工藝條件為:硫酸銨濃度0.2 m

4、ol/L，透析24h形成硫酸銨梯度，孵育載藥溫度60℃，孵育載藥20 min;最佳處方為:磷脂濃度為30mg/mL，磷脂與膽固醇質(zhì)量比為4∶1，藥脂質(zhì)量比為1∶10;采用最佳制備工藝和處方平行制備3批靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體，平均包封率為75.26±1.35％，Ts偶聯(lián)率為68.43±1.45％，平均粒徑為152.5±3.2 nm，多分散指數(shù)(PDI)為0.149±0.02，與非靶向脂質(zhì)體基本無(wú)差異，zeta電位+20.68±1.72 mV

5、，工藝重現(xiàn)性良好，一個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定性良好。靶向脂質(zhì)體MIC值均低于其他劑型，F(xiàn)IC≤0.5，顯示協(xié)同效應(yīng);在同一時(shí)間內(nèi)抑菌數(shù)量最多，時(shí)間殺菌效果顯著;細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)左氧氟沙星的累積量最大;靶向脂質(zhì)體對(duì)生物膜的抑制作用強(qiáng)于單獨(dú)Ts作用。
　　結(jié)論:本課題采用硫酸銨梯度法成功研制了靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體，制備工藝簡(jiǎn)便易行，包封率高，重現(xiàn)性好，性質(zhì)穩(wěn)定;相對(duì)游離劑型和非靶向脂質(zhì)體，靶向左氧氟沙星脂質(zhì)體對(duì)耐藥菌具備更強(qiáng)的抗菌活性，從而可提高療效，降