IHHNV病毒蛋白與凡納濱對蝦圍食膜蛋白的互作研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究采用SMART技術成功構建了凡納濱對蝦腸道組織的全長cDNA文庫,經電子拼接和序列比對分析獲得了凡納濱對蝦圍食膜蛋白基因(Peritrophin)全長序列,該基因包含一個長度為828bp的開放閱讀框(openreading frame,ORF),編碼275個氨基酸,理論分子質量約30.782 kDa。進一步對所獲得的序列進行比對分析,結果顯示該序列與斑節(jié)對蝦的相似性77.3%,與短溝對蝦的相似性為76.1%,與中國對蝦的相似性為7

2、2.2%,與墨吉對蝦的相似性為62.3%。根據比對結果選取一段保守的凡納濱對蝦圍食膜蛋白基因(L.vannamei Peritrophin,LvPT)序列進行后續(xù)蛋白功能研究,LvPT序列長為687bp,編碼228個氨基酸,理論分子質量約25.829kDa。
  根據IHHNV福建株(GenBank NC_002190.2)的序列,設計開放閱讀框CP、NS1和NS2的融合表達載體引物,并構建酵母穿梭表達質粒pGBKT7-CP、pG

3、BKT7-NS1、pGBKT7-NS2和pGADT7-LvPT;酵母穿梭質粒經DDO/X/A檢測無自激活現(xiàn)象后用于蛋白互作研究。將重組菌株Y2HGold(pGBKT7-CP,pGBKT7-NS1,pGBKT7-NS2)分別和重組菌株Y187(pGADT7-LvPT)融合mating,經DDO/X/A初步篩選發(fā)現(xiàn)均有相互作用,經QDO/X/A篩選發(fā)現(xiàn)pGBKT7-CP和pGADT7-LvPT,pGBKT7-NS1和pGADT7-LvPT存

4、在較強的相互作用,而pGBKT7-NS2和pGADT7-LvPT之間的作用較弱,懷疑其為假陽性。由此可見,LvPT蛋白與IHHNV病毒間產生相互作用,而且有可能直接影響病毒侵襲機體的過程。
  此外,我們采用RNAi的方法,體外合成dsLvPT后,進行體內注射干擾LvPT基因的表達,研究IHHNV病毒在凡納濱對蝦體內復制是否受到抑制。結果表明,注射dsLvPT后,LvPT表達下調,IHHNV病毒的相對拷貝數(shù)與對照組相比顯著降低。進

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