1、研究目的:觀察神經(jīng)生長因子(NGF)在星形膠質(zhì)瘤組織及腦脊液標本中的表達特點,探討其在膠質(zhì)瘤診斷及預后判斷中的臨床意義。并利用NGF在膠質(zhì)瘤中特異性核轉(zhuǎn)位的現(xiàn)象,以NGF為“載體",125I為“彈頭”,制備細胞核靶向抗膠質(zhì)瘤藥物125I-NGF并評價其對U251細胞的殺傷作用。
　　 研究方法:
　　 (1)收集94例星形膠質(zhì)瘤組織及術(shù)前腦脊液標本,通過免疫組織化學染色觀察NGF在膠質(zhì)瘤細胞中的核陽性表達,并采用ELIS

2、A法定量檢測膠質(zhì)瘤組織及腦脊液中NGF的表達水平,進一步通過免疫印跡分析,觀察膠質(zhì)瘤組織及腦脊液中所表達的NGF的分子形式。收集患者臨床資料,隨訪患者預后,分析NGF的核陽性表達與膠質(zhì)瘤病理分級及預后的相關(guān)性。
　　 (2)為了探討NGF的核陽性表達是否具有膠質(zhì)瘤細胞特異性,進一步對顱內(nèi)最常見的良性腫瘤--腦膜瘤進行NGF免疫組織化學染色并隨訪患者的復發(fā)情況。探討NGF核陽性表達與Ki67和PR陽性表達及患者預后的相關(guān)性。

3、>　　 (3)采用聯(lián)結(jié)標記法將俄歇電子發(fā)射體125I與NGF進行偶聯(lián)得到125I-NGF。通過平板克隆形成試驗觀察給藥后U251細胞的增殖能力、流式細胞儀檢測各細胞周期細胞比例、彗星試驗及微核形成試驗觀察膠質(zhì)瘤細胞DNA損傷情況,評價125I-NGF對U251細胞的殺傷作用。
　　 研究結(jié)果:
　　 (1)NGF在星形膠質(zhì)細胞瘤中高表達,分布于細胞漿及細胞核。在對照組腦組織中NGF主要定位于細胞漿。
　　 (2

4、)Ⅲ-Ⅳ級星形膠質(zhì)瘤中NGF和核陽性率為70.0％,顯著高于Ⅰ-Ⅱ級星形膠質(zhì)瘤。NGF核陽性率與膠質(zhì)瘤病理分級正相關(guān)。NGF核陽性率與Ki67陽性率正相關(guān)。生存分析結(jié)果提示:在Ⅰ-Ⅱ級星形膠質(zhì)瘤患者中,NGF核陽性及NGF核陰性表達患者的中位無進展生存期(PFS)分別為25和42月。在Ⅲ-Ⅳ級星形膠質(zhì)瘤患者中,NGF核陽性及NGF核陰性表達患者的PFS分別為7和24月。
　　 (3)膠質(zhì)瘤組織及腦脊液中NGF表達水平高于對照組,

5、高級別膠質(zhì)瘤中NGF表達水平高于低級別。在膠質(zhì)瘤組織中存在13和36 kDa兩種分子形式的NGF表達,但腦脊液中僅有單一分子形式的36 kDaNGF表達。NGF核陽性率與腦脊液中NGF表達水平正相關(guān)。
　　 (4)NGF核陽性率與腦脊液中36 kDa NGF的表達量呈正相關(guān)。NGF核陽性率與膠質(zhì)瘤組織提取液中NGF含量無顯著相關(guān)。
　　 (5)Cox回歸分析結(jié)果:膠質(zhì)瘤病理分級、NGF核陽性表達及腦脊液中NGF表達量與膠

6、質(zhì)瘤患者預后顯著相關(guān)。
　　 (6)對腦膜瘤組織的NGF免疫組織化學染色結(jié)果表明:NGF在腦膜瘤中亦存在核陽性表達,NGF核陽性率與Ki67陽性率正相關(guān),與PR陽性率呈負相關(guān)。NGF核陽性及NGF核陰性組患者的PFS分別為36±2.484和59±2.295月,差異具有顯著性。
　　 (7)通過聯(lián)結(jié)標記法將放射性核素125I與NGF偶聯(lián)得到的產(chǎn)物125I-NGF在體外性質(zhì)穩(wěn)定,對U251細胞的最低有效濃度為:592kBq／

7、ml。在此濃度下,125I-NGF可以進入細胞核,損傷靶細胞DNA。125I-NGF處理組U251細胞克隆形成率(0.02±0.01)顯著低于對照組(0.33±0.02)。流式細胞儀分析結(jié)果提示:125I-NGF處理組U251細胞S期細胞比例為10.69±0.02,較對照組35.47±0.02顯著下降。
　　 結(jié)論:
　　 (1)盡管NGF核陽性表達不具有膠質(zhì)瘤細胞特異性,在腦膜瘤等良性腦腫瘤中亦呈核陽性表達,但NGF核

8、陽性表達均與Ki67陽性率正相關(guān),與患者不良預后密切相關(guān)。NGF核陽性表達作為反映腫瘤細胞增殖活性的指標。
　　 (2)膠質(zhì)瘤患者腦脊液中NGF表達水平與NGF核陽性表達及患者預后密切相關(guān)。由于腦脊液取材方便,可以反復取材。結(jié)合影像學檢查結(jié)果,動態(tài)監(jiān)測腦脊液中NGF表達水平可以反映膠質(zhì)瘤病情活動性及治療效果。
　　 (3)根據(jù)NGF在膠質(zhì)瘤、腦膜瘤等高增殖腫瘤細胞中特異性核表達的特點,以NGF為“載體”,偶聯(lián)俄歇電子發(fā)射