1、研究背景和目的:
　　前列腺癌是中老年男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。放射治療是前列腺癌最重要的治療方法之一。對于臨床早期的局限性前列腺癌患者，放射治療是除根治性前列腺切除術以外，另一種可達到根治性效果的治療手段。但是仍有相當一部分前列腺癌患者在接受根治性放射治療后會出現(xiàn)生化復發(fā)，甚至是臨床復發(fā)，從而導致治療失敗。因此，尋找預測前列腺癌放射治療療效的指標，或是前列腺癌放射增敏治療的靶點，具有重要的臨床意義。
　　放射線

2、對腫瘤細胞的殺傷作用的本質(zhì)可以解釋為腫瘤細胞不能修復其所引起的DNA損傷;而腫瘤細胞對IR的內(nèi)在敏感性取決于其修復DNA損傷的能力。在DNA損傷修復機制相關通路中尋找可能的療效預判標志物，或通過抑制DNA損傷修復成分來增強腫瘤的放射敏感性，是目前研究的方向。
　　睪丸孤核受體4（Testicular Orphan Nuclear Receptor4，TR4）是孤兒受體(OrphanReceptor)家族的一員。前期研究已發(fā)現(xiàn):TR

3、4在細胞對抗氧化應激損傷中起重要的作用。TR4可以通過調(diào)控Cockayne綜合征B基因(Cockayne Syndrome B，CSB)的表達，來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)的核酸切除修復機制(the nucleotide excision repair pathway,NER)，從而促進紫外線照射后所導致的DNA損傷的修復。由此可以推測，TR4可能影響到腫瘤的放射治療療效。
　　然而，目前對于TR4在前列腺癌放射治療方面所起的作用及相關機制的研

4、究尚無開展。在本研究中，我們對此進行了探索，并提出了TR4作為前列腺癌放射治療預后判斷或放療增敏靶點的潛在意義和臨床價值。
　　研究方法和結果:
　　1.TR4蛋白在人類前列腺癌組織中的表達及其與放射治療療效相關性的研究
　　我們以在浙江大學醫(yī)學院附屬邵逸夫醫(yī)院接受放射治療（主要是近距離照射治療）的前列腺癌患者為研究對象，回顧性分析其臨床隨訪資料，根據(jù)其隨訪結果劃分為生化復發(fā)組和對照組。采用免疫組織化學染色方法檢測TR

5、4蛋白在兩組患者放射治療前的前列腺癌穿刺組織標本中的表達情況。
　　研究發(fā)現(xiàn)TR4蛋白的表達水平和前列腺癌患者放射治療的療效之間存在著負相關性:出現(xiàn)生化復發(fā)者，其前列腺癌組織中TR4蛋白表達水平較高;未出現(xiàn)生化復發(fā)者，其前列腺癌組織中TR4蛋白表達水平較低。生化復發(fā)組中TR4蛋白免疫組化染色陽性結果比例為69.23％(9/13);對照組中TR4蛋白免疫組化染色陽性結果比例為15.38％(2/13); Fisher精確概率檢驗證實兩

6、組間TR4染色陽性結果比例有統(tǒng)計學差異(p=0.02)。提示前列腺癌組織中的TR4蛋白的表達水平可以預測患者放射治療的預后情況。
　　2.靶向調(diào)節(jié)TR4基因表達改變前列腺癌細胞放射敏感性的研究
　　我們選擇兩種不同的前列腺癌細胞系（PC-3和LNCaP），采用成熟的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術和RNA干擾技術來靶向調(diào)節(jié)這兩種前列腺癌細胞中的TR4基因表達水平，構建了兩種具有不同TR4基因表達水平的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞克隆:TR4 Overexpre

7、ssed的PC-3 TR4/PC-3 vector和TR Knocking-down的LNCaP shTR4/LNCaP shNC。采用多種經(jīng)典的放射生物學檢測方法（包括MTT檢測、平板克隆形成實驗等），來評估具有不同TR4基因表達水平的前列腺癌細胞的放射敏感性;并通過研究DNA損傷修復動力學初步探索了TR4基因影響前列腺癌細胞放射敏感性的可能機制。
　　研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌細胞中的TR4基因表達水平差異可以影響其放射敏感性:TR4基

8、因表達水平調(diào)高可以降低放射線造成的短期殺傷效應，TR4基因表達水平敲低可以增強放射線造成的短期殺傷效應。TR4基因表達水平調(diào)高可以增強前列腺癌細胞的克隆形成能力，TR4 Overexpressed對PC-3的放射增敏比(SER)為0.910;TR4基因表達水平敲低可以減弱前列腺癌細胞的克隆形成能力，TR4 Knocking-down對LNCaP的放射增敏比(SER)為1.243。總之，TR4基因表達水平敲低可以增強其放射敏感性，TR4基

9、因表達水平調(diào)高可以增強其放射抵抗性。靶向調(diào)控TR4基因表達可為前列腺癌的放療增敏提供潛在的新靶點。并發(fā)現(xiàn)TR4Knocking-down后，LNCaP的DSBs的再連接動力學明顯受損，初步探明TR4基因影響前列腺癌細胞放射敏感性這一現(xiàn)象可能與TR4調(diào)控參與DNA雙鏈損傷(DSBs)修復途徑有關。
　　研究結論:
　　本研究構建了具有穩(wěn)定表達不同TR4基因水平的前列腺癌細胞克隆。證實TR4基因表達水平的高低可以影響前列腺癌細胞