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文檔簡介
1、小麥孢囊線蟲(cereal cyst nematode,CCN,Hetorodera avenae)病在世界范圍造成嚴重的危害,是制約小麥及大麥生產的主要因素之一。為明確山東泰安小麥孢囊線蟲的孵化特點,于2012年對自然及室內條件下的小麥孢囊線蟲在室內離體條件下,開展了溫度及無機離子對其孵化影響的試驗;為了明確小麥孢囊線蟲在解除滯育過程中生理變化,本研究對3種不同滯育程度孢囊的幾種代謝物質進行了比較;為了深入研究小麥孢囊線蟲的滯育機制及
2、大豆孢囊線蟲(soybean cyst nematode,SCN,Heterodera glycines)白色雌蟲與褐色孢囊的蛋白質差異,本研究分別對兩種孢囊的蛋白質組進行了分析。研究結果如下:
?、挪煌瑴囟葘π←滄吣揖€蟲孵化的影響。通過試驗,發(fā)現小麥孢囊線蟲孢囊卵和自由卵對溫度處理的響應一致。未經低溫處理的孢囊卵和自由卵無線蟲孵出,4℃低溫處理能使小麥孢囊線蟲解除滯育,15℃溫育是孢囊卵和自由卵孵化的最適溫度,4-15℃線蟲孵
3、出量明顯高于15℃、15-4℃、4-25℃、15-25℃、25℃恒溫、25-4℃、25-15℃等溫度處理。將孢囊置于4℃低溫處理150d后,其最高累積孵化率達到72%,明顯高于4℃低溫處理30d后轉至15℃溫育的孵化率(56.2%)。小麥孢囊線蟲白色雌蟲在4℃、15℃、20℃、25℃四個溫度處理下均沒有線蟲孵出,溫度越低其變褐的速度越慢。白色雌蟲內的卵處于不同的發(fā)育時期,其中O(幼蟲形成)時期形態(tài)的卵占12.7%,絕大多數的卵都處于發(fā)育
4、初期階段。隨著時間的延長,初期形態(tài)的卵逐漸發(fā)育,N(原腸形成)、O兩發(fā)育時期的卵逐漸增多,尤其O時期的卵,在30d時達到72.7%。
?、撇煌臒o機離子對小麥孢囊線蟲孵化的影響。本試驗供試5種無機化合物CaCl2、 MgCl2、 FeCl3、ZnCl2、 CuCl2,分別作用于自然狀態(tài)下滯育的小麥孢囊線蟲、非滯育的小麥孢囊線蟲及經低溫處理后仍滯育的小麥孢囊線蟲,發(fā)現Zn2+溶液對小麥孢囊線蟲有明顯的刺激作用,且對非滯育CCN的刺
5、激作用更加明顯,Fe3+溶液也表現一定的刺激作用,但其作用明顯小于Zn2+溶液,且在試驗過程中,Zn2+溶液中孵化出的線蟲是活動的,而Fe3+溶液中的線蟲是僵直不動的。其機制還有待進一步研究。
?、切←滄吣揖€蟲在解除滯育過程中代謝產物的變化。小麥孢囊線蟲具有高溫滯育,低溫解除滯育的特性。滯育的小麥孢囊線蟲經4℃0周、5周和10周,在誘導解除滯育的過程中總糖的含量沒有顯著性變化;糖原的含量是逐漸下降;低溫處理10周的孢囊海藻糖的含
6、量明顯降低;甘油含量明顯降低;海藻糖酶及酯酶的活性明顯增高;酯酶同工酶電泳中,4℃-10周的孢囊的電泳條帶最多,共有4個條帶,其遷移率Rf值依次為0.21、0.24、0.30、0.34。小麥孢囊線蟲的非滯育率越高,其蛋白質含量也就越高。在蛋白質SDS-PAGE電泳圖譜中滯育的孢囊和4℃-5周的孢囊有分子量15.5KDa的譜帶而4℃-10周的孢囊沒有,同時分析結果表明該蛋白在滯育孢囊的蛋白中所占比例最大;4℃-5周孢囊的21.8KDa蛋白
7、譜帶比較淺,蛋白量較少。
⑷小麥孢囊線蟲及大豆孢囊線蛋白質組的分析。利用雙向電泳技術分離兩種孢囊的全蛋白,得到差異蛋白點,質譜分析鑒定差異蛋白。H.avenea滯育和非滯育卵中分別有409、412個蛋白表達,二者共同表達蛋白質401個,差異蛋白19個,質譜鑒定出10個差異蛋白質;大豆孢囊線蟲白色雌蟲及褐色孢囊分別表達了176、78個蛋白點,差異蛋白點有165個;質譜鑒定出共同表達蛋白11個,差異蛋白65個。差異蛋白功能分析表明
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