1、第一章:miR-375及MTDH在前列腺癌組織的表達(dá)及臨床意義
　　目的:研究miR-375及MTDH在前列腺癌中的表達(dá)及臨床意義。
　　方法:采用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)10例PCa及癌旁非腫瘤組織中miR-375及MTDH的表達(dá)情況，研究其與PCa病理分期、分級(jí)之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:實(shí)時(shí)定量PCR發(fā)現(xiàn)，10例PCa患者與配對(duì)的癌旁非腫瘤組織相比，miR-375在PCa中的表達(dá)下調(diào)，MTDH在PCa中的表達(dá)上調(diào)，兩者

2、表達(dá)均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.01)。根據(jù)病理分期分為T(mén)1-T2和T3a組，兩組的miR-375及MTDH表達(dá)均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05);根據(jù)病理分級(jí)分為G1-G2和G3-G4組，兩組miR-375表達(dá)相比無(wú)顯著差異(p＞0.05)，MTDH表達(dá)相比有顯著差異(p＜0.05)。miR-375和MTDH在前列腺癌組織中表達(dá)存在負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r為-0.79(p＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、PCa中miR-375

3、的表達(dá)水平較癌旁非腫瘤組織明顯下調(diào)，MTDH在PCa中的表達(dá)上調(diào)，提示miR-375及MTDH表達(dá)可能與PCa發(fā)生發(fā)展相關(guān)。
　　2、miR-375及MTDH表達(dá)與PCa病理分期相關(guān)，其中MTDH還與PCa病理分級(jí)相關(guān)，提示miR-375及MTDH表達(dá)可能與PCa預(yù)后相關(guān)。
　　3、miR-375和MTDH在前列腺癌組織中表達(dá)存在負(fù)相關(guān)，提示在PCa中miR-375與MTDH之間可能存在調(diào)控關(guān)系。
　　第二章:miR-

4、375及MTDH在不同前列腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)
　　目的:探討miR-375及MTDH在PC3、DU145、LNCap前列腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)，選擇miR-375表達(dá)相對(duì)較低、MTDH表達(dá)相對(duì)較高的細(xì)胞株進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　　方法:用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)PC3、DU145、LNCap前列腺癌細(xì)胞株中miR-375及MTDH的表達(dá)情況，Western Bolt檢測(cè)PC3、DU145、LNCap前列腺癌細(xì)胞株中MTDH蛋白的表達(dá)情

5、況。
　　結(jié)果:實(shí)時(shí)定量PCR發(fā)現(xiàn)，DU145和LNCap細(xì)胞株miR-375的相對(duì)表達(dá)量均顯著低于PC3(p＜0.01)，MTDH的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于PC3(p＜0.01); Western Bolt檢測(cè)結(jié)果顯示DU145和LNCap細(xì)胞株MTDH蛋白的相對(duì)表達(dá)量均高于PC3(p＜0.01)。miR-375及MTDH的相對(duì)表達(dá)量DU145和LNCap兩者相比均無(wú)顯著差異(p＞0.05)。在LNCap細(xì)胞株中miR-375表達(dá)相

6、對(duì)較低、MTDH表達(dá)相對(duì)較高。
　　結(jié)論:
　　1、miR-375及MTDH的表達(dá)在前列腺癌不同細(xì)胞系表達(dá)并未體現(xiàn)出明顯與前列腺癌細(xì)胞惡性程度相關(guān)。
　　2、LNCap細(xì)胞株中miR-375表達(dá)相對(duì)較低、MTDH表達(dá)相對(duì)較高，選擇LNCap細(xì)胞株進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
　　第三章:miR-375與MTDH的調(diào)控關(guān)系研究
　　目的:探討在前列腺癌中miR-375與MTDH之間是否存在調(diào)控關(guān)系。
　　方法:采用

7、LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染空載體及miR-375模擬物片段于LNCap細(xì)胞株中，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)LNCap細(xì)胞株中miR-375及MTDHmRNA的表達(dá)情況，Western Bolt檢測(cè)LNCap細(xì)胞株中MTDH蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:在LNCap中，轉(zhuǎn)染空載體的陰性對(duì)照(NC)組miR-375的相對(duì)表達(dá)量低于有效轉(zhuǎn)染組，有顯著差異(p＜0.01); NC組MTDH的相對(duì)表達(dá)量高于有效轉(zhuǎn)染組，有顯著差異(p＜

