免疫淀粉微球的制備及其在氯霉素檢測中的應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、免疫淀粉微球是免疫學和變性淀粉技術結合而發(fā)展起來的一類新型材料。免疫淀粉微球是交聯(lián)有抗體的淀粉微球,可與含有相應抗原的靶物質特異性地結合形成新的復合物。通過離心,這種復合物可被滯留,與其它組分相分離。免疫親和分離簡便易行,分離純度高,保留靶物質活性,且高效、快速、低毒,可廣泛應用于細胞分離和提純、免疫檢測、核酸分析和基因工程、作靶向釋藥的載體等領域。 本文以可溶性淀粉為原料,環(huán)氧氯丙烷為交聯(lián)劑,Span60為表面活性劑,通過反相

2、懸浮法合成淀粉微球。制備氯霉素抗原免疫小鼠,得到鼠抗氯霉素抗體。再利用環(huán)氧氯丙烷的活化淀粉微球,在微球表面交聯(lián)上氯霉素抗體,合成免疫淀粉微球,并對免疫淀粉微球的抗體交聯(lián)率進行了研究。探討了工藝條件改變對免疫淀粉微球交聯(lián)率的影響規(guī)律。以免疫淀粉微球為固定相,采用間接法檢測抗體交聯(lián)情況,采用倒置熒光顯微鏡觀察。以交聯(lián)率為考察指標,通過優(yōu)化實驗得到了此反應的最佳合成條件。同時討論了反應時交聯(lián)率與淀粉微球粒徑和抗體濃度的匹配關系。采用標準加入法

3、測定交聯(lián)有氯霉素抗體的免疫淀粉微球分離氯霉素,紫外分光光度法檢測分離的氯霉素。 研究表明,淀粉微球的環(huán)氧活化度隨活化劑環(huán)氧氯丙烷用量的增大先增大然后基本保持不變。當環(huán)氧氯丙烷用量為0.4mL/g時,所制備的淀粉微球的活化度達到最大值。淀粉微球的環(huán)氧活化度隨振蕩反應速率的增加先增加,達到一定值后不再有明顯變化,當振蕩速率在200r/min時活化度達到恒定值。免疫淀粉微球的交聯(lián)率隨溫育時間的增大先增大而后基本保持不變,當溫育時間在1

4、小時后,免疫淀粉微球的交聯(lián)率基本不再變化。免疫淀粉微球的交聯(lián)率4℃反應時間的增加先是增大,增大幅度有限,在時間達到9小時之后,交聯(lián)率達到60%左右,之后交聯(lián)率不再上升。免疫淀粉微球的交聯(lián)率在pH值為8時,所合成的免疫淀粉微球的交聯(lián)率最大。熒光倒置顯微鏡觀察免疫淀粉微球表面呈現綠色熒光,說明在堿性條件下,交聯(lián)劑環(huán)氧氯丙烷首先與淀粉微球上羥基通過氯取代連接,而環(huán)氧基團進一步與抗體的氨基發(fā)生了交聯(lián)反應,得到了粒徑均勻,表面交聯(lián)有抗體的免疫淀粉

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