1、禽流感由禽流感病毒（AIV）引起，感染雞群后會(huì)引發(fā)呼吸道疾病和產(chǎn)蛋下降，嚴(yán)重時(shí)引起死亡，是危害我國(guó)家禽養(yǎng)殖業(yè)的主要傳染??；同時(shí)AIV還能感染人類，嚴(yán)重威脅公共衛(wèi)生安全，所以對(duì)其進(jìn)行深入的研究具有重要的意義。
　　AIV具有多種亞型，并在致病力上存在明顯差異，而迅速準(zhǔn)確的確定AIV的亞型，是采取有效措施，正確防治禽流感的前提。AIV依據(jù)其囊膜表面糖蛋白：血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的抗原性差異進(jìn)行亞型分類。HA亞型可通過(guò)血凝抑

2、制試驗(yàn)（HI）快速確定，而NA亞型的鑒定方法主要為神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)（NI），該試驗(yàn)過(guò)程復(fù)雜，耗時(shí)費(fèi)力，無(wú)法滿足實(shí)際需要。為構(gòu)建快速的NA亞型診斷方法，本實(shí)驗(yàn)利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，分別構(gòu)建表達(dá)不同亞型NA蛋白的桿狀病毒，最終成功表達(dá)出具有生物學(xué)活性的N1-N9亞型NA蛋白。隨后，對(duì)各亞型NA蛋白的ELISA檢測(cè)條件進(jìn)行了細(xì)致的摸索，為下一步構(gòu)建NA亞型的ELISA快速檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ)。
　　AIV的非結(jié)構(gòu)蛋白1（NS1）能夠與細(xì)

3、胞中多種宿主因子相互作用，在AIV侵染病毒過(guò)程中發(fā)揮多種功能。為鑒定與NS1結(jié)合的新的宿主蛋白，本研究以AIV GD1322株感染人肺泡上皮細(xì)胞（A549），利用NS1的單克隆抗體進(jìn)行免疫沉淀反應(yīng)篩選宿主因子。質(zhì)譜鑒定提示NS1與膜聯(lián)蛋白A2（ANXA2）存在相互作用，該結(jié)果通過(guò)免疫共沉淀試驗(yàn)（co-IP）得到證實(shí)。激光共聚焦試驗(yàn)表明NS1與ANXA2共定位于胞漿中，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，利用siRNA敲除ANXA2后能有效抑制H5N1 AI

4、V的增殖，而過(guò)表達(dá)ANXA2后結(jié)果正好相反，表明ANXA2具有促病毒增殖作用，與NS1的功能相符，暗示兩者互作可能利于NS1發(fā)揮作用。另外，質(zhì)譜鑒定還提示NS1與人凋亡誘導(dǎo)因子1（AIFM1）存在相互作用，結(jié)果同樣經(jīng)co-IP得到驗(yàn)證，且Pull-down試驗(yàn)證明AIFM1直接與NS1蛋白的功能結(jié)構(gòu)域（ED）結(jié)合，激光共聚焦試驗(yàn)表明兩者共定位于胞漿中。本研究鑒定AIV NS1蛋白與宿主蛋白ANXA2、AIFM1間存在相互作用，為進(jìn)一步深