1、第一部分：PLCε特異性shRNA對人膀胱癌BIU-87細胞體外增殖效應的實驗研究
　　 目的：探討PLCε特異性shRNA對人膀胱癌BIU-87細胞體外增殖效應的影響。
　　 方法：通過真核細胞轉染技術將pGenesil-PLCε重組質粒轉染BIU-87細胞，并同時設轉染pGenesil-NP重組質粒細胞和轉染生理鹽水細胞分別作為陰性對照組和空白對照組，G418篩選陽性克隆細胞，單克隆挑選，擴大培養(yǎng)，RT-PCR及We

2、stern blot法檢測PLCε mRNA和蛋白表達，MTT法檢測細胞增殖能力的改變，流式細胞法檢測細胞的周期分布。
　　 結果：獲得穩(wěn)定表達PLCε-shRNA的陽性克隆BIU-87細胞，克隆細胞PLCε mRNA和蛋白表達抑制率為46.65％和35.68％，G0/G1期細胞增多，G2/M期細胞減少，細胞增殖受到明顯抑制。
　　 結論：pGenesil-PLCε重組質?？捎行С聊珺IU-87細胞PLCεmRNA和蛋白

3、表達，并使細胞周期阻滯于G0/G1期，延緩細胞生長，從而抑制細胞增殖。
　　 第二部分：PLCε特異性shRNA對人膀胱癌BIU-87細胞體內增殖效應的實驗研究
　　 目的：探討PLCε特異性shRNA對人膀胱癌BIU-87細胞體內增殖效應的影響，并研究其相關機制。
　　 方法：將第一部分獲得的穩(wěn)定轉染細胞分別接種于裸鼠皮下建立人膀胱癌裸鼠移植瘤模型，相對應的分為實驗組、陰性對照組以及空白對照組，監(jiān)測移植瘤體積，

4、稱移植瘤重量，免疫組織化學法檢測移植瘤組織cyclinD1蛋白表達。
　　 結果：實驗組裸鼠移植瘤生長緩慢，移植瘤的體積和重量都明顯小于對照組（p<0.01），抑瘤率為71.95％，實驗組移植瘤cyclinD1蛋白表達受到抑制。
　　 結論：PLCε基因沉默后可抑制裸鼠移植瘤的生長，PLCε的這些作用可能和下調cyclin D1蛋白的表達有關。
　　 第三部分：PLCε特異性shRNA對人膀胱癌BIU-87細胞裸

5、鼠移植瘤中Bcl-2及Bax蛋白表達水平的影響
　　 目的：探討應用短發(fā)夾RNA干擾技術沉默PLCε基因對人膀胱癌移植瘤生長及凋亡相關蛋白Bcl-2和Bax蛋白表達的影響。
　　 方法：人膀胱癌BIU-87細胞種植于裸鼠皮下，待移植瘤體積達40mm3左右時，在腫瘤部位分別直接注射PLCε特異性shRNA表達質粒、陰性對照質粒以及0.9％氯化鈉溶液；觀察腫瘤體積的變化情況，30 d后處死全部裸鼠，取瘤組織，稱瘤質量；瘤組織

6、制備病理切片，HE染色觀察細胞形態(tài)的變化；RT-PCR鑒定瘤組織中PLCε mRNA的表達；Western印跡法檢測瘤組織中PLCε、Bcl-2、Bax、p-Akt1/Akt1和p-Bad/Bad蛋白的表達。
　　 結果：PLCε-shRNA組小鼠移植瘤生長明顯緩慢，瘤組織體積和質量均明顯小于對照組；HE染色結果顯示，瘤組織中出現(xiàn)細胞核固縮、裂碎等凋亡征象；RT-PCR檢測結果顯示，PLCεmRNA表達明顯降低（P<0.05）；