1、人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)屬乳多空病毒科，是一類特異感染人皮膚和粘膜的雙鏈閉合環(huán)狀DNA病毒，具有種屬特異性，不能在培養(yǎng)基中生長，主要感染人體表皮細胞或黏膜上皮，引起感染部位發(fā)生病變。目前已分離出100多型HPV，分為低危型和高危型。低危型主要有6，11，34，44型等，與粘膜上皮的良性腫瘤有關，主要導致乳頭狀瘤，尖銳濕疣，低度子宮上皮內瘤變等，高危型有16，18，31，33，35，39型等，與宮頸

2、癌密切相關，90％以上的宮頸癌組織中可以檢測到HPV，其中HPV16所占比例最高檢測率超過50％，所以，在疫苗研發(fā)中主要針對HPV16的研究，對宮頸癌的預防及治療具有十分重要的意義。
　　 HPV基因分為3部分，早期基因(E區(qū))、晚期基因(L區(qū))、無編碼的長控制區(qū)(Long Control region，LCR)。E區(qū)有6個開放性閱讀框架(E1、E2、E4、E5、E6、E7)，其中高危HPV的E6、E7編碼蛋白是使正常細胞惡變的

3、主要轉化蛋白，共同促進病毒復制，使感染細胞持續(xù)性增生，并使腫瘤抑制基因失效，HPV E6與抑癌基因p53作用，使其失去在細胞周期中的DNA糾錯功能，HPV E7則抑制pRb，進而激活誘導促進細胞周期持續(xù)循環(huán)的基因，使其組織持續(xù)增生，E6、E7基因在宮頸癌持續(xù)發(fā)展中起重要作用。研制安全、有效、經(jīng)濟的HPV疫苗，對于防治宮頸癌具有十分重要的意義。
　　 本研究成功構建了以HPV16E6E7基因重組質粒pcDNA-E6E7，免疫小鼠，

4、評價HPV16E6E7基因疫苗的免疫效應。方法：酶切重組質粒pGEM-T-E6E7，將E6E7基因插入真核表達載體pcDNA3.1(-)中，構建HPV16E6E7基因重組質粒pcDNA-E6E7，經(jīng)限制性內切酶和序列檢測鑒定后轉染COS-7細胞，通過IFA法驗證HPV16E6E7能在體外培養(yǎng)的真核細胞中暫態(tài)表達。將構建成功的重組質粒經(jīng)大量制備和純化后，以聚乙烯胺(polyethylenimine，PEI)為佐劑包裹，肌肉注射6周齡BAB

5、L/c小鼠,同時設原載體pcDNA3.1(-)和生理鹽水為對照組，每隔2周注射一次，共注射3次，在最后一次免疫后兩周在小鼠眼底靜脈采血，分離血清，IFA法分析基因免疫在小鼠體內誘導的體液免疫應答和細胞免疫應答。結果構建的HPV16E6E7基因重組質粒pcDNA-E6E7，能在COS-7細胞中暫態(tài)表達，免疫小鼠的血清中可檢測到抗E7抗體，而原載體pcDNA3.1(-)和生理鹽水注射后，未檢測出特異的抗E7抗體；通過ELISA定量檢測細胞因

6、子IL-2和IFNγ分泌情況，實驗組產(chǎn)生的IL-2明顯高于對照組與空白組，P＜0.01；實驗組產(chǎn)生的IFNγ明顯高于對照組與空白組，P＜0.05各組間差異具有統(tǒng)計學意義。實驗結果表明構建的HPV16E6E7基因疫苗能夠在體外培養(yǎng)的細胞中暫態(tài)表達，免疫小鼠后通過IFA法和ELISA定量檢測分析該疫苗株可誘導小鼠產(chǎn)生特異性的體液免疫反應和細胞免疫反應。
　　 本文通過HPV16E6E7的基因疫苗的基礎研究為HPV感染性疾病相關性疫苗