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文檔簡介
1、目的:研究丙戊酸鈉對人卵巢癌HO8910細胞生長的影響,尋求卵巢癌治療的新途徑。
方法:體外試驗:體外培養(yǎng)卵巢癌細胞株HO8910,分別加入含不同濃度丙戊酸鈉(濃度分別為1.0mmol/L、2.0mmol/L、3.0mmol/L、4.0mmol/L)的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)(實驗組),以常規(guī)培養(yǎng)的HO8910細胞株作為對照組。采用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法、倒置顯微鏡技術、流式細胞術(FCM)及蛋白印跡法(Westernblot)
2、分別檢測各組細胞的細胞增殖能力的變化、細胞形態(tài)學變化、細胞周期及凋亡率的變化、WWOX蛋白和P27蛋白表達水平的變化。體內試驗:建立HO8910細胞裸鼠皮下移植瘤模型,并隨機分組。實驗組給予含0.4%丙戊酸鈉的PBS,對照組給予無菌PBS并常規(guī)飼養(yǎng),觀察兩組裸鼠的生存時間及腫瘤生長情況,并采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)、Western blot分別檢測兩組裸鼠腫瘤組織中WWOXmRNA、P27mRNA及WWOX蛋白和P27蛋白
3、表達水平的變化。
結果:(1)MTT檢測結果顯示:實驗組細胞各濃度的光密度(OD)值分別為:(0.793±0.031)、(0.6842±0.045)、(0.5294±0.057)、(0.3814±0.042),與對照組細胞OD值(0.9052±0.014)相比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且實驗組細胞隨著藥物濃度的增加,不同濃度細胞組間的OD值差異亦均有統(tǒng)計學意義。(2)倒置顯微鏡下觀察可見,對照組細胞生長狀態(tài)良好,隨
4、著藥物濃度的增加,實驗組細胞形態(tài)逐漸變圓、胞質回縮加劇、漂浮細胞逐漸增多。(3)FCM結果顯示:實驗組分別有(55.78±0.79)%、(59.64±0.64)%、(70.32±1.02)%、(76.34±0.96)%的細胞被阻滯于G0/G1期,與對照組細胞(50.2±0.82)%相比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且實驗組細胞隨著藥物濃度的增加,不同濃度細胞組間的G0/G1期細胞阻滯率亦均有差異(P<0.05)。實驗組細胞的凋亡
5、率分別為:(10.39±1.10)%、(29.31±1.19)%、(38.70±1.23)%、(46.96±1.37)%,與對照組細胞(4.4±1.16)%相比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且實驗組細胞隨著藥物濃度的增加,不同濃度細胞組間的凋亡率亦均有差異(P<0.05)。(4)Western blot檢測結果顯示:實驗組細胞WWOX蛋白表達水平分別為:(0.19±0.015)、(0.29±0.037)、(0.46±0.035)
6、、(0.55±0.016),與對照組(0.13±0.032)相比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且實驗組細胞隨著藥物濃度的增加,不同濃度細胞組間的WWOX蛋白表達水平亦均有差異(P<0.05)。實驗組P27蛋白表達水平分別為:(0.18±0.028)、(0.27±0.013)、(0.36±0.032)、(0.46±0.017)與對照組(0.11±0.019)相比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且實驗組細胞隨著藥物濃度的增加,
7、不同濃度細胞組間的P27蛋白表達水平亦均有差異(P<0.05)。(5)裸鼠體內實驗表明,實驗組裸鼠的生存時間及腫瘤平均體積分別為:(47.12±0.73)天、(1264.59±24.83)mm3與對照組分別為:(34.58±0.46)天、(2155.62±73.38)mm3相比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。RT-PCR檢測結果顯示,實驗組WWOX mRNA及P27mRNA的表達水平分別為:0.305±0.015、0.926±0.
8、034,其與對照組(分別為:0.193±0.056、0.702±0.047)相比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Western blot檢測結果顯示,實驗組WWOX蛋白及P27蛋白的表達水平分別為:0.46±0.065、0.394±0.018,其與對照組(分別為:0.15±0.025、0.20±0.067)相比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結論:丙戊酸鈉能夠抑制HO8910細胞的增殖、干擾其細胞周期并促進HO8
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