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1、小麥(Triticum aestivum L.)是世界上最重要的糧食作物之一,為全球45億人口提供了21%的谷物能量來源。目前,全球公認(rèn)的對(duì)小麥生產(chǎn)最具有經(jīng)濟(jì)危害性的植物線蟲為禾谷類作物孢囊線蟲。在我國(guó),禾谷孢囊線蟲H.avenae和菲利普孢囊線蟲H.filipjevi是發(fā)生分布最為嚴(yán)重的小麥孢囊線蟲。已有16個(gè)省市區(qū)報(bào)道發(fā)現(xiàn)了H.avenae和H.filipjevi。影響小麥種植面積達(dá)400萬公頃,每年造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)190億人民幣,
2、對(duì)我國(guó)小麥的增產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)有十分嚴(yán)重的威脅。
作物孢囊線蟲口針分泌的蛋白類物質(zhì)可以軟化、降解植物細(xì)胞壁組織、在植物線蟲取食位點(diǎn)建立和寄主互作的過程中發(fā)揮著重要的作用。國(guó)內(nèi)外對(duì)小麥孢囊線蟲與小麥互作的分子機(jī)制和效應(yīng)蛋白的功能研究剛剛起步。本研究通過高通量測(cè)序技術(shù)分別測(cè)定了禾谷孢囊線蟲H.avenae和菲利普孢囊線蟲H.filipjevi生活史五個(gè)齡期的轉(zhuǎn)錄組。在禾谷孢囊線蟲H.avenae中獲得了82,549個(gè)unigenes,74
3、7個(gè)為碳水化合物活性酶(CAZymes)編碼基因;1,634個(gè)與已報(bào)到的植物寄生線蟲效應(yīng)蛋白具有同源性,預(yù)測(cè)獲得效應(yīng)蛋白63個(gè)。在菲利普孢囊線蟲H.filipjevi中獲得了106,755個(gè)unigenes,885個(gè)為CAZymes編碼基因;1,706個(gè)與已報(bào)到的植物寄生線蟲效應(yīng)蛋白具有同源性,預(yù)測(cè)獲得新效應(yīng)蛋白87個(gè)。根據(jù)比對(duì)篩選,分別在H.avenae和H.filipjevi中發(fā)現(xiàn)了115和107個(gè)具有RNAi表型致死的基因。在H.
4、avenae和H.filipjevi的預(yù)測(cè)效應(yīng)蛋白中分別隨機(jī)選取了23和24個(gè)unigenes進(jìn)行qRT-PCR分析。結(jié)果表明,所有基因均至少可以在H.avenae和H.filipjevi其中一個(gè)齡期表達(dá)。同時(shí)選取24個(gè)預(yù)測(cè)效應(yīng)蛋白進(jìn)行原位雜交檢測(cè),結(jié)果顯示有21個(gè)效應(yīng)蛋白在J2s食道腺(亞腹食道腺或背食道腺)細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)。3個(gè)具有RNAi表型致死的基因和2個(gè)預(yù)測(cè)效應(yīng)蛋白經(jīng)體外RNAi干擾沉默后,可以顯著的抑制白雌蟲的形成。
5、 2012-2014年度,從CIMMYT提供的51分?jǐn)y帶Cre抗性基因(Cre1,Cre2,Cre3,Cre5,Cre7,Cre8,CreR和Pt)的小麥品系中,利用H.avenaeHa91致病型群體,共鑒定獲得了1個(gè)免疫品種,5個(gè)抗病品種。攜帶Cre3基因的小麥對(duì)H.avenae Ha91致病型群體的孢囊繁殖力抑制作用最強(qiáng)。攜帶Cre1,Cre2,Cre7,Cre8和CreR基因的小麥對(duì)H.avenaeHa91致病型群體表現(xiàn)為高感病性
6、。在Pluronic F-127凝膠中感病品種根尖誘集能力顯著的強(qiáng)于免疫品種和抗病品種。感病品種與免疫和抗性品種相比,更易被二齡幼蟲侵染。免疫寄主根內(nèi)侵染的二齡幼蟲不能完成生活史。在免疫和抗病品種內(nèi)侵染的幼蟲均有延遲發(fā)育的現(xiàn)象。同樣地,在感病寄主根內(nèi),合胞體隨著幼蟲的發(fā)育而逐步增大,合胞體代謝活躍,細(xì)胞質(zhì)環(huán)流加速,核仁增大。在抗性寄主根內(nèi)形成合胞體的時(shí)間會(huì)晚于感病品種,在幼蟲發(fā)育的后期會(huì)受到抑制,從而發(fā)生代謝緩慢和降解。免疫品種根內(nèi)誘導(dǎo)
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