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文檔簡介
1、革蘭氏陰性細菌的膜蛋白是細胞與外界自然環(huán)境相接觸的最主要物質,在應對外界環(huán)境的變化中起著重要的作用。因此研究細菌膜蛋白尤其是外膜蛋白的組成,具有深遠的理論和現實意義。而對與膜蛋白相關的復合物的研究則有助于我們更深入地了解膜蛋白質的功能。 雖然目前已有對大腸桿菌細胞膜上的寡聚蛋白質進行系統(tǒng)的蛋白質組學鑒定的研究,但是仍沒有對其膜蛋白的復合物以及與膜蛋白相關聯的外周蛋白進行鑒定的相關報道。本文在對膜蛋白質提純方法比較的基礎上,應用月
2、桂酰肌氨酸鈉二步法獲得大腸桿菌K12的內膜組分,利用IEF技術建立其分子解剖圖譜。在2D電泳圖譜上所獲得的117個蛋白點中共鑒定出76種蛋白,并結合本實驗室已建立的大腸桿菌K12的外膜組分圖譜,鑒定出迄今為止最多的31種外膜蛋白質。 更重要的是,我們更進一步的研究發(fā)現了一些之前未被認識的膜蛋白復合物,其中一種通過western blotting、far-western blotting以及免疫共沉淀等技術證明外膜蛋白OmpW與延
3、胡索酸還原酶形成復合物。該復合物在鐵離子限制條件下,發(fā)生解離。這些研究使我們對大腸桿菌的外膜有了更深的認識。 同時,為了對OmpW所形成的多組分復合物有更深入的認識,我們研究了不同濃度的鐵離子螯合劑存在下該復合物的存在情況,以及在鐵離子受到限制的培養(yǎng)基中補加氯化鐵后培養(yǎng)出來的細菌中OmpW多組分復合物的存在情況,另外還研究了4種不同抗生素誘導下大腸桿菌膜蛋白中該復合物的情況,多項研究結果表明該復合物只受到鐵離子的影響,并沒有受到
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