1、在人們更多關(guān)注哺乳動(dòng)物和鳥(niǎo)類(lèi)保護(hù)的同時(shí)，卻忽略了一個(gè)龐大而古老的家族——兩棲動(dòng)物，特別是其中的蛙類(lèi)。我國(guó)蛙類(lèi)資源豐富，根據(jù)中國(guó)蛙類(lèi)目錄統(tǒng)計(jì)，我國(guó)共有蛙340余種。由于蛙類(lèi)能適應(yīng)陸地和水域的不同生存條件，加以生活環(huán)境的多變，使其感染寄生蟲(chóng)可能性的幅度亦相應(yīng)擴(kuò)大。這不僅會(huì)對(duì)蛙類(lèi)自身造成影響，而且會(huì)對(duì)人類(lèi)健康產(chǎn)生威脅。本研究旨在對(duì)實(shí)驗(yàn)室2013～2014年檢獲的蛙類(lèi)棘頭蟲(chóng)和線(xiàn)蟲(chóng)進(jìn)行感染情況調(diào)查和種類(lèi)鑒定，以便了解蛙類(lèi)寄生棘頭蟲(chóng)和線(xiàn)蟲(chóng)的概況，為

2、相關(guān)研究及防控工作的開(kāi)展奠定基礎(chǔ)。
　　1.蛙的種類(lèi)鑒定
　　為了確定用于寄生蟲(chóng)感染所剖檢蛙的種類(lèi)，利用線(xiàn)粒體12S序列對(duì)98只青蛙和84只蟾蜍的種類(lèi)進(jìn)行了鑒定。首先分批次提取青蛙和蟾蜍的肝臟、腸道或血液DNA，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序。將測(cè)序所得結(jié)果進(jìn)行BLAST對(duì)比后，利用最大似然法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果顯示，90只青蛙為黑斑蛙（Rananigromaculata），8只為虎紋蛙（Hop lobatrachus rugulo

3、 sus），84只蟾蜍為中華大蟾蜍（Buf gargarizans），這與傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果一致。
　　2.兩種蛙的棘頭蟲(chóng)和線(xiàn)蟲(chóng)感染情況的初步調(diào)查
　　對(duì)2013～2014年兩年收集的90只黑斑蛙和84只中華大蟾蜍，經(jīng)過(guò)編號(hào)后并進(jìn)行剖檢，按臟器檢查、收集寄生蟲(chóng)體，記錄并統(tǒng)計(jì)棘頭蟲(chóng)與線(xiàn)蟲(chóng)寄生部位、感染率和感染強(qiáng)度。結(jié)果顯示:在90只黑斑蛙體內(nèi)共收集棘頭蟲(chóng)和線(xiàn)蟲(chóng)550條，其中棘頭蟲(chóng)314條，線(xiàn)蟲(chóng)236條?？傮w感染率為65.56

4、％，棘頭蟲(chóng)為41.11％，線(xiàn)蟲(chóng)為50％;平均感染強(qiáng)度為9.32條。而在黑斑蛙體內(nèi)不同的臟器感染中，腸道感染率最高，為77.97％，其次為胃和肺。在84只中華大蟾蜍體內(nèi)共收集棘頭蟲(chóng)和線(xiàn)蟲(chóng)1422條，其中棘頭蟲(chóng)207條，線(xiàn)蟲(chóng)1215條。總體感染率為86.90％，棘頭蟲(chóng)為28.57％，線(xiàn)蟲(chóng)為84.52％;平均感染強(qiáng)度為19.48條。而在中華大蟾蜍體內(nèi)不同的臟器感染中，肺臟的感染率最高，為73.97％，其次為腸和生殖系統(tǒng)。通過(guò)對(duì)檢出蟲(chóng)體形態(tài)的初

5、步觀察，發(fā)現(xiàn)棘頭蟲(chóng)有1科2屬，線(xiàn)蟲(chóng)有5種。但具體是哪一種類(lèi)需要進(jìn)一步的研究。本調(diào)查結(jié)果為初步掌握上海市黑斑蛙與中華大蟾蜍寄生棘頭蟲(chóng)與線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)感染狀況和做好寄生蟲(chóng)病的防治提供了基礎(chǔ)依據(jù)。
　　3.兩種蛙的棘頭蟲(chóng)的種類(lèi)鑒定
　　本研究對(duì)黑斑蛙和中華大蟾蜍體內(nèi)檢獲的521條棘頭蟲(chóng)，按每只蛙體每個(gè)臟器至少制作一張封片的原則，結(jié)果共制作65個(gè)封片。然后進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，仔細(xì)測(cè)量棘頭蟲(chóng)吻鉤數(shù)目及排列方式、是否有體棘、睪丸的位置及排列方式、粘

6、液腺數(shù)目和排列方式以及蟲(chóng)卵形狀等特征，并與文獻(xiàn)對(duì)比。結(jié)果鑒定出2屬7種棘頭蟲(chóng)，分別是蟾蜍偽棘頭蟲(chóng)（Pseudoacanthocehpalus bufonis）、黎氏阮偽棘頭蟲(chóng)（Pseudoacant hocephalus nguye nt hileae）、里斯偽棘頭蟲(chóng)（Pseudoacant hocephalusreesei）、盧茲偽棘頭蟲(chóng)（Pseudoacanthocephalus lutzi）、斯梅爾偽棘頭蟲(chóng)（Pseudoacant

7、hocephalus smalesi）、光潔棘頭蟲(chóng)（Acant hocephalus luc idus）和蛙棘頭蟲(chóng)（Acant hocephalus ranae）。
　　4.兩種蛙的線(xiàn)蟲(chóng)的種類(lèi)的初步鑒定
　　利用分子生物學(xué)方法對(duì)從90只黑斑蛙和84只中華大蟾蜍體內(nèi)收集到的1451條線(xiàn)蟲(chóng)進(jìn)行科屬的判定，即按臟器的不同，分別提取腸道、肺、體腔、胃、肺、生殖道共13條線(xiàn)蟲(chóng)的DNA，利用線(xiàn)蟲(chóng)cox1引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后BLAST

8、比對(duì)建立ML進(jìn)化樹(shù)。最后再通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察確定線(xiàn)蟲(chóng)的種類(lèi)。結(jié)果顯示，在1451條線(xiàn)蟲(chóng)中，共有2科2屬5種，分別為棒線(xiàn)屬線(xiàn)蟲(chóng)（Rhabdias sp.）和對(duì)盲囊屬線(xiàn)蟲(chóng)（Contracaecum sp.），但是具體的種類(lèi)還需形態(tài)學(xué)的進(jìn)一步探索。
　　5.中國(guó)蛙類(lèi)寄生棘頭蟲(chóng)與線(xiàn)蟲(chóng)的種類(lèi)與地理分布
　　為了解我國(guó)蛙類(lèi)棘頭蟲(chóng)與線(xiàn)蟲(chóng)的種類(lèi)與地理分布，本文收集了報(bào)道我國(guó)蛙類(lèi)棘頭蟲(chóng)與線(xiàn)蟲(chóng)的相關(guān)文獻(xiàn)，并依據(jù)較新的棘頭蟲(chóng)與線(xiàn)蟲(chóng)分類(lèi)系統(tǒng)整理成文。共