抗人B7-2單鏈抗體基因的構(gòu)建及表達(dá)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、鼠源性單抗在人體使用后可產(chǎn)生人抗鼠抗體（Human Anti—Mouse Antibody，HAMA）反應(yīng)，而且分子量大，不能有效進(jìn)入病灶部位，臨床使用受到限制。單鏈抗體（single chain antibody，ScFv）是由一條連接肽將IgG分子重鏈和輕鏈的可變區(qū)連接而成，減少了免疫原性，分子小，實(shí)體組織穿透力強(qiáng)，血漿半衰期短，因而在臨床疾病的診斷和治療中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。 在成功建立穩(wěn)定分泌鼠抗人B7-2雜交瘤細(xì)胞株基

2、礎(chǔ)上，擴(kuò)增并克隆出該單克隆抗體的重鏈（VH）和輕鏈（VL）可變區(qū)基因。通過重疊延伸PCR（SOE—PCR）方法，在VH和VL可變區(qū)基因之間引入連接肽（Gly4Ser）3，體外構(gòu)建抗人B7-2單鏈抗體（B7-2ScFv）基因。為便于表達(dá)產(chǎn)物的純化，在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。將其克隆至表達(dá)載體pET32a并在大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)。SDS—PAGE和Western—blot分析結(jié)果表明，抗人B7-2 ScF

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