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文檔簡介
1、巴爾通體(Bartonella)是一類由節(jié)肢動物傳播,兼性細胞內(nèi)寄生的需氧小桿菌,革蘭氏染色陰性、氧化酶陰性、培養(yǎng)條件需求苛刻,能持續(xù)感染動物宿主的血管內(nèi)皮細胞、上皮細胞等。巴爾通氏體原歸為立克次氏體目,現(xiàn)劃分為α-變形菌綱(Proteobacteria),根瘤菌目(Rhizobiales),巴爾通體科(Bartonellaceae),巴爾通氏體屬(Bartonella)。隨著分子生物學分類方法的應(yīng)用,目前已有24個種及3個亞種歸為巴爾
2、通體屬,14種被確認與人類感染密切相關(guān)。人源巴爾通體感染常導致人類罹患貓抓病及桿菌樣血管瘤等,組織病理學研究發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)內(nèi)存在大量巴爾通體,提示巴爾通體具有能夠逃避宿主先天免疫吞噬的功能,但目前關(guān)于巴爾通體與巨噬細胞間相互作用的研究尚未深入開展。
本研究利用鼠源巴爾通體(Bartonella tribocorum)體外感染J774A1、RAW264.7及SD大鼠腹腔巨噬細胞,初步探索巴爾通體在巨噬細胞內(nèi)存活特性以及感染刺激巨噬細
3、胞分泌細胞因子變化影響。
一、不同巨噬細胞內(nèi)巴爾通體存活特性
首先,用Dylight405結(jié)合的羊抗兔IgG二抗、Dylight488結(jié)合的羊抗兔IgG二抗分別標記巨噬細胞內(nèi)和細胞外的巴爾通體,通過免疫熒光方法檢測巴爾通體感染J774A1和腹腔巨噬細胞的情況。熒光顯微觀察證實巨噬細胞能有效吞噬巴爾通體,細胞形態(tài)未發(fā)生顯著變化。
其次,通過巴爾通體感染J774A1、RAW264.7及腹腔巨噬細胞的慶大霉素保護
4、實驗,在不同時間點檢測巴爾通體在巨噬細胞內(nèi)的存活情況。實驗證實被吞噬的巴爾通體在不同巨噬細胞內(nèi)均能增殖及存活至48小時,并且能在LPS誘導活化的巨噬細胞中持續(xù)存活,提示胞內(nèi)感染的巴爾通體具有一定逃避巨噬細胞殺菌活性的特性。
二、巴爾通體感染巨噬細胞分泌細胞因子特性
通過熒光定量PCR的方法檢測鼠腹腔巨噬細胞與巴爾通體相互作用后,細胞因子的變化情況。研究表明,巨噬細胞與巴爾通體作用2-12h之間IL-10持續(xù)升高,IL
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