8、0.01); NC組MTDH蛋白的相對(duì)表達(dá)量高于有效轉(zhuǎn)染組，有顯著差異(p＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、miR-375模擬物片段能有效的轉(zhuǎn)染于前列腺癌細(xì)胞中，上調(diào)前列腺癌細(xì)胞中miR-375的表達(dá)。
　　2、在前列腺癌細(xì)胞中，上調(diào)miR-375后能有效下調(diào)MTDH表達(dá)。
　　第四章:miR-375及MTDH對(duì)前列腺癌細(xì)胞株LNCap細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
　　目的:探討miR-375對(duì)前列腺癌細(xì)胞株LN

9、Cap細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲能力等生物學(xué)行為的影響。
　　方法:
　　1、構(gòu)建miR-375模擬物片段及MTDH干預(yù)序列，并轉(zhuǎn)染到LNCap細(xì)胞中。
　　2、實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)LNCap細(xì)胞株中miR-375及MTDH的表達(dá)，Western Bolt檢測(cè)LNCap細(xì)胞株中MTDH蛋白及PI3K/Akt通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　3、MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率，AV/PI雙標(biāo)法FCM檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況，細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)觀(guān)察細(xì)

10、胞浸襲能力。
　　4、MTT法檢測(cè)順鉑毒性預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最適藥物濃度。
　　5、LNCap細(xì)胞分六組:A前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)組;B前列腺癌細(xì)胞+miR-375模擬物轉(zhuǎn)染組;C前列腺癌細(xì)胞+miR-375模擬物轉(zhuǎn)染組+順鉑藥物;D前列腺癌細(xì)胞+順鉑藥物;E前列腺癌細(xì)胞+MTDH基因干預(yù)組;F前列腺癌細(xì)胞+ MTDH基因干預(yù)+順鉑藥物。檢測(cè)每組miR-375與MTDH的表達(dá)、細(xì)胞存活率、細(xì)胞凋亡及細(xì)胞侵襲等生物學(xué)特征。
　　結(jié)果

11、:
　　1、構(gòu)建miR-375模擬物片段及MTDH干預(yù)序列，并轉(zhuǎn)染到LNCap細(xì)胞中，細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率達(dá)到80％以上。
　　2、順鉑濃度為1ug/ml時(shí)，作用24h后腫瘤細(xì)胞存活率為83％，選擇此濃度作為下一步實(shí)驗(yàn)的作用濃度。
　　3、B、C、D、E、F組與A組比較，細(xì)胞存活率下降，有顯著差異(p＜0.05)，其中C、F組與A組比較，細(xì)胞存活率明顯下降，有顯著差異(p＜0.01);C、F組與D組比較，細(xì)胞存活率明顯下降，

12、有顯著差異(p＜0.01);B、C組分別與E、F比較，細(xì)胞存活率降低，有顯著差異(p＜0.05)。
　　4、與A組比較，其它各組凋亡率增高，有顯著差異(p＜0.01)，其中C、F組與A組比較，細(xì)胞凋亡率增高明顯，有顯著差異(p＜0.01);C、F組與D組比較，細(xì)胞凋亡率增高明顯，有顯著差異(p＜0.01);B、C組分別與E、F比較，細(xì)胞凋亡率增高明顯，有顯著差異(p＜0.05)。
　　5、與A組比較，其它各組細(xì)胞數(shù)量下降，有

13、顯著差異(p＜0.01)，其中C、F組與A組比較，細(xì)胞侵襲數(shù)量下降明顯，有顯著差異(p＜0.01);C、F組與D組比較，細(xì)胞侵襲數(shù)量下降明顯，有顯著差異(p＜0.01);B、C組分別與E、F比較，細(xì)胞侵襲數(shù)量下降明顯，有顯著差異(p＜0.05)。
　　6、A組的MTDH、p-PI3K-p85、Akt及p-Akt表達(dá)高于E組，差異有顯著性(p＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1、miR-375高表達(dá)及MTDH低表達(dá)抑制了前