1、本文研究了抗轉鐵蛋白受體單鏈抗體及其雙價抗體(BsFv)的構建，表達及其與細胞結合的活性與特異性鑒定。 方法 1.通過酶切與亞克隆構建抗轉鐵蛋白受體單鏈抗體(scFv)； 2.以抗轉鐵蛋白受體scFv為模板，設計引物引入中間連接肽(G4S)及酶切位點AscI，通過PCR方法擴增出兩個scFv片段，將其連接，并克隆至原核表達載體pAB1，將其轉化大腸桿菌TG1，挑取單克隆細菌進行擴增，提取質粒酶切、測序鑒定；

2、 3.IPTG誘導單鏈抗體及其雙價抗體表達，Ni-NTA層析柱純化抗體，收集純化產物經SDS-PAGE分析，Westernblot鑒定； 4.通過FCM測定純化單鏈抗體及其雙價抗體與細胞結合特異性與活性。 結果 1.隨機挑選轉化板上的菌落提取質粒，SfiI、NotI酶切后瓊脂糖凝膠電泳鑒定，可見一條約750bp和1500bp的陽性條帶，分別與單鏈抗體和雙價抗體基因大小理論值符合。雙價抗體測序結果與原單鏈抗體以及

3、PCR引物比對正確。證明抗TfR單鏈抗體和雙價抗體構建成功，并均已克隆至分泌性表達載體pAB1中； 2.IPTG誘導單鏈抗體及其雙價抗體表達，可溶性蛋白純化后經SDS-PAGE分析，Westernblot檢測，可見約30KD和60KD大小的條帶，分別與單鏈抗體和雙價抗體理論值一致； 3.將純化的單鏈抗體，雙價抗體分別與K562，HepG2，靜止外周血淋巴細胞進行結合，FCM檢測與細胞結合的陽性率結果顯示，雙價抗體與K56

4、2結合的陽性率約60％左右，與HepG2結合的陽性率為23％左右，高于單鏈抗體，且單鏈抗體，雙價抗體與靜止外周血淋巴細胞結合陽性率基本一致。表明構建的抗轉鐵蛋白受體單鏈抗體與雙價抗體均具有與K562及Hela細胞表面TfR結合的特異性，雙價抗體親合力較單鏈抗體有所提高。 結論 成功構建與表達抗TfR的單鏈抗體與雙價抗體，并證明其具有與K562，HepG2細胞表面TfR結合的活性及特異性，雙價抗體親合力較單鏈抗體有所增強。