1、細胞凋亡(Apoptosis)是指細胞在一定的生理或病理條件下，遵循自身的程序，由基因調(diào)控的主動的死亡過程。從細胞凋亡這一新視角來看中醫(yī)藥抗腫瘤作用，對于從分子水平揭示中藥的作用機制，篩選新的抗癌中藥具有十分重要的意義。 莪術(shù)是姜科姜黃屬多年生草本植物的根莖，中醫(yī)常將莪術(shù)與三棱、丹參、白術(shù)等配伍應(yīng)用治療各種腫瘤。莪術(shù)醇(Curcumol)，又名姜黃環(huán)奧醇，是從莪術(shù)揮發(fā)油中提取的有效單體成份，莪術(shù)醇抗菌、抗病毒作用在臨床上已廣泛應(yīng)

2、用，但其抗腫瘤作用國內(nèi)外研究尚少。本課題對莪術(shù)醇抗腫瘤作用及其機制進行研究，力圖使莪術(shù)醇成為一種抗腫瘤新藥。 1.目的： 通過檢測莪術(shù)醇對體外培養(yǎng)的人胃癌BGC-823細胞增殖的影響、觀察細胞凋亡的形態(tài)學變化、檢測細胞凋亡率以及細胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平的變化。探討莪術(shù)醇誘導人胃癌BGC-823細胞凋亡的機制，進一步闡明莪術(shù)醇抗腫瘤的作用機理，為莪術(shù)醇抗腫瘤作用的臨床應(yīng)用提

3、供實驗依據(jù)。 2.方法： 將莪術(shù)醇溶于無水乙醇溶液，設(shè)實驗A、B、C、D組，其莪術(shù)醇濃度分別為12.5、25、50、100μg/mL。對照組用1％的無水乙醇培養(yǎng)基。 采用四氮唑鹽(MTT)法檢測不同濃度的莪術(shù)醇對人胃癌BGC-823細胞增殖的影響；采用吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)雙熒光染色及熒光顯微鏡觀察經(jīng)過不同濃度的莪術(shù)醇作用后，人胃癌BGC-823細胞中凋亡細胞的形態(tài)學變化；通過依賴性磷脂結(jié)合蛋白(FIT

4、C-Annexin V)與碘化丙啶(PI)雙染法，采用流式細胞術(shù)檢測經(jīng)過不同濃度的莪術(shù)醇作用后，人胃癌BGC-823細胞的細胞凋亡率；采用流式細胞術(shù)，通過間接熒光標記法測定經(jīng)過不同濃度的莪術(shù)醇作用后，人胃癌BGC-823細胞內(nèi)活性氧水平的變化。 3.結(jié)果： 3.1 MTT法檢測不同濃度莪術(shù)醇處理人胃癌BGC-823細胞24、48、72h，均可抑制細胞增殖，且呈濃度、時間依賴性。12.5、25、50、100μg/mL莪術(shù)醇

5、作用24、48、72h，實驗組胃癌細胞增殖的抑制率與對照組比較，差異有顯著性(P<0.05)。 3.2熒光顯微鏡觀察到EB為紅色，只能染色死亡細胞核。正?；罴毎ね暾?，EB不能滲透，細胞核不能染色。AO為綠色，可用于染色活細胞。對照組可見整個細胞為綠色，說明為正常活細胞，經(jīng)莪術(shù)醇作用后，整個細胞背景為綠色，細胞膜較完整，細胞核中紅色和綠色重合時為橘紅色，細胞核呈固縮狀或圓珠狀，即為凋亡時的形態(tài)學變化(凋亡小體)。 3.

6、3根據(jù)流式細胞術(shù)圖譜，F(xiàn)ITC+/PI-為凋亡細胞。人胃癌BGC-823細胞經(jīng)過不同濃度的莪術(shù)醇作用后，凋亡細胞比例明顯升高，且呈濃度、時間依賴性。12.5、25、50、100μg/mL莪術(shù)醇作用24、48h，實驗組胃癌細胞的凋亡率與對照組比較，差異有顯著性(P<0.05)。 3.4利用流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)活性氧水平，結(jié)果顯示經(jīng)過不同濃度莪術(shù)醇作用人胃癌BGC-823細胞后，細胞內(nèi)活性氧水平與莪術(shù)醇呈濃度、時間依賴性升高。12.