1、本研究采用了基因克隆表達及蛋白純化，Western-blot等分子生物學手段，希望通過該研究推進口服或飼喂疫苗來更有效并且方便的預防治療病毒性腫瘤疾病。 首先，我設計一對引物，通過克隆擴增得到了鼠源白細胞介素4基因。將這段基因段克隆到pGEM-Teasy載體，經測序確定序列正確后，我分別將這段基因克隆到pGEX-KG和pET28a表達載體。在IPTG的誘導下，這兩段基因分別在大腸桿菌DH5α和BL21中都得到了高效表達。表達產物

2、的大小分別為42kDa、18.6kDa。純化mIL4-GST融合蛋白免疫蛋雞和兔子制備卵黃抗體和兔血清抗體。該抗體可與原核表達的mIL4-GST和mIL4-his融合蛋白發(fā)生特異性免疫反應。該抗體的獲得為深入研究mIL4蛋白的功能提供了基礎。 通過相同的分子生物學克隆表達技術成功的表達了鼠源白細胞介素4與雪花蓮凝集素的融合蛋白(pET28a-mIL4GNA)，融合蛋白大小約為27kDa。純化該融合蛋白，然后該融合蛋白飼喂balb

3、/c小鼠，每只一周飼喂一次，每次用量約400ug，共灌喂四次。最后取血，用Dot-blot檢測血清中含有鼠源白細胞介素4。但是我們檢測到鼠源白細胞介素4的抗體。同時解剖BALB/c小鼠檢查，并沒有有任何病理變化。 綜上所述，初步鑒定雪花蓮外源凝集素具有攜帶外源蛋白進入血液循環(huán)的功能。以后我們將通過其它手段表達有蛋白活性的融合蛋白(pET28a-mIL4GNA)，通過其它實驗方法進一步驗證雪花蓮外源凝集素的功能，深入探討雪花蓮外源