1、目的
　　觀察CtIP在細胞周期不同時相的表達水平,探討CtIP在組織水平與細胞水平表達差異的原因;觀察SIAH1對CtIP的影響,初步探討CtIP泛素化機制及對細胞增殖、凋亡及細胞周期的影響。
　　方法
　　1、應用胸腺嘧啶核苷(TdR)誘導細胞同步化,通過流式細胞術檢測同步化效果并篩選獲得目標時相的最佳作用時間。
　　2、應用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)技術檢測人肝癌細胞系HepG2與人正常肝細胞系L

2、02未同步化及同步化不同時相中CtIP與SIAH1的表達水平。
　　3、應用RNA干擾(RNAinterference,RNAi)技術,誘導泛素化酶SIAH1基因沉默,應用qRT-PCR與蛋白免疫印跡實驗(Westernblotting)檢測SIAH1的基因干擾效率并篩選合適的siRNA(smallinterferingRNA)序列、濃度與作用時間。
　　4、應用qRT-PCR與蛋白免疫印跡實驗檢測人肝癌細胞系HepG2中S

3、IAH1基因沉默后CtIP的mRNA和蛋白表達水平。
　　5、應用WST-1細胞增殖檢測試劑、AnnexinV-FITC雙染方法和流式細胞術檢測SIAH1基因沉默后人肝癌細胞系HepG2增殖、凋亡及細胞周期變化。
　　結果
　　1、在細胞周期的G1期,CtIP在人肝癌細胞系HepG2中的表達低于人正常肝細胞系L02,P值<0.05,在(S+G2)期,CtIP的表達趨勢相反,P值<0.05,差別均具有統(tǒng)計學意義。

4、　　2、CtIP與SIAH1在肝癌細胞系HepG2的細胞周期進程中,G1期表達水平較低,越過G1/S交界后明顯升高,在2h處達到峰值,隨后迅速下降。
　　3、SIAH1基因干擾后,人肝癌細胞系HepG2中CtIP的mRNA水平表達升高,P值<0.05,差別具有統(tǒng)計學意義。CtIP蛋白質水平未檢測到明顯變化。
　　4、SIAH1基因沉默后,人肝癌細胞系HepG2增殖水平降低,P值<0.05,差別具有統(tǒng)計學意義。
　　結論