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文檔簡介
1、微生物催化法生產丙烯酰胺具有反應條件溫和、選擇性高、產品純度高和收率高等優(yōu)點。微生物菌種腈水合酶的合成能力是影響丙烯酰胺生產水平和經濟效益的關鍵因素。本文從采集土樣中分離到一株能利用丙烯腈生產丙烯酰胺的菌株，采用16S rRNA等現(xiàn)代分類技術并結合生理生化實驗等經典分類技術對該菌株進行了分類鑒定。同時還研究了該菌株產酶條件和丙烯酰胺轉化條件。
通過對長期被腈化物污染的土壤中的微生物富集培養(yǎng)和篩選，得到一株具有腈水合酶活力為
2、428U/mL的菌株ZH8，且該菌株表現(xiàn)出較強的底物耐受性。通過形態(tài)觀察、生理生化實驗、16S rRNA基因序列分析和BIOLOG系統(tǒng)鑒定方法，該菌株鑒定為紅球菌屬（Rhodococcus）菌種，命名為Rhodococcus sp.ZH8。
建立了Rhodococcus sp.ZH8的產酶條件，發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖15g/L、酵母粉5g/L、尿素7g/L、Co2+10 × 10-5mol/L、KH2PO40.5g/L、K2H
3、PO40.5g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、谷氨酸鈉1g/L；培養(yǎng)條件：種齡25h、接種量6％、培養(yǎng)溫度28℃、轉速180r/min。菌體培養(yǎng)60h后酶活達到了855U/mL。
Rhodococcus sp.ZH8的生長過程表明培養(yǎng)液pH，殘余葡萄糖含量、細胞密度與酶活之間存在相關性。優(yōu)化后產酶條件：培養(yǎng)液pH維持在7.0左右、菌體培養(yǎng)24h后添加的尿素為9g/L，培養(yǎng)周期為72h，發(fā)酵結束后酶活達到了4628
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